加酶洗涤剂的发展概况

阐述了国内、国外加酶洗涤现状，并着重介绍了国内酶的种类、特点及现有生产情况，预测了国内加酶洗涤剂的前景与趋势。     

基于SASV8.1的黄嘌呤氧化酶产酶培养基的优化

培养基优化属多变量目标函数优化,先通过Plackett-Burman法筛选出黄嘌呤、(NH4)2SO4和CaCl2为重要因素,然后采用Box-Behnken设计重要因素水平,同时应用SASV8.1软件做多元非线性回归,建立黄嘌呤氧化酶产酶培养基的优化模型.用模型预测培养基的最优组成.将预测值与验证值相比较,误差为2.6%,证明采用响应面法寻求最佳培养基组成是可行的;并且优化后黄嘌呤氧化酶产酶水平提高了5倍.     

中空超滤浓缩糖化酶的研究

本文介绍了黑曲霉突变株ＷＭＣ－１５糖化酶采用中空纤维超滤膜进行中试规模的浓缩试验，同时，研究了超滤过程中各种控制因素对酶收率及膜寿命的影响，为工业化大生产提供了必要的参数及操作条件。     

人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及发酵条件的优化

目的在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)基因,并对发酵条件进行优化。方法将人工合成的hLY成熟肽基因克隆至表达载体pPIC9K中,电转化至毕赤酵母GS115,通过抗G418筛选获得高拷贝重组子GS115/hly,经甲醇低温诱导表达后,取发酵液上清进行SDS-PAGE分析及酶活性检测,并对培养基初始pH值、甲醇添加量、诱导温度和时间进行优化。结果人工合成的hly测序结果与GenBank中报道的核酸序列完全一致;GS115/hly经PCR鉴定,hly基因已整合入GS115基因组内;经甲醇诱导表达的GS115/hly发酵液上清具有溶菌活性,活性达30U/ml;经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约15200处可见目的蛋白条带;GS115/hly的最佳诱导条件为:培养基初始pH5.0,甲醇添加量2.0%,26℃诱导108h。结论在毕赤酵母GS115中表达了具有较高酶活性的hLY,并对发酵条件进行了初步优化。     

圆弧青霉脂肪酶基因的克隆和表达

圆弧青霉PG37总RNA甲醛变性电泳呈现真核生物所特有的 2 8SrRNA和 18SrRNA条带 .根据PG37所产碱性脂肪酶 (LipPC)N末端氨基酸残基序列和真核生物mRNA在 3’端具有poly(A)等所提供的生物信息 ,采用RT PCR技术扩增了LipPC成熟肽和 3’非编码区的cDNA片段 ,并将该PCR产物直接克隆至pUCm T载体中 .序列分析表明 ,LipPC含有 2 5 8个氨基酸残基 ,其中保守的五肽序列为Gly His Ser Leu Gly .进一步采用ClonTech公司的SmartTM PCRcDNA文库构建试剂盒 ,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段 ,从而完成了LipPC完整cDNA的分析测定 .最后将编码完整脂肪酶蛋白质的cDNA克隆至 pGEX 5X 3表达载体中 ,SDS PAGE检测结果表明 ,大肠杆菌BL2 1所表达的GST LipPC融合蛋白质分子质量约为 5 3ku .     

β-甘露聚糖酶制备魔芋葡甘露低聚糖的研究

利用黑曲霉菌株(Aspergillus niger)LW-1所产酸性β-甘露聚糖酶,对魔芋胶进行水解制备(魔芋)葡甘露低聚糖。酶解的工艺条件为:魔芋胶浓度150g/L,加酶量50IU/g(魔芋胶),酶解温度50℃,酶解时间6h。所获酶解产物经薄板层析和HPLC检测,主要为低聚糖以及少量单糖。再利用酵母发酵法去除其中的可发酵性单糖,最终产物为100%的(魔芋)葡甘露低聚糖。     

产酸性果胶酶菌株的筛选及产酶条件的研究

从实验室保藏的9株黑曲霉菌株和1株宇佐美曲霉菌株中，通过初筛和复筛获得了一株高产酸性果胶酶菌株一宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）YL-1。YL-1菌株产酶发酵条件为：29℃静置培养72h，期间在24h翻曲1次。采用单因素试验确定了该茵株固态发酵优化培养基组成为：250mL锥形瓶装发酵基料10g（麸皮8g＋豆饼粉2g），食用果胶0．9g，玉米浆0．5mL，吐温-800．15％，（NH4）2SO4 2．0％，KH2PO40．4％（均相对于基料），料水比1：1，自然pH。酸性果胶酶活力最高达4831 IU／g干曲。     

黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶的酶学特性

纯化的黑曲霉Aspergillus niger WM20-11所产的酸性β-甘露聚糖酶经Sephadex G-100凝胶过滤层析和SDS-PAGE分别测得相对分子质量为39 000和40 000;IEF-PAGE测得酶的等电点为4.0;最适作用pH值和温度分别为3.5和70℃;糖质量分数19.6%;Mg2 、Ca2 、Li 、Na 、K 对酶有激活作用,Pb2 、Co2 、Fe3 、Mn2 、Hg2 对酶有抑制作用;酶对角豆胶的Km和Vmax分别为66.7 g/L和333μmol/(min.mg);酶蛋白的氨基酸组成中Asp和Glu含量最高;HPLC分析角豆胶酶水解液的主要产物是低聚糖。     

α—淀粉酶对糖化酶测定的影响

本研究以ＷＭＣ－１５糖化酶菌所产生酵液为供试酶液，系统研究了糖化酶发酵过程中的α－淀粉酶活力以有α－淀粉酶对糖化酶测定结果的影响，有利于更加精确地测定糖化酶活力单位及控制糖化酶发酵过程。     

宇佐美曲零酸性β-甘露聚糖酶的纯化及性质研究

采用硫酸铵分部盐析、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析、DEAE Sepharose fast flow阴离子交换层析等分离技术,从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)YL-01-78菌株固态曲浸出液中分离出1种SDS-PAGE电泳纯和HPLC色谱纯的酸性β-甘露聚糖酶组分,其最终回收率为12.6%,纯化倍数为32.3.经SDS-PAGE和凝胶过滤层析测得该纯化酶的分子质量分别为42 ku和40 ku,表明该酶以单体形式存在;其等电点pI为4.2;含糖量为23.2%.以角豆胶半乳甘露聚糖为底物,测得该酶的Km值和Vmax值分别为6.3 mg /mL和1 667 μmol/(min·mg).