鲫鱼贮藏过程中微生物菌相PCR-DGGE分析及其防腐保鲜

采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-amplification and denaturing gradient gel electrophorsis,PCR-DGGE)技术,分析4℃冷藏条件下鲫鱼肌肉和鱼鳃的菌相组成及变化,并利用不同浓度(效价分别为67 608、32 359、2 239、1 820、1 157 IU/m L)抗菌脂肽溶液对鲫鱼进行浸泡处理,以未处理作为对照,分别测定其菌落总数、挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)、p H值和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)等指标,评价抗菌脂肽对鲫鱼冷藏保鲜效果。结果表明:鲫鱼贮藏过程中的微生物具有多样性,PCRDGGE技术确定气单胞菌属(Aeromonas sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、不动杆菌属(Acinetobacter sp.)和热杀索丝菌属(Brochothrix thermosphacta)为鲫鱼鱼肉的主要腐败菌群,荧光假单胞菌是鲫鱼贮藏过程中的优势腐败菌。而棉子糖乳球菌属(Lactococcus raffinolactis)、从毛单胞菌属(Comamonas sp.)和气单胞菌属(Aeromonas sp.)为鲫鱼鱼鳃的主要腐败菌群,表明鱼肉和鱼鳃在贮藏过程中,导致腐败的主要腐败菌群有一定差异性。同时,不同浓度的抗菌脂肽对鲫鱼均有明显的防腐保鲜作用,有效抑制了鲫鱼菌落总数、TVB-N值和TBA值的增加以及p H值的升高。其中,高浓度抗菌脂肽(效价为67 608 IU/m L)在4℃贮藏条件下使鲫鱼的货架期延长了6 d,说明抗菌脂肽对鲫鱼具有良好的保鲜作用,能明显延缓鲫鱼的腐败变质。     

广谱抗菌芽孢杆菌的筛选及其抗酵母物质的纯化和鉴定

从不同来源的2种野生蜂蜜中筛选出一株产广谱抗菌活性物质的芽孢杆菌LZ-5,其发酵产物对短小芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母及米曲霉等多种食品腐败微生物均有抑制作用。通过形态观察、生理生化实验、16S r DNA分析等手段初步确定LZ-5在细菌发育分类学上属于淀粉液化芽孢杆菌。利用有机溶剂萃取、Sephdex LH-20凝胶柱层析、高效液相色谱等方法对其发酵产物中对酵母菌有抑菌活性的物质进行分离纯化,利用液相色谱-质谱法测定分子质量,并与标准品进行比较,初步确定该物质为iturin A2、iturin A3和iturin A6的混合物。     

食品中酵母菌的分离鉴定及其致腐能力

参照食品安全GB 4789.15-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》中酵母菌的检测方法,从水果、蜂蜜中分离筛选酵母菌并根据其26S rDNA D1/D2区序列进行鉴定。从蜂蜜、草莓、香蕉、橙子、油桃、芒果中共分离得到3 株固囊酵母（Citeromyces matritensis）、3 株异常威客汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）、12 株季也蒙毕赤酵母（Meyerozyma guilliermondii）、1 株长孢洛德酵母（Lodderomyces elongisporus）、2 株葡萄有孢汉逊酵母（Hanseniaspora uvarum）和1 株海洋酵母菌（Metschnikowiareukaufii）。将每种酵母菌接种于苹果、油桃和香蕉中与空白对照进行对比,以食品腐烂的速率来判断酵母菌的腐败能力,确定了W. anomalus和 C. matritensis是上述3 种水果中主要的腐败酵母菌,除此之外,M. reukaufii对油桃有较强的腐败作用,M. guilliermondii对香蕉的腐败效果明显。食品工业中加强对上述这些腐败酵母菌的检测与控制,可以更好地防止腐败酵母对于食品工业造成的危害。     

基于可视化环介导等温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌

应用环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）建立基于颜色判定的快速、灵敏的金黄色葡萄球菌检测方法。根据金黄色葡萄球菌特异性靶基因SAR0395设计LAMP引物,建立可视化LAMP检测方法。优化的反应体系为：1.6 μmol/L内引物（FIP和BIP）,0.2 μmol/L外引物（F3和B3）,4.0 mmol/L MgSO4,1.0 mmol/L dNTPs,0.4 U/μL Bst 2.0 WarmStart? DNA聚合酶,120 μmol/L羟基萘酚蓝,扩增温度60 ℃,扩增时间60 min。在可视化LAMP体系中添加两条环引物（LF和LB）反应时间可缩短至20 min。该可视化LAMP反应60 min,其基因组灵敏度可以达到0.010 3 fg/μL,菌落灵敏度可以达到1.9 CFU/mL;利用46 株金黄色葡萄球菌和24 株非金黄色葡萄球菌证实该可视化LAMP具有良好的特异性和可靠性。本研究中建立的可视化LAMP可为金黄色葡萄球菌的快速检测提供一种新的技术。     

