山茱萸果汁RP-HPLC梯度洗脱优化实验研究

采用反相高效液相色谱(RP-HPLC),建立山茱萸果汁定性定量分析方法.经梯度洗脱优化出的色谱条件为:用Hypersil GOLD C18色谱柱,以体积分数为0.1%磷酸水溶液(含2%乙腈)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱时间分别为0、8、12、26和55 min时,B体积分数(%)分别为0、0、8、8和26,流速为1.0 mL/min,柱温为35 ℃,波长为259 nm.采用中位数法筛选10批山茱萸果汁HPLC图谱的特征峰,确定15个共有峰为果汁定性分析的指标峰.以马钱苷吸收峰为参照,对果汁HPLC图谱中马钱苷进行定量测定,其线性范围为0.092～0.920 μg,平均回收率为99.06%(RSD=1.62%),马钱苷平均含量为2.162 mg/mL(n=10).     

枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转氨酶的异源表达

以野生型枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增获得带有sD序列及谷氨酸棒状杆菌信号肽AS0949的BTG基因。将其与大肠杆菌-谷氨酸棒状杆菌穿梭表达载体pXMJ19连接,构建重组质粒pXMJ19-Sbtf转化谷氨酸棒状杆菌ATCC13032。经IPTG诱导后该重组茵发酵液具有交联酪蛋白的能力,表明该重组茵能够实现分泌表达。     

低温碱性脂肪酶产生菌的筛选及产酶培养基的优化

以橄榄油为唯一碳源,从渤海湾盐碱地被油污染的土样中分离筛选出1株产低温碱性脂肪酶菌株34-5,初步酶学性质研究表明,该菌所产脂肪酶的最适温度为25℃,最适pH为9．6,该菌的16S rDNA基因序列与伯克霍尔德氏菌（Burkholderia）的同源性为99％摇瓶实验表明,该菌株最适产酶培养基为（g／L）;淀粉10,黄豆饼粉20,玉米浆20,K2HPO4 1,聚乙烯醇大豆油乳化液20．其最高酶活为6．87U／mL。     

赤霞珠干红葡萄酒产地识别的研究

以取自不同产地的37个赤霞珠干红葡萄酒样品的38项指标的检测结果为数据,用主成分分析（PCA）筛选出8个有代表性的主成分,利用其因子得分进行产地判别分析（DA）,判别效果较好,其中昌黎、蓟县、贺兰山A和贺兰山B4个产地100％识别,南疆、北疆识别效果略差,但总识别率达到86．5％,并建立了判别方程模型。     

嗜碱性芽孢杆菌产高碱碱性蛋白酶发酵培养基及发酵条件的研究

对一株高产高碱碱性蛋白酶的嗜碱性芽孢杆菌的发酵培养基及发酵工艺进行了优化。确定了发酵培养基所采用的棉籽饼粉最适粒度为 80目 ,麦芽糊精的最佳DE值为 3 0 %。并确定了该菌株的最适发酵培养基配方为 ( g/1 0 0mL) :棉籽饼粉 3 ,酵母浸粉 1 75 ,麦芽糊精 1 0 ,柠檬酸钠 0 3 ,CaCl2 0 3。K2 HPO4 1 ;最适摇瓶发酵条件为 :种龄 1 2h ,接种量 2 %,装液量 5 0mL/2 5 0mL ,摇床转速 2 0 0r/min ,3 4℃ ,发酵 5 4h ,碱性蛋白酶的发酵单位可达 3 3 985u/mL ,比优化前提高了5 4 48%。此外 ,还进行了 5L罐放大实验 ,在 5L罐所确定的最适工艺条件下 ,发酵单位可达3 65 79u/mL。     

酵母应激条件下产生抗氧化剂的研究

本文对酿酒酵母在低温和H2O2两种应激条件下产生的LYCD进行了研究,主要探讨了其中抗氧化物质的变化情况.结果表明：低温预处理能够显著增加细胞内谷胱甘肽（GSH）含量,提高SOD、CAT活性.低温预处理可以诱导对致死浓度H2O2的抗性.低温和H2O2刺激酵母细胞形成的LYCD对细胞具有抗氧化作用.     

色褐链霉菌磷脂酶D基因pld的克隆与表达

利用表达载体pET-22b( ),实现了色褐链霉菌磷脂酶D基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达.利用镍亲和柱对表达产物进行纯化,将纯化后的重组磷脂酶D作用于底物卵磷脂和丝氨酸定向合成磷脂酰丝氨酸,并用HPLC法检测酶活力.结果表明,目的蛋白可在短时间内进行大量表达.转酯反应6 h后卵磷脂的转化率达到31%,重组磷脂酶D活力达到39 U·(mg蛋白)-1.     

硅纳米粒子吸附交联固定化蔗糖异构酶的制备及其酶学性能研究

利用蔗糖异构酶(sucrose isomerase, SIase)异构催化蔗糖是目前生产异麦芽酮糖最常用的方法。以硅纳米粒子(silica nanoparticle, SNP)为载体、戊二醛(glutaraldehyde, GA)为交联剂,采用吸附法和吸附-交联法对蔗糖异构酶进行固定化,分别得到S-CLEAs和S-CLEAs-GA两种固定化酶。实验结果表明,固定化的最优条件是：硅纳米粒子6.25 mg/mL,酶加量8.6 U/mL,吸附时间为5 h,戊二醛的质量分数为0.08%,交联时间为2 h,此时S-CLEAs和S-CLEAs-GA的酶活力回收率分别为51.2%和44.9%。与游离酶相比,2种固定化酶在较宽的pH和温度范围内始终保持较高的生物催化活性。另外,S-CLEAs和S-CLEAs-GA重复使用15次后,酶活力回收率分别为55.1%和77.9%。表明SIase经此方法固定化后,固定化酶具有优异的热稳定性、pH耐受性和操作稳定性,其中S-CLEAs-GA的表现更好,有良好的工业应用前景。     

枯草芽孢杆菌工程菌产中温α-淀粉酶发酵条件优化

利用基因工程的手段获得高产中温α-淀粉酶基因工程菌株pWB—amy／WB600,对其在7L发酵罐中的发酵条件进行了研究和优化。结果表明,发酵过程中通过调节通气量和搅拌转速来控制发酵液中的溶氧含量,使溶氧浓度控制为15％-25％;采用流加氨水的方式控制发酵液的pH值为6．0～7．5;并且利用间歇补料的方式,有利于酶量的积累,优化过后的发酵液酶活比未优化时提高了41％。     

Rhizopus chinensis 12#发酵产生纤溶酶的分离提纯

分离自南方小酒药的华根霉12#(Rhizopuschinensis12#)以豆粕和麸皮为原料固体发酵可产生多种纤溶活性组分.采用饱和度40%～70%的硫酸铵溶液分步盐析、OctylSepharoseFastFlow疏水层析、Q SepharoseHighPerformance离子交换层析和SephacrylS 100凝胶层析方法对活性组分进行分离提纯,得到电泳纯的纤溶酶.SDS PAGE方法测定该酶相对分子质量为18000,凝胶过滤方法测定相对分子质量为16600,表明该酶由单亚基组成.