常压室温等离子体(ARTP)诱变选育高核酸酿酒酵母

核糖核酸(RNA)是一类非常重要的生物分子,降解后得到的核苷酸、核苷及碱基具有广泛用途。酿酒酵母是目前生产RNA的主要食品级微生物。本研究采用常压室温等离子体(ARTP)技术进行酿酒酵母诱变育种,利用氯化钾敏感性筛选,多次反复诱变最终得到在以糖蜜为碳源的摇瓶试验中RNA含量为112 mg-RNA/g-DCW,提高了39%的突变菌株Y17aM3。经过对Y17aM3培养条件优化后,确定生产RNA最适接种量为10%,最适p H为5.5,最适温度为26℃,且传代稳定性良好。研究发现在最佳培养条件下,添加磷酸可使Y17aM3的RNA含量提高至119 mg-RNA/g-DCW;添加蛋白胨可使Y17aM3的RNA含量提高至122 mg-RNA/g-DCW。上述结果不仅证明ARTP诱变育种方法突变效果显著,可应用于工业微生物的选育,而且有助于降低基于核苷酸的食品添加剂的生产成本。     

毕赤酵母全细胞催化合成新型高倍甜味剂莱鲍迪苷A

本研究构建经密码子优化后的UDP-糖基转移酶UGT76G1和蔗糖合成酶AtSUS基因的重组毕赤酵母菌株GS115/p PIC9KUGT/p PICZA-At SUS,实现双酶在毕赤酵母中的胞内共表达。利用共表达菌株作为全细胞催化剂在体外进行催化反应,可成功将ST转化为RA,并在此基础上对其最适反应温度、反应p H、底物UDP浓度与底物蔗糖浓度条件进行优化。重组菌株经甲醇诱导,对不同发酵时间菌体的催化能力进行探究,确定发酵120 h菌体催化能力最佳,RA产量为0.58 mg/mL。对共表达菌株催化体系中全细胞催化条件进行优化,优化后的催化体系为:反应pH 7.0,UDP浓度1 mM,蔗糖浓度70 mM,MgCl_2浓度3 mM,ST浓度10 mg/mL,将OD_(600)为30的细胞与上述体系混合后在最适温度45℃下,200 r/min反应15 h,重组菌可将10 mg/mL ST转化为7.46 mg/mL RA,为RA酶法生物合成及其产业化应用提供技术支持。     

皱褶假丝酵母脂肪酶CRL1在毕赤酵母中的高效表达及其催化合成维生素E醋酸酯

本研究将经密码子优化的皱褶假丝酵母脂肪酶(Candida rugosa lipase) CRL1基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pHKA,构建得到重组菌株GS115/pHKA-CRL1;经摇瓶发酵并结合甲醇诱导120 h处理,该菌株对底物对硝基苯酚丁酯(p NPB)的水解活力达到39.73 U/mL。通过对AOX1启动子和α分泌信号肽同时进行改造,进一步获得重组菌株GS115/pHKA-AOX1m/αm-CRL1,其脂肪酶活力提高达到63.63 U/mL。发酵液上清液经超滤浓缩、硫酸铵沉淀后,再经脱盐和阴离子交换层析处理,获得纯化的重组CRL1。该纯化工艺的纯化倍数为5.41倍,回收率为33.81%。而纯化重组CRL1的比酶活为984.5U/mg。重组CRL1的最适温度为40℃,最适pH为7.5;经40℃保温6 h,仍保留52.99%的相对活力;在偏酸性环境中较为稳定。以摇瓶发酵、真空冷冻干燥后的重组CRL1为催化剂,在无溶剂体系中催化合成维生素E醋酸酯,在最适反应条件下(200 mg D-α-生育酚、1 mL乙酸酐、100 mg CRL1、反应温度60℃、转速200 r/min、反应时间9 h),D-α-生育酚的转化率在97.00%以上。     

油气集输管道在海洋环境中的腐蚀与防护

海底集输管道广泛应用于海洋石油工业,已经成为连续输送大量油(气)最经济、最可靠、最安全、最快捷的运输方式,如果海底油气集输管道发生泄漏,不仅影响油田的正常生产,而且还可能会对海洋环境造成威胁,甚至影响作业公司在国际上的形象。     

