一株产普鲁兰酶菌株的筛选鉴定、酶学性质及海带多糖酶解产物的抗氧化活性

本研究从连云港海泥中筛选产普鲁兰酶菌株,利用形态学、生理生化特征、基因序列(16S rRNA和gyr B)进行分析鉴定。利用产酶菌株发酵制备普鲁兰酶,初步纯化后分析其酶学性质。利用该普鲁兰酶粗提物对海带多糖进行水解,并对其水解产物进行抗氧化活性分析。结果表明:筛选得到一株产普鲁兰酶的巨大芽孢杆菌P6(Bacillus megaterium),经发酵纯化后普鲁兰酶比活力为62.3 U/mg,分子量约为43 k Da。该酶的最适反应温度为45℃,最适p H为6.5,在温度40℃下保温5 h,相对残余酶活达95%以上,而60℃下保温1 h,酶全部失活。在p H6~7.5之间保温12 h后,该酶仍有40%以上的相对残余酶活。DPPH和·OH自由基清除实验表明:海带多糖经普鲁兰酶水解后抗氧化活性显著增强(p0.05),为普鲁兰酶在食品工业中的应用研究提供了新的方向。     

Thermococcus siculi HJ21 α-淀粉酶Asp186定点突变对酶活性的影响

为确定超嗜热古菌Thermococcus siculi HJ21 α-淀粉酶(TSA)中特定氨基酸及所在位点与酶活性间的关系,以含TSA基因的pEt-28a-His6质粒为模板,利用定点突变技术,将第186位点的天冬氨酸(Asp)突变为天冬酰胺(Asn),突变子转化至E.coli BL21(DE3)并经IPTG诱导表达,测定突变前后的酶活性,定点突变后的TSA无酶活性;采用DNAStar和Deepview蛋白分析软件,预测突变前后TSA蛋白的二级结构和三级结构,结果表明Thermococcus siculi HJ21 α-淀粉酶的186位点对维持TSA的酶活性具有重要意义,它的突变导致酶蛋白二级结构组件及氢键网络的改变。     

耐高温α-淀粉酶高密度高表达发酵条件的优化

通过摇瓶实验对产耐高温α-淀粉酶的重组菌E.coli BL21的高密度高表达发酵条件进行研究。考察不同培养基和不同发酵条件对该菌株产耐高温α-淀粉酶的影响,并利用正交试验进行优化。结果表明:在葡萄糖0.5g/L,酵母粉15g/L,pH6.5,诱导时机为接种后发酵4h,诱导时间为6h,IPTG添加量为0.8mmol/L,接种量为体积分数3%的优化条件下,该重组菌发酵液菌体生物量为原来的1.29倍,酶活力达到8.754U/mL,是原来的1.55倍,目的蛋白的表达量也为原来的1.24倍。     

微生物发酵法制备太平洋牡蛎水解液

将米曲霉Aspergillus oryzae AS3.951接种到太平洋牡蛎(Ostreagigas thunberg)肉匀浆液中发酵培养,利用米曲霉产生的蛋白酶和淀粉酶水解牡蛎肉制备牡蛎水解液。通过单因素试验及正交试验探索发酵条件对太平洋牡蛎蛋白质回收率和糖原回收率的影响,发现起始pH为7.0时,蛋白质浓度为15%,装液量20%(V/V),140 r/min,30℃发酵48h,蛋白质回收率和糖原回收率最大,分别为85.33%和90.52%。这表明利用米曲霉发酵太平洋牡蛎制备水解液是可行的,并为进一步利用统计学方法提高米曲霉发酵太平洋牡蛎制备高蛋白回收率和糖原回收率水解液奠定基础。     

混菌发酵提高甘薯渣饲用价值的研究

对选育的扣囊拟内孢霉K991株、产朊假丝酵母C986株和绿色木霉T995株混合发酵甘薯渣生产的单细胞蛋白产品的饲用价值进行了研究。发酵产品的粗蛋白含量由发酵前8%提高到 2 6 9% ,纤维素降解了 36 16 % ,产品富含酵母活细胞和消化酶。替代 2 0 %饲喂猪试验表明 :产品适口性好 ,能降低料肉比 ,促进生长 ,具有较好的应用前景     

