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从变形假单胞菌JUIM01中克隆2-酮基葡萄糖酸操纵子(kgu操纵子),明确其基因组成及生物学信息。根据报道的假单胞菌的基因组信息设计简并引物,采用LA-PCR技术克隆变形假单胞菌的kgu操纵子,对克隆的基因片段进行测序,在此基础上利用生物信息学方法进行分析。结果表明:克隆到的基因片段全长为6 130bp,其中包括基因ptx S、kgu E、kgu K、kgu T和kgu D,分别编码2-酮基葡萄糖酸代谢调控蛋白Ptx S、2-酮基葡萄糖酸差向异构酶、2-酮基葡萄糖酸激酶、2-酮基葡萄糖酸转运蛋白和2-酮基葡萄糖酸-6-磷酸还原酶;这些基因与铜绿假单胞菌PAO1的kgu操纵子中相应基因的序列一致性达56.15%~76.74%,然而变形假单胞菌的ptx S很可能并不位于kgu操纵子中。研究首次从变形假单胞菌中克隆到kgu操纵子,并对其进行生物信息学分析,为变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸代谢机理的研究奠定了基础。 相似文献
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建立超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱快速分析辣椒粉中7种酸性色素的方法。样品经甲醇∶水(1∶1,体积比)提取后,用ZORBAX Eclipse Plus C18(3.0 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱分离,以乙腈和10 mmol/L乙酸铵水溶液为流动相进行梯度洗脱。在正负离子切换模式下测定7种酸性色素。在全扫描模式下提取7种酸性色素的保留时间和一级母离子精确质量数以及同位素丰度比,实现对辣椒粉中7种酸性色素的快速测定;以自动触发采集的二级碎片离子精确质量数进行确证。结果表明,目标化合物的线性关系良好,相关系数(R2)大于0.99,回收率为78.6%~105.3%,相对标准偏差为3.5%~6.3%。该方法适用于辣椒粉中7种酸性色素的快速定性筛查和定量分析。 相似文献
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采用降落聚合酶链式反应(touchdown polymerase chain reaction,TD-PCR)技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆了编码2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的基因kgu E。将目的基因与质粒pET-28a(+)重组后转入宿主表达菌中,获得了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kgu E。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表达了一个分子质量约为30.5 ku的融合蛋白,且该蛋白的Western-blot鉴定结果显示为阳性。生物信息学分析结果表明,该蛋白是一种由256个氨基酸残基组成的分子质量为28.5 ku的亲水性蛋白,与恶臭假单胞菌的2-酮基葡萄糖酸差向异构酶在氨基酸序列上的一致性达78%,定位于细胞质中,其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲所占的比例分别为40.62%、17.19%和42.19%。本研究结果为变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的功能研究提供了一定理论支持。 相似文献
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采用聚合酶链式反应技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆2-酮基葡萄糖酸激酶的全长基因kguK,并在此基础上构建了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kguK。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表达了一个特异的分子质量约为36.0 ku融合蛋白,且该蛋白的Western-Blot鉴定结果显示为阳性。生物信息学分析结果表明,该蛋白是一种由305个氨基酸残基组成的亲水性蛋白,定位于细胞质中,存在着与pfkB家族蛋白类似的保守结构域,其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲所占的比例分别为35.73%、12.79%和51.48%。 相似文献
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22种中药醇提物抑制蛋白质非酶糖基化作用的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
比较22种中药醇提物和氨基胍对体外蛋白质非酶糖基化反应的影响。分别将上述22种中药各5g,用乙醇提取、浓缩并定容至lOOml,取lml提取液与lml磷酸缓冲液混合,90℃水浴40min,然后与乙二醛和牛血清白蛋白混合,反应混合液于37℃孵育15d,用荧光泫测定糖基化产物的自发荧光值,计算不同中药醇提物对体外蛋白质非酶糖基化反应的抑制率。结果表明,在检测的浓度范围内,抑制率最高的是槐米(抑制率为96.7%),其次为大黄(抑制率为93.79%)和黄芩(抑制率为93.15%),它们都显著高于氨基胍的抑制率(89.56%)。槐米、大黄和黄芩的乙醇提取物可明显抑制体外蛋白质糖基化反应的结果预示它们在防治糖尿病血管并发症方面有应用潜力。 相似文献
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在前期优化培养基的基础上,本实验比较了摇瓶的温度、pH、装液量和发酵罐培养的通气量、转速和培养时间等不同培养条件对猴头菌转化EGB生物活性的影响。结果显示,含有0.5%的EGB培养基中,猴头菌转化EGB温度为25~30℃,初始pH范围为5.5~6.5,此时对非酶糖基化反应的抑制率较高。同时添加10g/LCaCO3可稳定pH,提高发酵液对非酶糖基化反应的抑制率。20L发酵罐转化EGB最佳工艺条件为72h前通气量为8L/min,72h后为4.8L/min,转速为120r/min。 相似文献