姜黄素对辐射诱导的胰腺外分泌细胞损伤的保护作用

将大鼠胰腺外分泌细胞(AR42J)分为实验组与对照组,两组细胞根据姜黄素处理水平又分为A/B/C/D/E 5个姜黄素处理组,分别经0、2、4、8、16 μM姜黄素处理,实验组予以一次性大剂量X射线照射(6 Gy),模拟急性辐射损伤事件。照后收集细胞蛋白行免疫印迹试验(Wensten-blot)检测凋亡相关蛋白PARP、BCL-2,应激及能量代谢相关因子HIF-1ɑ、LDHA、PDH表达情况,MTT法检测细胞增殖活力,荧光酶标仪检测细胞ATP及ROS生成情况。清洁级大鼠24只随机分为对照组、单纯加药组、单纯照射组、照射+加药组,予以12 Gy X射线照射或假照射,射后24小时处死并解剖取出胰腺组织,Wensten-blot检查能量代谢相关蛋白表达情况,以探讨姜黄素在胰腺外分泌细胞辐射损伤中的作用及其机制。结果表明,与对照组相比,单纯照射组细胞在受照24 h后,凋亡蛋白PARP表达升高,BCL-2蛋白下调,线粒体膜电位下降表明线粒体受损。辐照促使缺氧诱导因子HIF-1α表达上调,介导糖酵解的关键因子LDHA表达增强,PDH表达下调。细胞增殖活力下降,ROS生成增多,沉默HIF-1表达在一定程度上抑制了辐照诱导的这种能量代谢转变。经姜黄素预处理,纠正了HIF-1α及LDHA的表达上调,部分恢复PDH表达,有效清除氧自由基,并且对细胞的增殖能力及ATP生成具有正向作用。动物实验显示辐照诱导HIF-1α表达加强,调控能量代谢相关蛋白表达发生改变,LDHA表达增强,PDH表达下调;经姜黄素预处理,纠正了HIF-1α上调所介导的能量代谢相关蛋白的表达变化,趋势与细胞实验相符。以上结果说明,胰腺外分泌细胞在电离辐射损伤下,通过上调HIF-1α表达,促使能量代谢发生转变,糖酵解途径加强,而经线粒体的有氧氧化受到抑制。姜黄素通过下调HIF-1α,纠正了辐射诱导的细胞能量代谢紊乱,并有效清除氧自由基,保护线粒体,从而发挥其对胰腺外分泌细胞的辐射损伤的保护作用。     

不同抗疟药物对红内期恶性疟原虫3D7线粒体呼吸的影响

目的：利用Seahorse XFe96分析仪对6大类别共计13种国际一线抗疟药物作用于红内期恶性疟原虫3D7（Plasmodium falciparum 3D7）线粒体电子传递链（electron transport chain, ETC）进行评价。方法：采用三天抑制法和SYBR Green I荧光分析法对体外药物作用于P. falciparum 3D7的抗疟活性进行评价，采用磁珠分选技术对P. falciparum 3D7虫株进行分离纯化，采用Seahorse XF分析系统的线粒体耗氧率OCR值（Oxygen Consumption Rate）对P. falciparum 3D7线粒体不同时刻的生物能进行表征，进而考察不同抗疟药物对红内期恶性疟原虫线粒体有氧呼吸的影响。结果：流式检测结果显示，成功富集到虫期较为一致的滋养体期疟原虫。体外抗疟活性评价结果显示，除双胍类抗疟药物氯胍（proguanil, Pro）外，其余12种抗疟药物对P. falciparum 3D7的药效均为nmol/L级别。线粒体有氧呼吸考察的结果显示，双氢青蒿素（dihydroartemisinin, DHA）和氯喹（chloroquine, CQ）的5种浓度剂量（0.4、1、5、10、50×IC50）对P. falciparum 3D7线粒体有氧呼吸均无明显影响。13种常用抗疟药物在5×IC50浓度剂量下，青蒿素（artemisinin, ART）、蒿乙醚（arteether, ARE）和蒿甲醚（artemether, ARM）均能显著提高线粒体最大呼吸；奎宁（quinine, QN）和Pro仅对P. falciparum 3D7线粒体ETC的氧化磷酸化具有解偶联作用，未完全破坏线粒体ETC的功能；阿托伐醌（atovaquone, Ato）对P. falciparum 3D7线粒体有氧呼吸有明显的抑制作用，显著降低线粒体最大呼吸和质子的泄漏，完全破坏了线粒体ETC的功能；其余抗疟药物对P. falciparum 3D7线粒体有氧呼吸均无明显影响。 结论：13种国际一线抗疟药物中大多数抗疟药物的靶标并非是疟原虫线粒体有氧呼吸的ETC通路。     

