定点突变提高菜豆环氧水解酶的对映选择性

为了提高菜豆环氧水解酶（PvEH1）催化对氯环氧苯乙烷（pCSO）的对映选择性,利用定点突变构建了PvEH1^W102L、PvEH1^P137K及PvEH1^I151V三种突变体,分别研究了突变体全细胞动力学拆分rac-pCSO的催化特性,优化了PvEH1^W102L动力学拆分rac-pCSO的初始底物浓度及反应时间,通过分子模拟分析了PvEH1^W102L对映选择性提高的机理。结果表明,最优突变体PvEH1^W102L的E值为25.5,相对酶活为212.6%,分别是PvEH1的11.6倍与2.1倍;PvEH1^W102L动力学拆分150 mmol·L^-1 rac-pCSO,反应4 h后,可获得（R）-pCSO（产率为45.62%,ee_s为96.30%）和（R）-对氯苯基乙二醇（产率为50.91%,ee_p为90.26%）。分子模拟结果分析表明,PvEH1的102位色氨酸（W）突变为亮氨酸（L）降低了酶与（R）-pCSO的结合能力,从而提高了PvEH1^W102L对pCSO的对映选择性。     

饱和突变改善米曲霉11家族木聚糖酶AEx11A的催化特性

为改善米曲霉(Aspergillus oryzae)11家族木聚糖酶AEx11A的催化特性,作者采用全质粒PCR方法对AEx11A基因(AEx11A)中编码Thr~(98)、Asn~(100)、Val~(124)、Pro~(129)和Ile~(132)的密码子实施饱和突变,构建饱和突变文库。以木聚糖酶的酶活性为指标,采用DNS法从文库中筛选出酶活性提高30%以上的转化子。对其中酶活性提高最明显的两个位点Thr~(98)和Val~(124)实施迭代饱和突变,筛选出最优突变子AEx11~(AT98D-V124Q),其纯化后的比活性及催化效率分别为AEx11A的3.04和2.74倍。此外,突变酶AEx11A~(V124T)的热稳定性较AEx11A有一定的提高,其余2个突变酶的温度特性与AEx11A差异不大。     

定点突变提高菜豆环氧水解酶的对映选择性

为了提高菜豆环氧水解酶(PvEH1)催化对氯环氧苯乙烷(pCSO)的对映选择性,利用定点突变构建了PvEH1~(W102L)、PvEH1~(P137K)及PvEH1~(I151V)三种突变体,分别研究了突变体全细胞动力学拆分rac-pCSO的催化特性,优化了PvEH1W102L动力学拆分rac-pCSO的初始底物浓度及反应时间,通过分子模拟分析了PvEH1~(W102L)对映选择性提高的机理。结果表明,最优突变体PvEH1~(W102L)的E值为25.5,相对酶活为212.6%,分别是PvEH1的11.6倍与2.1倍;PvEH1~(W102L)动力学拆分150 mmol·L~(-1) rac-pCSO,反应4 h后,可获得(R)-pCSO(产率为45.62%,ees为96.30%)和(R)-对氯苯基乙二醇(产率为50.91%,eep为90.26%)。分子模拟结果分析表明,PvEH1的102位色氨酸(W)突变为亮氨酸(L)降低了酶与(R)-pCSO的结合能力,从而提高了PvEH1~(W102L)对pCSO的对映选择性。