RNA干扰与肿瘤基因治疗

RNA干扰(RNAi)是控制正常基因表达的一种机制,近来作为一种潜在的技术用于肿瘤,传染病和代谢性疾病的治疗.本文仅就RNA干扰的发现、作用机制以及在肿瘤治疗中的应用和所面临的问题做一简要介绍.     

海蚯蚓蛋白酶基因的原核表达及其抗肿瘤活性

目的原核表达海蚯蚓蛋白酶基因,探讨其对肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法根据环节动物门蚯蚓和单环刺螠丝氨酸蛋白酶c DNA序列多重比对获得的保守序列设计引物,从海蚯蚓肠道组织提取总RNA,经3′RACE和5′RACE技术分别克隆海蚯蚓蛋白酶c DNA序列的3′端和5′端,并进行拼接,对其编码的蛋白质作生物信息学分析;将海蚯蚓蛋白酶成熟肽的编码序列亚克隆至原核表达载体p ET-21a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,采用组氨酸亲和层析柱纯化;MTT法检测重组蛋白的抗肿瘤活性。结果经3′端RACE技术获得约250 bp的海蚯蚓蛋白酶基因c DNA 3′端序列,再经5′RACE技术扩增获得约770 bp的c DNA 5′端序列,拼接可得海蚯蚓蛋白酶c DNA序列全长为880 bp,其编码蛋白含270个氨基酸,具有高度保守的GDSGGP序列;重组蛋白相对分子质量为27 000,主要以包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的30%,上清纯化后纯度可达95%;重组蛋白酶对人肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用。结论原核表达了海蚯蚓蛋白酶,可明显抑制人肿瘤细胞的增殖,为抗肿瘤基因工程药物的研发提供了实验依据。