食品微生物多轮次能力验证方案初探

目的探讨微生物多轮次能力验证方案及其在考察参试实验室检测能力的持续满意情况和评价实验室整体检测水平中的作用。方法通过食品微生物两轮次能力验证PTC-T013、9个微生物检测项目、11个检测样品分别进行5项定量检测和6项定性检测来考察参试实验室的检测水平;定量样品采用Z-比分数统计分析,定性样品直接与设定值比较,两轮次结果进行综合比较分析。结果 71.7%实验室取得了满意的结果,虽然两轮不满意的结果数相差不大(5.3%和4.3%),但是第2轮出现不满意结果的实验室数量明显减少(21.7%和8.7%)。结论多轮次能力验证方案为参试实验室提供更多的选择;其结果能更真实地反映出参试单位的持续满意状况及整体检测水平。     

PetrifilmTM快速霉菌酵母测试片法与GB 4789.15—2016在酸奶检测中的比较

目的比较Petrifilm~(TM)快速霉菌酵母测试片(RYM)法和GB 4789.15—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》测定质控样品、标准菌株及野生菌株、酸奶样品和人工污染酸奶样品中霉菌和酵母计数的一致性,研究Petrifilm~(TM)RYM法的特异性。方法选取2份霉菌和酵母计数质控样品、78株霉菌和酵母标准菌株及野生菌株、50份酸奶样品和50份人工污染酸奶样品,利用两种方法进行霉菌和酵母计数的测定,检测结果通过配对资料t检验以及对数值差值绝对值(|dlog|)汇总分析进行统计;同时利用Petrifilm~(TM)RYM法检测15株非霉菌和酵母菌株,考察Petrifilm~(TM)RYM的特异性。结果两种方法对质控样品、标准菌株及野生菌株、酸奶样品和人工污染酸奶样品检测结果的配对t检验均P0.05,差异无统计学意义;|dlog|≤0.50占比均为100.0%,表明两种方法的检测结果一致性较好。Petrifilm~(TM)RYM法检测非霉菌和酵母菌株,结果显示没有菌落出现,表明Petrifilm~(TM)RYM具有良好的特异性。结论 Petrifilm~(TM)RYM法和GB 4789.15—2016对质控样品、标准菌株及野生菌株、酸奶样品和人工污染酸奶样品中霉菌和酵母计数的检测结果一致性较好,且Petrifilm~(TM)RYM具有良好的特异性。     

蔬菜中腐霉利、克百威、对硫磷的检测能力验证样品研制及应用

目的 制备更贴近实际样品且均匀性和稳定性良好的能力验证样品,并通过能力验证项目分析全国实验室检测蔬菜中腐霉利、克百威、对硫磷的能力。方法 能力验证样品采用市售蔬菜汁添加目标物标准溶液的方式制备,并进行均匀性检验和稳定性检验;采用稳健统计得到指定值和能力评定标准差,利用z值对各参加实验室提交的结果进行评价。结果 所制备的样品经均匀性和稳定性检验样品符合能力验证要求;将所研制的样品应用于能力验证,全国共有94家实验室参加,其中参加腐霉利项目的实验室满意率为84.5%;参加克百威项目的实验室满意率为83.3%;参加对硫磷项目的实验室满意率为89.6%。结论 采用本研究中的制备方式制得的样品具有良好的均匀性和稳定性,能够满足能力验证样品的要求;能力验证统计结果表明,参加实验室的蔬菜中腐霉利、克百威、对硫磷的检测能力总体较好。通过本次能力验证活动对该领域实验室的检测水平有了一定了解,达到预期的效果。     

倾注平板计数法和纸片法测试菌落总数的比较研究

<正> 菌落总数主要是作为判定食品被污染程度的标记,也可以应用这一方法观察食品中细菌的性质以及细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供科学依据。该测试项目是2002年亚太实验室认可合作组织的食品微生物学能力验证计划(编号T030)的一个考核项目。参试实验室按使用的培养基不同菌落总数的测试方法分两种,分别为倾注平板计数法和再水化干燥纸片(3M     

