Pyrococcus yayanosii L-天冬酰胺酶在枯草芽孢杆菌中分泌途径的鉴定及其分泌能力的提高

食品安全（GRAS）菌株枯草芽孢杆菌由于其具有良好的分泌表达能力及易于基因工程操作等特性被广泛用作外源蛋白质的表达菌株。枯草芽孢杆菌中蛋白质的分泌大多依赖于信号肽介导的Sec分泌途径（General secretion pathway）和Tat分泌途径（Twin-arginine translocation pathway）。在本研究中，通过信号肽预测、蛋白质N端测序等手段发现来自于Pyrococcus yayanosii L-天冬酰胺酶在枯草芽孢杆菌中的分泌并不依赖信号肽，该酶通过非经典蛋白质分泌途径（non-classical protein secretion pathway）进行分泌。通过信号肽筛选，发现最适合该酶在枯草芽孢杆菌中表达的信号肽为Tat分泌途径信号肽SP_phoD，并通过共表达分子伴侣PrsA的方式将该L-天冬酰胺酶的分泌量提高了72.11%。     

耐盐性谷氨酰胺酶在Bacillus subtilis 168中的整合表达

微生物质粒过表达外源基因,会由于质粒分离稳定性低、种子培养基中需添加抗生素等原因,限制其在工业生产中的应用。为了得到一株可用于工业生产谷氨酰胺酶的菌株,选择食品安全级Bacillus subtilis 168作为宿主,将来源于Micrococcus luteus K-3的编码耐高浓度盐的谷氨酰胺酶基因(Mglu)插入到其染色体上进行整合表达。选择了2个内源性蛋白酶基因作为整合表达位点,通过lox序列的重组消除抗性基因,得到无抗性基因的重组谷氨酰胺酶表达菌株。遗传稳定性研究表明,在不添加抗生素的条件下,通过连续传代重组菌株并测定发酵酶活,发现重组菌株连续传42代时,酶活基本不变。随后,采用5 L发酵罐对重组菌株进行分批补料发酵,最高酶活达到了41.5 U/mL。本研究对提高谷氨酰胺酶重组菌株遗传稳定性提供了借鉴。     

重组大肠杆菌表达17β-羟基类固醇脱氢酶全细胞催化合成宝丹酮的研究

宝丹酮作为一种重要的蛋白同化雄性激素类固醇，具有提升肌肉质量和耐力的功能。宝丹酮的传统合成方法是以1,4-雄烯二酮（ADD）为底物通过化学法合成，但过程复杂、污染严重。17β-羟基类固醇脱氢酶（17β-HSD）可催化甾体化合物C-17位点的氧化还原反应，实现ADD和宝丹酮的相互转化。本研究通过基因序列同源性分析，筛选到6种不同来源的17β-HSD基因并对其在大肠杆菌中进行异源表达。利用不同重组菌转化ADD合成宝丹酮，结果表明重组菌BL21/pET28a-HSDPy的ADD转化率最高，因此选择BL21/pET28a-HSDPy进行进一步研究。鉴定了重组菌的酶学性质并优化其全细胞转化条件。结果表明在生物量为36 g·L^-1、底物浓度为5.40 g·L^-1条件下，经过两次补料，获得了3.66 g·L^-1宝丹酮，比优化前提高了4.1倍。而且在生物转化过程中未检测到副产物。为生物合成宝丹酮提供了可能。     

大型钢结构屋盖整体卸载分析

某大型钢结构屋盖为空间管桁架构成的曲面钢结构体系,采用有限元仿真计算,分析了钢结构屋盖卸载前后的变形,根据卸载前和最终成形后的变形,确定卸载思路;分析典型部位的应力和应变情况,为结构全过程卸载安全提供了计算依据。     

加强思想政治工作 深化改革公交企业

总结了上海巴士一汽公司在转换机制、深化改革的过程中,加强思想政治工作的必要性探索思想政治工作与经济建设相结合、强化超前意识及不断开创新局面的一些有效措施。     

20分钟 百篇博文炮制电子书

作为一个爱写博的人，不知不觉博客上的文章已有近百篇。最近想把博客上的文章保存到电脑上，做成电子书，这样即使将来博客关闭了，文章也少不了。可近百篇博文，分别一一保存很繁琐，况且有些博文中还有图片，保存后排版成电子书，就更加费时费力。经过一番研究，笔者借助一个网站和Word2010，用20分钟就将近百篇博文做成了PDF电子书。     

微生物酸化——新型的废水生物处理技术

介绍了微生物酸化处理废水的机理 ,列举了很多实验数据说明微生物酸化过程中主要化学成分的变化情况。最后 ,还对微生物酸化的优点作了一些总结     

光催化-Fenton工艺处理废纸制浆废水

为有效处理废纸制浆废水,采用氙灯照射下的光催化-Fenton技术,研究不同反应器、曝气、草酸钾、H2O2投加方式和废水质量浓度对光-Fenton工艺去除废水中TOC或吸光度的影响.结果表明,提高光照强度可提高TOC去除率;添加适量的草酸钾可提高处理效果;H2O2分两次投加可取得较好的处理效果,大大减少对催化剂的需求;在处理过程中使废水暴露于空气可提高有机物的脱氯效果,但曝气对处理效果并无益处.对于TOC为185 mg/L左右的废纸制浆废水,在[H2O2]=1000 mg/L、[Fe(Ⅱ)]=100 mg/L、pH=3.0、温度为30℃的条件下,经过30 min处理,废水的TOC可去除63%以上.     

基于改进扎列茨基解的三相土固结沉降研究

研究表明三相土中含气孔隙水的可压缩性将对固结沉降过程产生实质性的影响,因此有必要在固结沉降问题的研究中考虑三相土。鉴于目前的土体固结分析方法很少涉及三相土,基于改进扎列茨基解求解三相土的固结沉降问题,并进行参数敏感性分析得出:渗透系数愈大,沉降发展愈快;泊松比越大,最终沉降越小等结果。另外该近似解能够较好地求解三相土固结沉降,具有一定的应用价值。     

轻轻松松搞调查

调查统计,是一项无论日常工作还是学习时都经常用到的统计工作,传统的纸质调查表已经过时了,发放费时,统计费力,浪费人力和时间。在网络日益普及的今天,依托网络平食做调查,绿色环保,简单方便。