牦牛血抗氧化肽制备方法对比及分离纯化研究

为研究牦牛血抗氧化肽最佳制备方法,以牦牛血为原料,分别采用枯草芽孢杆菌发酵法、碱性蛋白酶解法、菌酶联合法制备3种牦牛血抗氧化肽,依次简写为BF、AP、BA。应用羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O_2-)清除能力,脂质过氧化抑制能力、还原力4种体外抗氧化实验,对比3种牦牛血抗氧化肽的抗氧化活性。以超滤、凝胶层析法对制备的较高活性产物进行分离。结果表明:3种抗氧化肽活性大小为BABFAP,BA有最大的·O_2-清除能力、脂质过氧化抑制能力及还原力,表明制备牦牛血抗氧化肽的最佳制备方法为菌酶联合法;超滤分离菌酶联合制备产物获得分子量5 kD的抗氧化肽活性高于分子量10 kDa、介于5~10 kDa的抗氧化肽,对·OH的IC50值为1.62 mg/mL;该组分经凝胶层析分离后得到4个组分,其最高活性组分Ⅰ对·OH的IC50值达到0.72 mg/mL。     

枯草芽孢杆菌发酵牦牛血制备抗氧化肽工艺优化

为优化枯草芽孢杆菌液态发酵制备牦牛血抗氧化肽工艺,以酵解液的羟基自由基(·OH)清除率为主要指标,研究发酵时间、接种量、底物浓度对酵解液抗氧化效果的影响,在该基础上进行响应面优化试验。确定最佳发酵条件为:底物浓度75g/L,接种量2.5%(V/V),发酵时间69.5h。在该条件下制备出·OH清除率为74.48%的牦牛血抗氧化肽,·OH清除率理论值为75.78%,最终发酵上清液多肽含量为2.31mg/mL。