紫杉醇生物素标记衍生物的合成

以生物素、紫杉醇和6-氨基己酸为原料,经酰化、水解、酯化反应等步骤合成具有长臂连接的标题化合物。在三乙胺催化下,生物素与N-羟基琥珀酰亚胺反应生成N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯。在氯化亚砜、甲醇反应体系下,由6-氨基己酸合成6-氨基己酸甲酯。在三乙胺作用下,N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯和6-氨基己酸甲酯反应生成生物素-氨基己酸甲酯;生物素-氨基己酸甲酯在Li OH·H2O作用下,水解反应得到6-生物素氨基己酸。以DMF为溶剂,在N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)作用下,6-生物素氨基己酸与紫杉醇反应,生成标题化合物。标题化合物和重要中间体化合物采用IR、1HNMR、MS进行了表征。     

Fluorogenic Sequencing Using Halogen‐Fluorescein‐Labeled Nucleotides

Fluorogenic sequencing is a sequencing‐by‐synthesis technology that combines the advantages of pyrosequencing and fluorescence detection. With native duplex DNA as the major product, we employ polymerase to incorporate the complement‐ arily matched terminal phosphate‐labeled fluorogenic nucleotides into the DNA template and release halogen‐fluorescein as the reporter. This red‐emitting fluorophore successfully avoids spectral overlap with the autofluorescence background of the flow chip. We fully characterized the enzymatic reaction kinetics of the new substrates, and performed a 35‐base sequencing experiment with 60 reaction cycles. Our achievement expands the substrate repertoire for fluorogenic sequencing, and extends the spectral range to obtain better signal‐to‐background performance.     

A reliable and sensitive time-resolved fluorescent immunochromatographic assay (TRFICA) for ochratoxin A in agro-products

Immunochromatographic assays (ICAs) are considered as a suitable diagnostic tool for the detection of mycotoxins. Mycotoxins and especially, ochratoxin A are analytes with more demanding sensitivity requirements. To enhance the sensitivity of current immunochromatographic assays for ochratoxin A (OTA), a novel sensitive ICA was developed in this study. In the assay, microspheres enclosing fluorescent europium (III) [Eu(III)] nanoparticles (EuNPs) were used as a label for OTA monoclonal antibody (OTA-mAb) conjugation. Accordingly, assay was called time-resolved fluorescent immunochromatographic assay (TRFICA). The test strip was composed of three parts: a sample pad, nitrocellulose membrane and an absorbent pad. As for detection, a proper concentration of conjugated microspheres was pipetted into the microtube and sample extract was added to it. Then the strip was inserted into the tube and the fluid flow along the strip. The TRFICA results were obtained in 8 min and read by a portable TRFICA strip reader. The established method allows quantitative determination of OTA with limit of detection as low as 1.0 μg kg⁻¹ in the samples. For validation, spiked samples including wheat, maize, soybean and rice were respectively assayed by TRFICA and a standard high performance liquid chromatography equipped with a fluorescence detector (HPLC-FLD), and good agreement of results was obtained between two methods.     

一种中空金/银双金属纳米颗粒的制备及其SERS性能

以银纳米颗粒为牺牲模板,利用Ag和HAu Cl4之间的置换反应,结合柠檬酸钠同步还原的方法制备了一种中空金/银双金属纳米颗粒。通过对颗粒形貌及局域表面等离子体共振(LSPR)的分析,初步研究了此类金/银纳米颗粒的生长机理,并对影响反应的因素进行了探讨。结果表明,通过控制反应条件可以实现对LSPR的精密调控。该类金/银双金属纳米颗粒可用作为SERS基底,苯硫酚在其表面增强因子可达107,并具有良好的信号重现性。该基底用于atto610标记的生物素与亲和素的SERS检测,检测限可达80 pg/m L。     

嵌入式API测试套生成方法和技术

随着嵌入式计算机系统应用的不断扩展,嵌入式系统的可靠性引起了学术界和工业界的广泛关注,也提出了很多增进可靠性的方法和技术.然而,现有的方法和技术在测试套生成方面论述不多,所以在处理大批量嵌入式系统测试工作中遇到了挑战.讨论抽象测试套生成方法和适配技术,提出了LTS(labeled transition system)到BT(behavior tree)的转换算法,从而使TTCN(test and testing control notation)测试套可以通过转换嵌入式软件的LTS描述产生.还介绍了基于上述转换算法的嵌入式软件测试工具包,以及一个嵌入式物联网识读器测试案例研究.     

