基于BALB/C小鼠模型评价牛乳αs1-酪蛋白的致敏特性

目的:评价过敏原的过敏症机理。方法:首先通过口腔灌胃的致敏方式建立αs1-酪蛋白致敏的BALB/C小鼠模型,通过测定小鼠特异性IgE抗体水平进行模型鉴定。评价αs1-酪蛋白对小鼠肥大细胞蛋白酶、组胺、细胞因子水平的影响,并进行临床和病理切片观察。结果:第42天用αs1-酪蛋白大剂量灌胃小鼠后,各组小鼠特异性IgE抗体水平显著升高,都产生不同程度的过敏症状,且中、高剂量组小鼠过敏反应强于低剂量组;以阴性小鼠为对照,致敏小鼠的肥大细胞蛋白酶、组胺、IL-4、IL-5、IL-10和IFN-γ细胞因子含量均显著升高,且随着致敏剂量的增加而增加;组织病理切片结果显示:αs1-酪蛋白中剂量和高剂量组小鼠产生了明显的炎症反应,局部肺泡隔塌陷或增厚,脾脏和胸腺中有淋巴结病灶产生,且小肠黏膜间质有炎细胞浸润。结论:基于BALB/C小鼠模型进一步揭示了αs1-酪蛋白的致敏机理。     

牛乳α-乳白蛋白IgE线性表位的关键氨基酸识别

α-乳白蛋白是引起牛乳过敏的主要过敏原之一。识别α-乳白蛋白作用表位及影响致敏性的关键氨基酸,对于揭示α-乳白蛋白致敏机理及低致敏乳制品的开发具有重要的意义。本研究采用固相合成技术合成α-乳白蛋白系列多肽,以牛乳过敏患者血清为探针,通过酶联免疫吸附分析法识别α-乳白蛋白的作用表位和关键氨基酸。结果表明:免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig)E作用表位的氨基酸序列定位为aa1-15、aa6-20、aa46-60、aa71-85和aa101-115。α-乳白蛋白IgE作用表位关键氨基酸为第8位的缬氨酸、第9位的苯丙氨酸、第10位的精氨酸、第103位的酪氨酸、第105位的亮氨酸和第107位组氨酸。本研究可以为过敏原c DNA克隆以激活T细胞、降低IgE结合能力提供重要思路。     

β-乳球蛋白IgG抗原决定簇的识别

以β-乳球蛋白氨基酸序列为模板,错位合成β-乳球蛋白多肽,以收集到的牛乳过敏患者血清为抗体,鉴定β-乳球蛋白IgG抗原决定簇,探讨牛乳过敏机理．结果表明,β-乳球蛋白IgG抗原决定簇有2条,它们在β-乳球蛋白中的氨基酸序列定位分别为aa22—36和aa127—141．结果表明通过特异性水解抗原决定簇实现牛奶脱敏的方法是可行的．     

EGC和EGCG降低αs1-酪蛋白致敏小鼠过敏反应

为研究茶多酚中的表没食子儿茶素(EGC)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的抗αs1-酪蛋白致敏机理,首先用αs1-酪蛋白致敏BALB/C小鼠,在激发阶段用EGC和EGCG给予营养干预,以降低αs1-酪蛋白致敏小鼠的过敏反应。以小鼠体内肥大细胞蛋白酶含量、组胺含量、特异性抗体IgE水平、细胞因子分泌水平以及组织病理学观察为主要指标,评价EGC和EGCG降低αs1-酪蛋白致敏小鼠过敏反应的能力。结果表明:EGC和EGCG均可显著降低过敏小鼠的肥大细胞蛋白酶、组胺、特异性IgE抗体和Th2型细胞因子水平。同时,组织病理学结果显示:EGC和EGCG显著降低肠、胸腺、脾脏和肺的病变程度。本研究结果可为茶多酚调控牛乳过敏原致敏反应发生的路径提供理论参考,未来可从信号转导和基因表达水平方面进一步探讨抗过敏机制。     

V_C、大蒜粉和柠檬酸对草鱼内脏调味基料风味的改善

以氨态氮、多肽的含量及感官评定值为指标,结合风味物质分析,分别研究了添加大蒜粉、VC和柠檬酸对草鱼内脏蛋白质调味基料风味的影响。结果表明,VC、大蒜粉和柠檬酸均能促进风味化合物的形成,大蒜粉最适添加量为0.1%,检测到22种香味活性化合物;VC最适添加量为0.2%,检测到25种香味活性化合物;柠檬酸最适添加量为1.5%,检测到23种香味活性化合物。     