葡萄糖诱导的线粒体蛋白氧化应激及调控机制概述

食品中的葡萄糖是人体细胞获取能量的重要来源,细胞中的线粒体是重要的能量代谢场所,在维持人体正常生理代谢功能中起重要作用。但葡萄糖代谢异常会导致线粒体功能紊乱,这是通过葡萄糖诱导的氧化应激导致的线粒体蛋白功能异常,进而引发相关疾病,例如糖尿病、阿尔茨海默症和脑中风。所以维持线粒体生理功能,研究氧化应激调控机制,探究相关疾病更有效的治疗手段至关重要。本文综述了氧化应激涉及的主要线粒体蛋白(包括顺乌头酸酶、腺嘌呤核苷酸转位酶、二氢硫辛酰胺脱氢酶、线粒体蛋白复合物Ⅰ、雌激素受体β、热休克转录因子1和缺氧诱导因子2a)、氧化应激调控机制(包括丙酮酸调节、线粒体蛋白之间的协同调节)和人工干预过程(包括乙醇戒断、亚甲蓝作电子受体和5-甲氧基吲哚-2-羧酸预处理)。     

三种多糖降解复合物体外抑制HeLa细胞的增殖作用

本文探讨了毛头鬼伞、龙须菜和坛紫菜三种多糖降解复合物体外抑制HeLa细胞增殖的协同效应及其作用机制。将毛头鬼伞、龙须菜和坛紫菜的多糖降解物复配成复合多糖降解物,采用MTT法检测复合多糖降解物对HeLa细胞增殖影响,DCFH-DA检测细胞内活性氧水平,JC-1检测线粒体膜电位变化情况。正交实验结果显示,当毛头鬼伞、龙须菜和坛紫菜三种多糖降解物以质量比为4:4:5组合时,对HeLa细胞的增殖抑制作用最强,在浓度为100μg/m L时,抑制率达75.72%,远高于三种单味多糖降解物单独使用时的最高抑制率56.09%;DCFH-DA、JC-1检测结果表明,复合多糖降解物可以显著提高细胞内活性氧水平,降低线粒体膜电位。以上结果均说明毛头鬼伞、龙须菜和坛紫菜三种多糖降解物复合后,对HeLa细胞的增殖抑制活性存在协同增效作用,该复合多糖降解物的作用机制可能与提高细胞内活性氧水平和降低线粒体膜电位有关。     

实时荧光定量PCR鉴定肉制品中牛源性成分及其含量

建立一种快速、准确鉴定牛肉制品中牛源性成分并且量化牛肉成分含量的方法。以牛线粒体细胞色素b基因为靶基因,设计出具有特异性引物。选择真核生物核糖体16SrDNA为内参基因,采用实时荧光相对定量法。牛肉质量百分比的对数值与之对应的循环阈值差值△Ct呈良好线性关系。标准曲线回归公式为y=-3.3645x+0.8737,R2=0.9926,扩增效率达98.25%。通过模拟混合样品对标准曲线进行质量评估,证明该方法适用于对牛肉成分的鉴定以及含量的检测,为量化肉制品中牛肉成分研究提供参考意见。     

