米曲霉蛋白酶动力学特性的研究

研究了在不同底物浓度、温度和pH下米曲霉蛋白酶水解酪蛋白产生酪氨酸的动力学特性。在反应时间为10min时,最佳反应温度为50℃,最佳反应pH为9。实验表明米曲霉蛋白酶水解酪蛋白生成酪氨酸的反应符合米氏方程,根据实验数据回归得到温度为40℃时的速度方程为r=0.243CS/0.0282＋CS,反应速度与氢离子浓度的关系为r=lgCH＋＋3.14013/0.19759＋0.05484（lgCH＋＋3.14013）＋（lgCH＋＋3.14013）^2。该蛋白酶在50℃下的失活规律符合双指数模型,相对酶活力与时间的关系为a=0.82531e^（-0.02169t）＋0.17469e^（-0.41914t）。在4～50℃的范围内,蛋白酶水解反应的活化能Ea为30.67kJ。还研究了不同化学组分对蛋白酶活力的影响,发现10mmol/L的H3BO3和Mg^2＋对该蛋白酶有一定的激活作用,而EDTA、SDS、Zn^2＋、Mn^2＋和Sn^2＋对蛋白酶有明显的抑制作用,10mmol/L的H2O2对该蛋白酶的抑制作用不明显。     

Mut^s型基因重组巴斯德毕赤酵母高密度发酵过程中甲醇流加的控制

在采用Mut^s表型基因重组巴斯德毕赤酶母（Pichia pastoris)发酵生产血管生长抑制因子（angiostatin）的过程中，诱导表达阶段甲醇的质量浓度对血管生长抑制因子的表达至关重要，因重组Mut^s型巴斯德毕赤酵母利用甲醇极慢，按文献方法流加甲醇时，甲醇逐渐积累达30g/l，血管生长抑素表达水平仅为4mg/L，采用甲醇检测与控制系统对甲醇流加进行反馈控制后，甲醇质量浓度可稳定控制在设定范围，采用此系统控制诱导阶段的甲醇流加，同时手动流加适量甘油以促进细胞生长，血管生长抑制因子表达水平量最高可达89mg/L。     

酶解星虫水溶性蛋白制备降血压肽的工艺研究

以可口革囊星虫水溶性蛋白为原料,利用胃蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解星虫蛋白制备降血压肽;并以酶解产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率为指标,对酶解条件进行优化,确定了星虫蛋白酶解的最佳条件为酶解时间4h、酶解pH为1.8、酶添加量为0.3％ (w/v),温度37℃,所得酶解产物的IC50为1.85mg/mL.同时对酶解产物的体内降血压活性进行了动物实验,研究表明,星虫蛋白降血压肽在给药后1h,收缩压(SBP)开始下降,一直持续8h,SBP平均降低了约17mmHg.     

臭豆腐卤液中细菌多样性研究

本研究从臭豆腐卤液中分离出6株可培养细菌,采用传统的微生物鉴定方法和16SrDNA鉴定方法对其进行了鉴定,其中5株为芽孢杆菌属,1株为鲁氏不动杆菌。通过提取卤液中细菌总DNA、16SrDNA扩增、构建克隆子、限制性内切酶片段长度多态性分析等对卤水中总细菌的多样性进行了研究,得到14种不同的基因分型,并对每种分型的代表克隆子进行测序,BLAST比对显示有部分细菌与Genbank中的细菌同源性较低,共得到3种有益乳杆菌,2种致病乳杆菌,2种螺旋体菌,2种拟杆菌,1种放线菌。三种方法结合,展示了臭豆腐卤液中主要含有两类有益菌:芽孢杆菌属和乳杆菌属,同时含有多种致病菌。     

植物乳杆菌X7021吸附重金属和降解亚硝酸盐能力的研究

目的 为了发掘植物乳杆菌X7021在食品发酵剂和益生菌方面的应用潜力, 本文研究了该菌株吸附重金属与降解亚硝酸盐的能力 。方法 采用分光光度法检测Cu2+和亚硝酸盐含量, 采用石墨炉原子吸收分光光度法检测Cd2+和Pb2+含量。探讨pH、温度、吸附时间和离子浓度等因素对植物乳杆菌X7021吸附重金属能力的影响, 以及亚硝酸盐浓度对其生长和降解能力的影响。结果 植物乳杆菌X7021对重金属的吸附率和吸附量均受到吸附条件的影响。首先，吸附量随着金属离子浓度的增加而增加, 而吸附率呈现出先快速下降后趋于平缓的趋势。其次, 吸附率和吸附量均随吸附时间增加而增加, 且植物乳杆菌X7021对Pb2+的吸附量明显优于Cu2+、和Cd2+。第三, Cu2+、Cd2+和Pb2+的最大吸附率分别在pH=7、7和6；且温度为37 °C时, 三种重金属离子的吸附率和吸附量均达到最大。除此之外, 植物乳杆菌X7021在24 h内几乎完全降解100 mg/L NaNO2, 且可耐受浓度高达700 mg/L的亚硝酸盐。结论 植物乳杆菌X7021能够有效吸附Cu2+、Cd2+、Pd2+等重金属离子, 且对亚硝酸盐有较强的降解和耐受能力, 在发酵食品及益生菌领域具有潜在的应用前景。     

