层析介质使用寿命缩小模型的建立和确认

在现代生物制药工艺路线中,层析是最常用的一种技术手段。层析技术所需要的层析介质是药品监管的重点项目之一,其中层析介质的使用寿命(使用次数)必须经研究确认,并经药品监管部门审核和批准。在缩小模型上进行前瞻性研究是被广泛接受的层析介质使用寿命的研究方法。本文就层析介质使用寿命缩小模型的建立和确认作一简要综述。     

一种纤维素/钛白粉阳离子交换扩张床吸附剂

为了使得扩张床吸附技术更好地用于蛋白质分离，提出一种含有羧甲基阳离子交换基团的扩张床吸
附剂.采用了反相悬浮热再生法，将超细钛白粉包埋于再生纤维素骨架之中，制备成均质型纤维素/钛白粉
复合微球；再以复合微球作为扩张床吸附基质，用环氧氯丙烷交联后与一氯乙酸反应，得到羧甲基阳离子
交换型扩张床吸附剂；测定了吸附剂在扩张床中的扩张特性和蛋白质吸附性能.结果表明，该吸附剂具有
良好的扩张床膨胀和吸附性能，每升吸附剂的溶菌酶饱和吸附容量达98.7 g，扩张床中蛋白质穿透曲线形
状与填充床基本相似，每升吸附剂的10％穿透吸附容量可达到69.3 g溶菌酶.     

直接偶联法制备配基密度可控的丁基琼脂糖层析介质

以快流速琼脂糖凝胶为基质,采用直接偶联法制备丁基琼脂糖疏水层析介质. 考察了影响反应的主要因素,通过四因素三水平正交实验和单因素实验,确定丁基琼脂糖疏水层析介质的优化反应条件为：反应温度45℃,反应时间45 min,催化剂三氟化硼乙醚用量0.02 mL/g. 在此条件下严格控制琼脂糖凝胶的含水量,改变丁基缩水甘油醚用量,制备了不同丁基密度的丁基琼脂糖疏水层析介质. 用不同密度的系列介质考察对牛血清白蛋白的吸附性能,初步研究了配基密度与吸附性能的关系;研究了疏水层析介质的机械稳定性和化学稳定性. 结果表明,其各项性能良好,具有广阔的应用前景.     

C18-硅胶的原位合成及其作为常压层析介质在紫杉醇分离纯化中的应用

以氯铂酸为催化剂,采用原位法合成了造价低廉、性能稳定的Ｃ１８－反相层析介质。考察了原位法第二步反应中催化剂、反应时间及反应温度等对介质合成的影响。将合成的Ｃ１８－硅胶应用于紫杉醇的常压层析提纯,可使紫杉醇的纯度从２７％提高到９５％以上,回收率大于９０％。     

逆体积排阻层析法测定层析介质的孔径分布

针对层析介质的孔径分析,基于刚性球状分子进入柱状孔的假设,分别采用高斯正态分布和对数正态分布描述孔径分布,利用简化的单孔分配因子模型,建立了孔径分布函数和分配因子Kd的关联,通过体积排阻层析实验测定系列标准物的Kd,从而拟合得到孔径分布信息,建立了逆体积排阻层析法。以葡聚糖作为分子大小的标准物,测定了5种典型层析介质(SP Sepharose FAST FLOW、Q Sepharose FAST FLOW、ToyopearlDEAE-650M、Streamline DEAE和Sephadex G-150)的Kd,计算和比较了不同介质的孔径分布,分析了介质的可吸附孔表面积等结构参数,证实了逆体积排阻层析法分析层析介质孔径分布的可行性和实用性。     

ISEC法在评价色谱介质孔径结构方面的应用

层析是生物大分子分离纯化的一种重要手段，层析介质作为层析过程的关键的一部分受到了广泛的关注。层析介质的孔径结构对其分离纯化的效果有着显著的影响，因此探究层析介质的孔径结构至关重要。介绍了测定色谱介质孔径结构常用的方法，如：压汞法、氮气吸附法、小角X射线散射法、电镜扫描法（SEM和TEM）和逆体积排阻色谱法(ISEC)。重点阐述了ISEC法的基本原理和常用的探针类型，总结了ISEC法应用中的优点及不足，介绍了ISEC法的发展历史及其在国内外的研究现状。     

新型人血白蛋白分离介质吸附性能及重组人血白蛋白分离

针对毕赤酵母发酵液中分离重组人血白蛋白(rHSA),采用新型介质IAA-CYS,探讨HSA吸附性能,优化分离条件,实现rHSA高效分离。考察了不同p H和盐浓度下IAA-CYS介质对HSA的吸附,发现pH为4.5是最佳条件,HSA饱和吸附容量达到157.6 mg·mL~(-1),盐浓度影响较小。测定了不同NaCl浓度和线性流速下IAA-CYS介质对HSA的动态载量,发现流速影响较大,合适流速为100 cm·h~(-1);盐浓度影响较小,无需对酵母发酵液进行稀释预处理,rHSA动态载量达48.3 mg·mL~(-1)。进一步优化了发酵液中分离rHSA,上样pH为4.5,上样流速为100 cm·h~(-1),上样量为38.6mg·mL~(-1),在pH为5.0和质量浓度为400 mmol·L~(-1)的NaCl条件下淋洗,在pH为8.0和质量浓度为200 mmol·L~(-1)的NaCl条件下洗脱,rHSA纯度为90.1,收率为88.6。结果表明,IAA-CYS介质分离rHSA条件温和,耐盐性好,料液无需稀释预处理,过程简便高效,具有良好的应用前景。     

动态轴向压缩柱精制博来霉素

以博来霉素铜盐粗粉为原料,以高纯度A_2和B_2(A_2+B_290%)的收率为评价指标,开发了一种利用动态轴向压缩(DAC)柱分离纯化、脱铜为一体的博来霉素精制方法。以C18ME为层析介质,以甲醇-1.5 g·L~(-1) EDTA-2Na(18∶82,体积比)为洗脱剂,在洗脱流速为150～200 mL·min~(-1)、上样量为1.5～2.0 g·L~(-1)的最佳工艺条件下,采用DAC-HB100柱制备得到的博来霉素精粉纯度和铜盐含量均符合USP标准要求,总收率大于70%。     

新型耐碱蛋白A介质的制备与性能

以蛋白A结构中耐碱性更好的C区为基础，构建一种新型耐碱蛋白A，并偶联至琼脂糖基质，获得新型耐碱蛋白A亲和层析介质，分别用激光共聚焦显微镜和石英晶体微天平研究了人免疫球蛋白(hIgG)与蛋白A介质的结合过程。结果表明，该介质具有较商品配基更高的结合力和稳定的再生性能，hIgG动态载量达62.0 mg/mL，40次再生操作后载量为初始载量的84%。该介质在抗体纯化领域具有较好的应用前景。     

逆体积排阻色谱法在评价色谱介质孔径结构方面的应用

介绍了影响层析介质分离纯化效果的结构参数。总结了测定色谱介质孔径结构常用的方法,如压汞法、氮气吸附法、小角X射线散射法、电镜观察法(SEM和TEM)和逆体积排阻色谱法(ISEC)。介绍了ISEC的基本原理及其涉及到的探针类型。对ISEC相关理论,尤其是溶质半径、色谱理论和体积排阻色谱法(SEC)随机理论进行了重点阐述。比较了ISEC的优缺点。介绍了ISEC在评价介质孔径结构中的应用,对ISEC的应用前景进行了展望。