昆仑雪菊原花青素对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用

本文研究了昆仑雪菊原花青素(KCPC)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用。采用CCl4建立肝损伤模型,观察KCPC对肝损伤小鼠肝脏病理变化和肝脏指数等的影响;检测小鼠丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;采用Fe2+-Vc诱导线粒体细胞膜肿胀,分析KCPC对抑制线粒体肿胀的作用,并检测琥珀酸脱氢酶(SDH)活性。结果表明,KCPC中剂量组及高剂量组绝大部分肝组织结构正常,而模型组的小鼠肝组织出现病变坏死,而且血清中ALT、AST显著上升(p0.01)。此外,KCPC高剂量组(800 mg/kg)的ALT、AST活性分别比模型组降低了82.46%和69.41%,且SOD、GSH-Px活性分别增加了101.08%和92.13%(p0.01),MDA含量降低了45.16%(p0.01)。KCPC还具有一定抑制线粒体肿胀的能力,且400mg/kg剂量组的SDH活性为模型组的1.22倍。上述结果表明,KCPC对CCl4诱导的小鼠肝损伤具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化酶的活性有关。     

新型近红外氧杂蒽荧光染料用于线粒体荧光成像

荧光成像具有操作简单、灵敏度高和实时等优点,而近红外荧光成像能够有效避免生物组织自发荧光干扰。通过设计和合成3个新型近红外氧杂蒽荧光染料NXD-1～NXD-3用于细胞荧光成像。首先,3个氧杂蒽荧光染料分子结构得到核磁共振谱和高分辨质谱的确认。其次,详细研究了这些荧光染料的吸收光谱和荧光光谱,实验数据表明3个荧光染料的发射光谱能够达到近红外区域,其中NXD-3的光谱更为红移,它的最大吸收波长和发射波长分别为611 nm和759 nm。另外,密度泛函理论(DFT)计算结果与实际测试光谱数据相匹配。最后,将制备的氧杂蒽荧光染料用于细胞荧光染色成像,实验结果表明荧光染料NXD-3具有良好的细胞线粒体靶向荧光标记效果。     

先正达吡唑萘菌胺原药及复配悬浮剂产品获药检所首登记

<正>近日,瑞士先正达作物保护有限公司92%吡唑萘菌胺原药获得农业部药检所批准登记,同时获准登记的还有该公司吡萘(11.2%)嘧菌酯(17.8%)复配悬浮剂产品,用于黄瓜白粉病。登记有效期均至2015年7月23日。先正达是首家在中国获得吡唑萘菌胺原药登记的企业。吡唑萘菌胺是一种兼具预防和治疗性的杀菌剂活性成分,属于SDHI类杀菌剂,能长效防控作物疾病。该成分的作用机理为抑制病原菌线粒体膜中的呼吸酶。可用于防治谷物作物中常见的叶斑病、褐锈病、黄锈病、大麦网斑病。制剂包含EC和SC两种类型。     

SNI小鼠中调控ROS对疼痛和脊髓Pink1蛋白的影响及机制研究

目的:观察C57/BL6小鼠坐骨神经分支选择性损伤（spared nerve injury,SNI）后降低氧化应激反应对机械痛和脊髓中Pink1的表达影响,并探讨神经性疼痛中氧化应激对Pink1的可能的作用机制。方法:取60只小鼠,随机分为对照组（Control）、假手术组（Sham）、手术组（SNI）、SNI+Saline、SNI+苯亚甲基叔丁基氮氧化物（phenyl-N-tert-butylnitrone,PBN）5组。Control组不作任何处理,Sham组切开皮肤,分离出坐骨神经三支分支后缝合皮肤;SNI组游离并保留腓肠神经分支,结扎并切断胫神经;分别于14 d之后进行机械痛阈值检测。测定行为学后SNI组分别注射生理盐水（0.9%NaCl）和PBN。进行行为学测定,并分别检测氧化应激（GSH、SOD）水平;Western blot法检测腰段脊髓蛋白水平Pink1的表达变化。结果:SNI组与Control和Sham组相比,机械痛阈值显著降低,差异具有统计学意义（P<0.001）;SNI组腰段脊髓ROS水平升高（P<0.05）,注射PBN后ROS水平降低（P<0.001）;SNI小鼠中Pink1在蛋白水平表达增多（P<0.001）,降低ROS后脊髓中Pink1在蛋白水平表达降低（P<0.01）。结论:神经病理痛中降低线粒体内ROS水平则会改善小鼠神经性疼痛,靶向减少ROS的产生和改善Pink1有助于神经病理痛的治疗。