奶粉中沙门菌的检测能力验证研究

目的 通过组织实施奶粉中沙门菌的能力验证，对国内实验室的沙门菌检测能力进行分析和评价。方法 采用人工污染的方式制备奶粉中沙门菌能力验证样品，即菌种复苏、增菌后配制成菌悬液加入配制好的复原牛乳中混匀分装，进行冷冻干燥；对制备好的样品进行均匀性检验和稳定性检验。本次能力验证设计3组不同的能力验证样品，每个实验室随机发送2个样品，将各参加实验室提交的检测结果与指定值比较，评定各参加实验室的测试结果为满意或不满意（假阴性或假阳性）。结果 全国共337家实验室参加该项沙门菌的检测能力验证，有满意结果的实验室323家，满意率为95.8%，有不满意（假阴性和假阳性）结果的实验室14家，占比为4.2%。共向实验室发送674个样品，658个结果满意，满意率为97.6%；16个样品结果不满意（假阴性或假阳性），占比为2.4%。结论 采用不同组别的样品随机编号且随机发样的方式，取得了良好的考核效果；本次人工污染方式制备的能力验证样品，充分考虑了目标菌、类似干扰菌和背景菌，制备的样品与实际样品一致性较好，考核效果良好。能力验证评价结果表明，全国参加考核的实验室奶粉中沙门菌检测能力总体较好，少部分实验室的检测能力有待改进提高。     

AOAC 991.14 PetrifilmTM大肠菌群测试片法与GB4789.3大肠菌群计数法的比较研究

将AOAC 991.14 PetrifilmTM大肠菌群测试片与我国国家标准GB4789.3进行比较并做验证试验。在20个国家和食品企业实验室对生肉、熟肉、水产品、调味品、冰品、原奶和奶粉7大类食品进行试验与分析。试验结果表明,用PetrifilmTM方法与国标GB4789.3法检测这7类食品样品中的大肠菌群,所得结果高度一致,说明使用PetrifilmTM大肠菌群测试片法检测食品中的大肠菌群等效于国标GB4789.3方法。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对阪崎克罗诺杆菌的鉴定及溯源

目的研究不同样品前处理方法对VITEK~?基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(VITEK~?MALDI-TOF MS,以下简称VITEK MS)鉴定阪崎克罗诺杆菌的影响及该方法对阪崎克罗诺杆菌的分型溯源能力,研究VITEK MS与MALDI 7090~(TM)MALDI-TOF/TOF MS(以下简称MALDI 7090)所得图谱的异同。方法选取3种不同样品前处理方法处理18株阪崎克罗诺杆菌野生菌株、2株阪崎克罗诺杆菌标准菌株和2株非阪崎克罗诺杆菌标准菌株,比较VITEK MS鉴定结果与传统鉴定结果的一致性;通过VITEK MS的鉴定结果和图谱的比对,研究不同样品前处理方法对阪崎克罗诺杆菌鉴定的影响;利用VITEK MS质谱图特征峰的聚类分析,对20株阪崎克罗诺杆菌进行溯源研究;同时比较VITEK MS与MALDI 7090所得图谱,研究两者的异同。结果 20株试验菌株的VITEK MS鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌,与传统的鉴定结果一致,并与2株非阪崎克罗诺杆菌标准菌株能明显地区分;3种不同样品前处理方法得到的鉴定谱图与标准谱图比对获得的鉴定结果可信度之间差异无统计学意义(P0.05),但质谱图中质谱峰数量和相对峰强度有明显差异,其中甲酸提取法在2 000~15 000 m/z范围内,相对峰强度5 m V的质谱峰数量达15个以上。在相似水平为80%的条件下,VITEK MS的聚类分析将甲酸提取法的20株阪崎克罗诺杆菌分为5个群,通过聚类分析及菌株来源能够推测阪崎克罗诺杆菌传播途径。VITEK MS和MALDI 7090得到的谱图,两者特征峰的出峰位置与相对峰强度无明显差异。结论 MALDI-TOF MS技术可以准确鉴定阪崎克罗诺杆菌;甲酸提取法更适用于阪崎克罗诺杆菌的MALDI-TOF MS鉴定;MALDI-TOF MS技术对阪崎克罗诺杆菌的溯源研究具有重要价值;VITEK MS与MALDI 7090所得谱图无明显差异。     

