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1.
基于细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)的细胞疗法是癌症治疗的关注热点之一,获得足够数量具有功能的效应细胞是临床应用的重要环节,而实现效应细胞高密度培养,减少培养体积,是降低治疗成本的有效途径。黄原胶作为一种信号分子,具有调控细胞增殖的活性。为此,以外周血单个核细胞为研究对象,以总细胞扩增倍数、效应细胞比例和扩增倍数,以及扩增后CIK细胞对K562细胞的杀伤活性为评价指标,考察了黄原胶对CIK细胞体外高密度扩增的影响。结果显示:当接种密度为4×106 cells×mL~(-1)时,在含有100μg×mL~(-1)黄原胶的无血清培养基中,总细胞扩增倍数可达到150.0±29.1,显著高于不含黄原胶对照组的41.1±5.1(p0.05);CD3+CD56+细胞的比例和扩增倍数分别为(16.7±7.6)%和321.4±48.6,显著高于对照组的(13.2±6.8)%和71.4±31.3(p0.05);而且添加黄原胶时扩增后CIK细胞对K562细胞杀伤活性的均值可从28.7%增加到34.3%。该研究结果可为CIK细胞体外扩增过程的优化提供技术支持。  相似文献   
2.
软骨组织工程生物支架材料的内部结构(如孔结构)对于细胞行为有着重要影响。3D打印技术可以实现对支架结构的精确控制。聚己内酯(poly(ε-caprolactone),PCL)是广泛应用的组织工程支架材料,具有良好的生物相容性,支持多种细胞的黏附、增殖和基质分泌。3D打印制备的PCL多孔支架包含相邻三部分,每部分由六层纤维堆积,相邻两层的纤维夹角分别为30、45和60°,而同层中纤维间距为分别为450、400和300μm;力学性能测试梯度支架的杨氏模量在47 MPa左右,与天然软骨组织20 MPa相匹配;微断层扫描和扫描电镜观察支架表面和内部形貌的结构特征,Image J软件对支架特征参数进行量化分析。支架表面和内部形貌规整,呈现孔结构梯度分布,具有良好的孔连通性和57%左右的孔隙率,孔径梯度大小为342~747μm。经细胞接种培养后,应用扫描电镜、CCK8检测和死活染色方法分析支架材料对细胞生长及活性的影响。梯度支架能够很好地支持细胞生长和活性。研究通过对支架材料的设计和制备为软骨组织工程研究奠定了基础。  相似文献   
3.
采用改良双层板方法从酸性矿坑水(AMD)中筛选、鉴定并命名为氧化效果最佳的分离株—嗜铁钩端螺旋菌(Leptospirillum ferriphilum)LJ-02。当温度在36~46℃范围内,矿石氧化率呈现出先升后降的趋势;降低pH对提高细菌氧化能力有着显著影响;在接种量不超过10%(v/v)的条件下,接种量的提高有利于矿石的生物氧化。该菌株对难处理金矿的吸附属于Langmuir等温吸附,其吸附平衡常数为8.72"10-10 mL/cells,单位质量矿物颗粒的最大吸收能力为1.99"109 cells/g。  相似文献   
4.
目的探讨pH值和盐浓度对金属螯合亲和层析(Immobilized metal ion affinity chromatography,IMAC)分离含His-Tag标签的人胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)融合蛋白的影响,并确定最佳洗脱条件。方法在0.50mol/L盐浓度条件下,分别取pH6.0、7.0、7.8和9.04种缓冲液进行咪唑梯度洗脱;在合适的pH值条件下,分别取氯化钠浓度0.25、0.50和0.75mol/L3种缓冲液进行咪唑梯度洗脱。分析在不同pH值及盐浓度条件下洗脱融合蛋白所需要的咪唑浓度及回收率。结果在所考察的pH值范围内,洗脱融合蛋白所需的咪唑浓度随洗脱液pH值的升高而逐渐降低,当洗脱液pH值为7.8时,融合蛋白的分离效果最佳,大部分杂蛋白被0~40mmol/L咪唑洗脱液去除且不含融合蛋白,而绝大部分融合蛋白在咪唑浓度达80~200mmol/L时被洗出,总回收率达(83.7±1.0)%,且比例较高;在此pH值条件下,氯化钠浓度达0.75mol/L,才会影响融合蛋白的回收率,氯化钠浓度为0.25或0.50mol/L的洗脱液洗出融合蛋白的效果相近;在pH7.8,含0.25mol/L氯化钠的洗脱体系下,用50mmol/L咪唑溶液洗脱杂蛋白,200mmol/L咪唑溶液洗脱融合蛋白,融合蛋白的回收率和比例分别可达(85.2±2.0)%和(80.5±1.0)%。结论在所考察的pH值和盐浓度范围内,提高洗脱液pH值和盐浓度均可降低洗脱融合蛋白需要的咪唑量,但也会降低融合蛋白的回收率。  相似文献   
5.