人嗜碱性粒细胞肿瘤细胞系KU812F检测牛乳及其替代品致敏性方法的建立

比较牛乳及其替代品释放组胺的能力,以建立体外细胞检测牛乳及替代品疑似过敏原组分致敏性的检测方法。以嗜碱性粒细胞KU812F为研究对象,通过牛乳过敏患者血清的孵育,使细胞处于致敏状态,再以牛乳及其替代品过敏原作为激发物,使细胞脱颗粒释放组胺。结果表明:利用嗜碱性粒细胞KU812F检测牛乳及替代制品组胺释放量的方法具有较高的可靠性及重现性,细胞释放组胺的量与过敏原的剂量相关,在一定的剂量范围内,组胺的释放率与过敏原的剂量呈正比,组胺释放率达到最大之后,组胺释放率与剂量呈负相关。     

花生致敏蛋白的研究进展

食物过敏已成为重要的食品安全问题。而花生蛋白是重要的食物过敏原,因此研究花生蛋白致敏的机制,探索脱敏方法,保证花生制品的安全性是亟待解决的课题。本文综述了花生过敏临床症状、花生致敏蛋白的识别及已建立的脱敏方法。并提出了探索合适的蛋白改性方法,既降低花生蛋白的致敏性又拓宽花生蛋白的应用范围是未来工作的关键     

特异性水解αs1-酪蛋白过敏原IgE作用表位aa 83～105的蛋白酶筛选

探索特异性水解αs1-酪蛋白作用表位的蛋白酶筛选方法。首先通过固相合成法合成αs1-酪蛋白作用表位aa 83～105,纯化鉴定后,偶联牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）制备完全抗原,然后免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,进而建立间接竞争酶联免疫吸附测定方法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）,以αs1-酪蛋白制备的单克隆抗体及建立的方法为对照。结果表明：合成作用表位的纯度在90%以上,与BSA偶联比为6.31。单克隆抗体的亚型为IgG1,效价可达到1∶320 000,可以与αs1-酪蛋白发生特异性免疫反应,与大豆蛋白无交叉反应。建立的间接竞争ELISA,竞争抑制曲线回归方程为y=－9.22x＋100.78（R2=0.989 1）,方法重复性、精确性均较好,检出限低于αs1-酪蛋白单克隆抗体建立的方法,初步筛选到木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶水解液的抗原残留量较小,需要进一步通过体内实验验证结果。αs1-酪蛋白作用表位aa 83～105 G1型单克隆抗体制备成功,为新型αs1-酪蛋白作用表位aa 83～105低致敏配方粉的开发,提供了ELISA检测高灵敏专用单克隆工具抗体。     

草鱼内脏蛋白质的水解特性

以草鱼内脏为原料,脱脂离心制备蛋白质粗提液,用SDS-PAGE方法测定蛋白质分子质量,然后以制备的草鱼内脏蛋白质为底物,比较研究木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶的水解特性。结果表明:草鱼内脏蛋白质分子质量分别约为32.4、13.2、2.8kD。6种酶解液中氨基酸含量在前6h随着时间的延长迅速增加,后趋于平稳;风味蛋白酶的氨态氮含量最高,碱性蛋白酶与中性蛋白酶之间差异不显著,其他各种蛋白酶两两之间差异都显著。而胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶多肽含量在酶解6h达到最大值,碱性蛋白酶在酶解9h时达到最大值,木瓜蛋白酶多肽含量最高,而风味蛋白酶的最低。随着酶解的不断进行,酶解液的呈味效果不断发生着变化,酶解液的呈味特性随着氨基酸和多肽的释放,鲜味逐渐明显,以感官评价为指标风味蛋白酶的鲜味最强,6种蛋白酶互相之间差异都显著。     

响应面法优化草鱼内脏蛋白质酶解工艺

为实现草鱼内脏蛋白质的高值化利用,本研究在单因素试验基础上应用响应面试验优化了木瓜蛋白酶水解脱脂草鱼内脏蛋白质的条件,响应面法分析得出4个影响因素的最佳组合为加酶量33 015 U/g、酶解温度62.35℃、酶解时间5.37 h、酶解p H 7.9,此时水解度为44.48%,肽得率为19.68%,水解液鲜味较明显。