嗜酸乳杆菌NX2-6细菌素在猪肉保鲜上的应用

为探讨嗜酸乳杆菌NX2-6细菌素对冷鲜猪肉的保鲜效果,选取新鲜猪肉为研究对象,以菌落总数、pH、挥发性盐基氮、感官评价为鲜度指标,经不同浓度嗜酸乳杆菌NX2-6抑菌溶液浸泡30 min后,于4 ℃条件下贮藏9 d,测定不同时间点其鲜度的变化。结果表明,从3 d开始,4% S组的菌落总数水平就始终在对照组的1/10以下;pH变化拐点比对照组延迟2 d出现;TVB-N值比对照组推迟2 d到达国标最高检出限;从3 d开始中高剂量处理组气味评分始终显著优于对照组(p<0.05)。结论:4%嗜酸乳杆菌NX2-6抑菌溶液的保鲜效果最佳,猪肉变质较对照组可延缓2 d。     

Surfactin凝胶配方设计及其抑菌性能分析

为拓宽表面活性素Surfactin的应用范围,拟制备以卡波姆974p作为抑菌凝胶基质、Surfactin作为抑菌成分、三乙醇胺为中和剂的Surfactin抑菌凝胶。通过研究各成分对该抑菌凝胶的抑菌作用、pH值和黏度的影响,设计Box-Behnken响应面试验得到最佳配方,优化结果为Surfactin用量0.60%、卡波姆974p用量0.35%、三乙醇胺用量0.30%,此条件下得到的抑菌凝胶感官清亮,Surfactin性质更加稳定,有较强的瞬时杀菌活性,与溶液相比,对成熟的金黄色葡萄球菌生物膜的清除效果有显著提升,处理后的生物膜出现裂纹,颜色变浅透亮,分布稀疏,更容易被清除。     

唾液链球菌嗜热亚种Y-2产谷氨酸脱羧酶的影响因子确立

从产酶和细胞生长较好的MRS培养基出发,对Streptococcus salivarius ssp.thermophilus Y-2产谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD)的影响因子进行探讨,结果当培养基组成和培养条件为蛋白胨15g/L、牛肉膏12.5g/L、蔗糖12.5g/L、柠檬酸二铵2.0g/L、乙酸钠5.0g/L、K2HPO42.0g/L、CaCl2 2.0g/L、Tween 80 1.0ml、pH7.0、接种量2%(V/V)、发酵温度37℃、发酵时间12h时,较有利于菌株Y-2产GAD。Plackett-Burman设计法研究表明培养基初始pH值和K2HPO4为影响菌株Y-2产GAD的主要影响因素。经对菌株Y-2产GAD影响因素的筛选,新获得的培养基在组成上与MRS培养基相比已发生显著变化,GAD活力提高了1.3倍。     

脂肽类生物表面活性剂Surfactin的乳化性

采用白金板法对Surfactin的表面活性进行研究,并用浊度法和离心法对其乳化性进行研究。结果表明：Surfactin的临界胶束浓度为9.03×10－5 mol/L,可将水的表面张力由73.98 mN/m降至最低27.48 mN/m。在浓度为1×10－3～1.2×10－2 mol/L的NaCl溶液中,Surfactin溶液的表面张力随盐浓度升高逐渐降低并最终稳定在34 mN/m;Surfactin在121 ℃处理20 min后,其表面张力仍能保持在37.10 mN/m;在pH值为2～12范围内,其表面活性稳定并良好;表明Surfactin具有较强的NaCl浓度、温度、pH值的耐受性。浊度法测得Surfactin亲水亲油平衡（hydrophilelipophilic balance,HLB）值为14,对所需HLB值为12～16的油相乳化性能良好。     

一株产胞外多糖植物内生菌EJS-3菌株的分离和鉴定

从中药植物-百部的组织中分离到一株高产胞外多糖的植物内生菌EJS-3菌株,该菌株在产糖培养基中可以得到23.6g/L的胞外多糖,转化率为47.2%(gEPS/g蔗糖)。通过16SrRNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定。通过PCR扩增,得到1450bp的16SrRNA序列。PCR产物序列通过BLAST软件在NCBI网站中进行同源性比较。通过Bioedit7.0和Treedrawing软件绘制系统发育树。结果显示,EJS-3的16SrRNA序列和数据库中的类多粘芽孢杆菌KCTC1663菌株的序列的同源性为99.31%。在细菌系统发育分类学上,EJS-3菌株归属多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)。     

利用16S rDNA序列分析鉴定一株产抗菌物质的微生物菌株

从桃子上分离纯化得到1株产抗菌物质的菌株,命名为fmb3菌,通过抑菌实验发现该菌对革兰氏阳性菌蜡样芽孢杆菌、革兰氏阴性菌大肠埃希菌和真菌扩展青霉等3种常见食品病原菌具有显著的抑菌效果。利用16SrDNA分析对该菌作了系统进化鉴定,首先提取fmb3菌基因组DNA,根据不同种属的细菌的16SrDNA序列两端的保守性设计通用引物,对fmb3菌16SrDNA片断进行PCR扩增,对扩增得到的目标片段测序,并且利用NCBIBLAST对测序结果进行比对,构建系统进化树进行分析,初步确定该菌属于枯草芽孢杆菌。