胎儿脐血作为造血干细胞的一个新来源,具有富含CD34+细胞等造血干/祖细胞,增殖速度快,来源充足,收集安全等优点;脐血移植同样具有安全性好,效率高,费用低等优势。随着脐血干细胞移植临床应用的成功,欧美许多发达国家已着手建立大规模脐血库以满足临床需求。由于脐血库液氮保存细胞费用昂贵,技术上要求预先分离脐血单个核细胞以减少冻存体积。同时还需要改善细胞冷冻保护剂组成,控制降温速率和细胞复苏方法,以获得理想的脐血干/祖细胞收率,满足临床需求  相似文献   
6.
AQC柱前衍生高效液相色谱法测定动物细胞培养基中氨基酸   总被引:1,自引:0,他引:1  
以α-氨基丁酸为内标,6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯为柱前衍生试剂,用高效Nova-Pak C18柱,乙酸钠溶液(pH5.70)和60%乙腈为流动相,采用二元梯度洗脱,紫外检测器在248nm波长检测,建立了一种新的柱前衍生反相HPLC法同时测定动物细胞培养基中谷氨酰胺在内19种氨基酸.方法重现性好,精密度高.氨基酸的峰面积-浓度线性范围为20~500 μmol/L,线性相关系数均大于0.99,峰面积的精密度为1.55~10.8%.在该色谱条件下获得了良好的商用细胞培养基DMEM和F12中氨基酸的色谱图,为动物细胞生长代谢研究提供了有利的实验手段.  相似文献   
7.
氨基酸的浓度与配比对细胞生长和产物表达有重要作用。在自主研发无血清培养基的基础上,通过单纯型格子实验设计优化氨基酸浓度及配比后发现,优化的无血清培养基明显促进了细胞生长。生物反应器批式培养中,最高活细胞密度达52.6×105 cells·mL-1,抗体融合蛋白产量52.2 mg·L-1,相对于商业培养基Ex-cell 302,分别提高了26.7%和11.5%。在此基础上,通过部件搜索的方法确认具有显著正影响的氨基酸为谷氨酰胺、脯氨酸和甲硫氨酸。基于上述研究工作,在2 L反应器采用自主研发的优化无血清培养基,以葡萄糖为关键控制参数,进行两阶段动态流加培养过程,CHO细胞最大活细胞密度达94.6×105 cells·mL-1,抗体融合蛋白终产量600 mg·L-1,相对于商业培养基Ex-cell 302批式培养,分别提高了2.75倍和11.8倍。本研究工作为抗体融合蛋白的高效工业化生产奠定了基础。  相似文献   
8.
9.
人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)作为一种多潜能干细胞有望应用于骨组织工程.但是,传统的静态培养和诱导方法并不利于间充质干细胞的体外扩增和成骨分化.实验通过考察和比较在孔板中静态及微载体动态培养条件下hAMSCs的扩增与成骨诱导,以建立集间充质干细胞增殖和成骨分化诱导为一体的动态培养体系.将hAMSCs接种到Cytod...  相似文献   
10.
在自主研发无蛋白培养基的基础上,考察了氨基酸、维生素和葡萄糖对CHO细胞生长、代谢与抗体合成的影响。结果表明,对培养过程中消耗较多的氨基酸进行补充,虽然不能促进细胞生长,但有利于培养后期细胞活性维持与抗体合成;B族维生素的添加能促进细胞生长并延长培养时间;作为重要的碳源和能源,葡萄糖浓度较高时会抑制细胞生长,而浓度较低时不能有效支持细胞生长与抗体合成,维持其在适当浓度有利于细胞生长并能延长培养时间,从而有利于提高抗体产量。通过合理调整各营养物的浓度配比形成了优化的无蛋白培养基,CHO细胞在该培养基中的最高密度达到52.6×105cells mL 1,抗体产量达到274 mg L 1,与初始培养基相比分别提高了33%和63%。总之,在细胞培养过程中应维持充足且平衡的营养物成分,以有效供应细胞生长与抗体合成的需求。  相似文献   
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