计算机辅助的蛋白质降血压活性评估方法

目的 借助虚拟水解与分子对接软件, 建立蛋白质降血压活性评估函数。方法 采用Autodock软件将胃肠道蛋白酶水解可能产生的二、三肽与血管紧张素I转化酶(angiotensin I-converting enzyme, ACE)进行分子对接, 根据对接能量值对短肽的ACE抑制活性进行预测, 并对肽的结构特征进行了详细地分析和统计。基于肽段与ACE结合的能量值建立可评估食品蛋白质降血压活性(G值)的打分函数, 并对22条已知氨基酸序列的可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)蛋白质的降血压活性进行评估。结果 对于二、三肽, 由带电荷的氨基酸、芳香族氨基酸和脯氨酸组成的肽段更易与ACE结合, 此外, 酸性氨基酸(带负电荷)所组成的肽段也易与ACE结合。采用打分函数对22条可口革囊星虫蛋白质的降血压活性进行评估, 其中19条蛋白质具有较好的降血压活性。结论 可口革囊星虫是一种良好的降血压肽来源, 计算机辅助的基于对接能量值的ACE抑制活性预测以及打分函数建立对生物活性肽的研究具有重要的参考价值。     

Muts型基因重组巴斯德毕赤酵母高密度发酵过程中甲醇流加的控制

在采用Muts 表型基因重组巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)发酵生产血管生长抑制因子(angiostatin)的过程中 ,诱导表达阶段甲醇的质量浓度对血管生长抑制因子的表达至关重要 .因重组Muts 型巴斯德毕赤酵母利用甲醇极慢 ,按文献方法流加甲醇时 ,甲醇逐渐积累达 30 g/L ,血管生长抑制素表达水平仅为 4mg/L .采用甲醇检测与控制系统对甲醇流加进行反馈控制后 ,甲醇质量浓度可稳定控制在设定范围 .采用此系统控制诱导阶段的甲醇流加 ,同时手动流加适量甘油以促进细胞生长 ,血管生长抑制因子表达水平量最高可达 89mg/L .     

紫菜中提取抗菌活性物质初步探讨

首次从条斑紫菜中成功提取抗菌活性物质,并利用管碟法进行了抗菌性研究。提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有抑制作用。质量分数5%的紫菜提取液的抑菌效果大约相当于100μg/mL氨苄青霉素溶液。最佳提取条件为:提取时间3 h、固液质量比1∶(4～5),提取温度80℃。     

变形杆菌属脂肪酶LipK107的分离纯化、结晶及初步晶体学分析

经过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导,重组大肠杆菌高效表达出带有组氨酸标签的可溶性脂肪酶LipK107。通过亲和层析和凝胶层析两步法纯化,得到电泳纯的脂肪酶样品。在获得的纯酶基础上,进行了圆二色谱实验,以分析脂肪酶LipK107的二级结构组成。接着,使用悬滴气相扩散法进行了纯酶的结晶实验,经过晶体生长条件的初步筛选及优化,在0.1mol/L pH6.2柠檬酸钠,10%v/v异丙醇,15%w/v聚乙二醇4000条件下得到高质量的脂肪酶晶体,使用同步辐射光源收集了一套分辨率为2.0的X-射线衍射数据。     

高效毛细管电泳法测定黄泥螺黏液中活性多糖的单糖组成

目的:测定经提取纯化后黄泥螺黏液中3种活性多糖EBPA、EBPB1和EBPB2的单糖组成。方法:7种单糖标准品经α-萘胺衍生化以后,用不同浓度(55～85mmol/L)的硼砂作为电泳介质,探寻最佳电泳条件实现高效毛细管电泳分离,得到标准的a-萘胺衍生单糖的毛细管电泳区带电泳图谱。将提纯后的黄泥螺黏液中的3种活性多糖分别水解成单糖,用相同的方法在最佳电泳条件下经毛细管电泳分离,得到水解单糖的毛细管电泳图谱。结果:最佳工作条件:运行缓冲液为75mmol/L、pH10.4的硼砂水溶液,分离电压10kV,进样压力0.5Psi,进样时间10s,柱温25℃。通过与标准谱图对照分析,黄泥螺黏液中的活性多糖EBPA由鼠李糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖和岩藻糖组成,EBPB1由鼠李糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖和半乳糖组成,EBPB2由葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖和半乳糖组成。结论:高效毛细管电泳能有效分析多糖中单糖组分,灵敏度高,分离效果好。