深水超长超重跨接管的设计与安装技术

针对我国南海某深水气田长达91m、质量达107t的超长超重水平式跨接管的运输和海上安装面临的挑战,提出了加装临时或永久性浮子及平衡重用于跨接管的安装就位,采用重达222t的均力架进行跨接管的吊装,利用A/R绞车和双滑轮组解决跨接管的深水下放,使用专用连接工具进行水平式连接器的水下连接等技术,并成功地完成该气田工程跨接管的安装作业。深水超长超重跨接管的设计与安装在国内尚属首次,其技术研究及应用成果可为我国其他深水油气田的跨接管设计安装作业提供参考。     

浅谈船舶调研对水下采油树设计的影响

为了对水下采油树设计进行输入,更好的进行水下采油树的详细设计和安装方案的设计,本文采用结合预调研和进行现场船舶调研的方式,对南海深水项目番禺35-2／35—1气田水下采油树的作业支持船舶的预调研和船舶调研过程和结果进行了研究,得到使用海洋石油706通过钢丝吊装从舷边安装番禺35—2／1水下采油树,南海五号作为完井作业支持船舶的方案。结论认为进行水下采油树的设计,必须有水下采油树安装／完井支持船舶的各种界面技术参数和吊装能力作为输入。船舶调研的数据和调研结果可能影响／改变水下采油树作业支持船舶的选择。在进行水下采油树作业支持船舶预调研的基础上,应及早准备现场船舶调研的内容,并尽早进行船舶调研,锁定所需的船舶资源。     

重组脂肪酶全细胞催化单糖酯的合成

利用毕赤酵母表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipaseB,CALB)为全细胞催化剂,以不同单糖(葡萄糖、果糖和甘露糖)为酰基受体,不同脂肪酸(月桂酸、油酸和棕榈酸)为酰基供体,在以不同有机溶剂为介质的非水相体系中催化合成糖酯.探讨全细胞脂肪酶CALB合成糖酯的反应条件,结果表明:毕赤酵母表面展示CALB全细胞催化剂在叔戊醇/二甲基亚砜(4:1,v/v)介质中可以有效的合成糖酯,研究中各种酰基受体和酰基供体在全细胞脂肪酶催化下均能合成糖酯,其中果糖作为酰基受体产物浓度最高.     

曲霉型豆豉生产中白点的防治

酪氨酸是豆鼓及其它大豆发酵调味品中产生白点，造成产品质量问题的主要原因（1，2）。为了减少白点，保证产品质量，可以通过控制生产工艺条件和添加保护剂等方法，但是尚若控制不当会出现影响风味的问题。抑制白点的出现，还可以从菌种选育出发。利用米曲霉的大豆发酵中，其蛋白酶水解大豆蛋白的反应生成各种氨基酸和少量的短肽而形成独特的风味。蛋白酶的水解作用包括中性蛋白酶优先切断邻近疏水氨基酸残基的肽键，生成含疏水氨基酸末端的肽链，其中包括含酪氨酸末端的肽链，在酪氨酸按肽酶（为酸性蛋白酶）的作用下生成酪氨酸，由于酪氨…     

双菌种固态发酵酱渣生产蛋白质饲料的研究

研究了以酱渣为主要原料微生物固态发酵生产蛋白质饲料的工艺条件。结果表明：以黑曲霉、假丝酵母组合发酵，培养基配方为酱渣90g、麸皮10g、尿素0．8g、KH2PO4 0．6g，培养基厚度约为2cm，接种量为10％，自然pH值，含水量65％-70％，发酵温度为28℃。酱渣经黑曲霉和假丝酵母组合菌种发酵2d后，粗蛋白质含量从17．28％提高到25．79％，粗纤维从16．45％下降到13．68％。同时产品的氨基酸总量比原物料提高了44．66％。     

番禺35-2/35-1气田水下生产系统的优化设计

解决好番禺35-2/35-1深水开发项目水下生产系统在设计过程中遇到的关键技术问题,可优化整个生产系统的设计,满足下一阶段海上安装和气田生产的需要,保证深水气田水下设施的经济性并降低风险。为此,在对水下生产系统设计温度、化学药剂注入、硬管与软管比选、连接器形式选择以及海底管线在线管汇的安装方案等方面问题进行梳理和分析的基础上,结合项目在基本设计阶段的成果文件和目前设备供应和海上安装承包商的制造能力和优势,以及当前世界深水开发的经验,在详细设计阶段对水下生产系统关键技术、水下生产系统设计优化方面初步总结出了一套适合该项目的方案。结论认为:详细设计阶段需要对基本设计阶段的成果进一步进行核实,并在全面考虑各方面影响因素的基础上对各个关键技术进一步优化,以保证项目的顺利开展,合理设计并节约投资。该成果为以后类似项目的开发提供了技术支撑与经验借鉴。