快速霉菌酵母测试片法与GB 4789.15—2016在3种类型食品中霉菌计数比较

目的比较快速霉菌酵母测试片(RYM)法和GB 4789.15—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》方法(以下简称国标法)测定3种类型食品样品中霉菌计数的一致性。方法选取90份糕点、面包、饼干样品,30份含乳饮料、植物蛋白饮料、固体饮料样品,30份保健食品样品并对3种类型食品样品进行人工污染得到的人工污染样品,利用RYM法和国标法进行霉菌计数的测定,检测结果通过配对资料t检验以及对数值差值绝对值(|dlog|)汇总分析进行统计。结果两种方法对3种类型食品样品以及人工污染样品检测结果在统计学意义上无显著性差异(P0.05);|dlog|≤0.50占比均为100.0%,表明两种方法的检测结果一致性较好。结论 RYM法和国标法对3种类型的食品样品及其人工污染样品中霉菌计数的检测结果一致性较好。     

AOAC PetrifilmTM菌落总数测试片法与食品中菌落总数测定国标方法的比较研究

目的:确证AOAC 990.12PetrifilmTM菌落总数测试片计数食品中菌落总数的检测性能.方法:对AOAC990.12 PetrifilmTM菌落总数测试片法与国家标准GB4789.2菌落总数测定法进行比较实验.在20个政府机构和食品企业实验室,对生肉、熟肉、水产品、调味品、冰激凌、原奶、奶粉和豆制品等8大类845份食品样品进行了测定.结果:AOAC 990.12PetrifilmTM方法与国标GB4789.2法检测8类食品样品的菌落总数测定结果的P值均大于0.05,无显著性差异.结论:使用AOAC 990.12PetrifilmTM菌落总数测试片法检测食品中的菌落总数等效于食品微生物学检验菌落总数测定的国家标准方法.     

多黏菌素类抗生素耐药性编码基因检测用质粒标准样品研制

目的 研制适合多黏菌素类抗生素耐药性编码基因检测用质粒DNA标准样品。方法 由National Center for Biotechnology Information（NCBI）数据库检索得到mcr-1、mcr-3、mcr-5基因参考序列,构建重组质粒和重组菌株;将重组菌传代至15代检测目标基因的遗传稳定性。提取重组质粒,真空干燥,制得标准样品。将标准样品水化、连续10倍梯度稀释,测定聚合酶链式反应（PCR）和实时荧光PCR（RT-qPCR）扩增目标基因的检出限。随机抽取质粒DNA标准样品,采用PCR法和紫外分光光度计法检验样品的均匀性及其在4 ℃、37 ℃、-20 ℃的贮存稳定性。结果 成功获得多黏菌素类抗生素耐药机制编码基因mcr-1、mcr-3、mcr-5基因片段,重组菌15代传代中目的基因遗传稳定。mcr-1、mcr-3、mcr-5标准样品PCR和RT-qPCR最低检出限分别为1.67×10⁴ 拷贝数/μL和1.67 拷贝数/μL、1.31×10⁶ 拷贝数/μL和13.1 拷贝数/μL、1.55×10⁵ 拷贝数/μL和1.55 拷贝数/μL。T检验表明,各基因随机抽取的12管标准样品质量间的F值均小于F_临界值,且PCR均可检出,均匀性符合要求。标准样品在4 ℃贮存90 d、37 ℃贮存14 d、-20 ℃贮存360 d,定性、定量检验结果稳定、无极显著性差异。结论 本实验制备的mcr-1、mcr-3、mcr-5质粒DNA标准样品目的基因遗传稳定,均匀性和贮存稳定性良好。本研究结果可用于多黏菌素类抗生素耐药机制的快速预测和相关基因检测的质控样品。