一种基于特征迁移系统的软件产品线测试方法

为了在软件产品线的应用工程阶段最大程度地复用领域工程的测试用例,领域测试用例需要覆盖领域模型中的变化性.针对此问题,提出了一种以特征模型为出发点的软件产品线测试方法,通过扩展特征迁移系统建立软件产品线的领域行为模型,对模型中的变化性迁移进行抽象,得到精简的测试模型;应用迁移覆盖准则,导出包含变化性的领域测试用例;在应用工程阶段,根据具体应用所包含的特征,绑定领域测试用例中的变化性,复用领域测试用例导出针对具体应用的测试用例.最后通过一个咖啡机产品线验证了该测试方法,导出了可复用的领域测试用例.     

PCR法制备地高辛标记探针斑点杂交检测鳗弧菌

以鳗弧菌(Vibrio anguillarum)toxR基因内366~571 bp之间的基因序列为靶序列,采用PCR法制备对鳗弧菌特异性的地高辛标记DNA探针,探针长度为206 bp。选取2株鳗弧菌和8株与鳗弧菌亲缘关系非常接近的常见水产动物致病弧菌,通过斑点杂交法对制备的探针进行特异性检测,结果显示该探针对鳗弧菌杂交阳性,而与弧菌属的其它8株细菌均无交叉反应。这表明该地高辛标记探针具有很强的特异性,它能够很好地对鳗弧菌感染进行检测。     

极限标签下基于解耦特征伪标签传播的故障诊断

面对实际工程中标签稀少,尤其是单类样本仅 1 个标签的极限标签场景,现有半监督诊断方法的故障识别能力严重不 足。 为此,本文提出一种基于解耦特征伪标签传播算法的半监督故障诊断方法。 首先,引入局部选择的并行集成异常检测方法 分离故障样本;其次,提出基于解耦特征的伪标签传播算法,通过解耦对抗自编码器获得增强的故障特征,进而通过故障特征降 维、特征分布伪质心标定与距离度量实现高效伪标签传播;最后,利用伪标签故障样本训练故障分类器,结合异常检测实现高准 确率故障诊断。 两个旋转部件数据集上的实验结果表明,所提方法在单类故障标签数量为 1 时,同工况和跨工况实验下的平均 诊断准确率分别超过 97% 和 90% ,明显优于对比方法。     

荧光标记DNA分子量内标的设计与制备

目的:设计并制备65bp-500bp范围的荧光标记DNA分子量内标。方法:p MD18-T Vector连接任意一段割胶回收的DNA片段,克隆后提取重组质粒经双酶切后作为模板,在其上游设计一条固定引物并用荧光标记,在其下游设计一系列引物,经PCR扩增后在ABI 3100遗传分析仪上检测。结果:扩增产物DNA片段大小分别为65bp、105bp、149bp、200bp、241bp、269bp、311bp、345bp、400bp、450bp、500bp,与预期片段大小一致。结论:11个片段经混合调平后,峰型良好,出峰位置均匀,可用于毛细管电泳中DNA片段大小的确定。     

直接竞争酶联免疫吸附法检测食品中三聚氰胺残留

采用酶标抗原建立了高效、高灵敏的三聚氰胺直接竞争的ELISA（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测方法。方法 以三聚氰胺单克隆抗体包被作为固相抗体,辣根过氧化酶（Horseradish Peroxidase,HRP）标记的抗原与标准品（或样品）中三聚氰胺竞争结合抗体,建立了直接竞争酶联免疫检测体系。结果 以三聚氰胺为标准品建立标准曲线,得到方法的IC50为8.84μg/L,灵敏度为0.65μg/L,线性范围0.9-35μg/L;检测样品的回收率为70.0%-127.9%,与三聚氰酸交叉反应率为60%,其他结构类似物基本无交叉反应。结论 本方法灵敏度高、特异性强、检测快速, 可以满足实际样品的检测需求。