鞍山市中学生参加阳光体育活动现状的调查与分析

采用问卷调查、数据统计、文献资料、实地考察、访谈等研究方法,对鞍山市区5所中学的400名初中学生参与阳光体育活动的现状进行了调查与分析。并针对所调查结果,提出了相应的建议。     

海洋氧化节杆菌KQ11右旋糖酐酶清除甘蔗制糖中右旋糖酐的研究

对海洋氧化节杆菌(Arthrobacter oxydans)KQ11右旋糖酐酶清除甘蔗汁中右旋糖酐进行研究。在单因素试验的基础上,通过正交试验得到右旋糖酐酶水解甘蔗汁中右旋糖酐的最佳工艺条件:酶剂量0.1 U/mL甘蔗汁、pH值6.5、反应温度50℃、反应时间20 min,可清除83%右旋糖酐。超声功率600 W、酶剂量0.1 U/mL甘蔗汁、pH6.5、温度50℃、超声15 min,可清除88.7%的右旋糖酐,同时甘蔗汁的黏度降低20%。     

海州湾水产品体内微量元素锶的分布与释放研究

为探究水产品体内微量元素锶的含量及分布,该试验采用电感耦合等离子体质谱法检测微量元素锶,对海州湾水产品花蛤、牡蛎、海螺、虾姑、梭子蟹、虾虎鱼中锶的分布和释放进行研究。其中虾虎鱼的锶含量最高,为3.33 mg/kg。锶在虾虎鱼体内分布不均匀,以骨骼中含锶元素最多,为80.45 mg/kg。酸性条件有利于鱼骨中锶的释放,在水杨酸和酒石酸溶液可以释放40%以上的锶。延长烹饪时间和添加食醋有利于锶的释放。     

海洋细菌Catenovulum sp. DP03两个右旋糖酐酶差异分析

右旋糖酐酶是一类能够专一性水解右旋糖酐α-（1,6） 糖苷键的糖苷水解酶,在食品工业以及龋齿的防治方面都有着重要的应用,其主要来源于微生物。提取海洋细菌Catenovulum sp. DP03的基因组并测序,从中挖掘编码右旋糖酐酶的基因,在大肠杆菌中进行异源表达,并对重组右旋糖酐酶性质进行比较分析。海洋细菌Catenovulum sp. DP03中含有两个编码右旋糖酐酶的基因GL002870与GL002872,其大小分别为2 511 bp和2 805 bp;编码的蛋白质Cadex2870与Cadex2872的3D结构与AoDex的结构相似,AoDex的催化区域Q418-D440分别对应Cadex2870的Q431-D453以及Cadex2872的Q425-D447。Cadex2870 与Cadex2872的比酶活分别16.2 U/mg和4 U/mg,最适催化温度分别为45 ℃与30 ℃,最适催化pH分别为7和8;Cadex2870水解右旋糖酐的产物为异麦芽七糖、异麦芽五糖、异麦芽四糖以及少量异麦芽糖;Cadex2872水解右旋糖酐的产物为异麦芽七糖、异麦芽五糖以及异麦芽四糖。证实海洋细菌Catenovulum sp. DP03中含有两个编码右旋糖酐酶的基因,这两个右旋糖酐酶的蛋白质结构以及酶学性质均有差异。     

一株海洋耐冷菌的分类鉴定及其生长特性和抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选出一株产广谱高活性抗菌物质的海洋耐冷菌G1,该菌的生长温度范围为10~40℃,最适生长温度为20℃;生长的pH范围为3.0~12.0,最适生长pH为9.0;生长的NaCl质量分数为1%~9%,最适生长NaCl质量分数为4%,无NaCl不生长。根据其形态特征、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析结果,确定其为交替假单胞菌。菌株G1抗菌活性研究表明,其发酵产物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌以及大肠杆菌、鳗弧菌等革兰氏阴性菌都有显著的拮抗作用。结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值。