青蛤多肽的酶法制备及对前列腺癌DU-145细胞的抑制活性

探讨青蛤多肽的制备工艺及体外抗前列腺癌DU-145细胞的活性。以氨基氮含量为检测指标,筛选最优酶种类并进行正交试验以获取最佳酶解青蛤内脏酶解工艺。经超滤截留、琼脂糖凝胶层析、高效液相色谱分离纯化及噻唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)活性筛选得到含有5个氨基酸的多肽(Ile-Leu-Tyr-Met-Pro)。对所得多肽采用MTT法测定DU-145细胞增殖抑制率;采用倒置显微镜、Hoechst 33258染色及透射电子显微镜技术观察细胞形态学变化;采用荧光法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用线粒体膜电位检测DU-145细胞凋亡情况;采用免疫组织化学法检测非转移性克隆23型(nm23H1)蛋白的表达。结果表明:制备青蛤多肽最佳酶是木瓜蛋白酶,最佳酶解条件是料液比1:4、pH 7.0、加酶量1 500 U/g、温度45.0℃、酶解时间4 h;所得多肽对DU-145细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间与剂量依赖性;处理后的DU-145细胞出现凋亡的形态学特征;其质量浓度和细胞内ROS的表达量呈正相关关系;线粒体膜电位降低率从4.22%提高到25.07%;免疫组织化学法结果显示nm23H1蛋白的表达量增加。青蛤多肽能明显抑制DU-145细胞的增殖,并通过诱导其发生凋亡而发挥作用。     

多羟基糖类物质对冷冻虾仁中水的重结晶的改善作用

探讨不同糖类对冻藏温度波动下冷冻虾仁的抗冻保水作用。以南美白对虾为对象,以焦磷酸钠和蒸馏水分别为阳性和阴性对照,在-55℃与-24℃冻藏温度波动条件下,分析低聚木糖、卡拉胶寡糖、海藻糖和海藻胶寡糖对虾仁肌肉品质特性的影响。结果表明,在温度波动条件下冻藏144 d过程中,相比于蒸馏水处理组,低聚木糖、卡拉胶寡糖、海藻糖和海藻胶寡糖显著降低了冷冻虾仁的解冻损失率,其中最低的为卡拉胶寡糖组(8.58%)。且糖处理组有效维持了虾仁肌肉组织的质构特性,弹性和咀嚼性最佳分别为1.42 mm和6.80 mJ。同时,几种糖类物质减缓了重结晶虾仁的肌原纤维蛋白含量(106.10 mg/g～111.67 mg/g)、Ca~(2+)-ATPase活性(0.124 U/mg～0.136 U/mg)和总巯基含量(7.6 mmol/L～8.1 mmol/L)的下降速率。微观结构观察发现,相比于蒸馏水组,糖类处理后的虾仁肌肉结缔组织结构较为完整,肌束间空隙较小,且并未发生大面积扭曲、断裂现象,其对冻藏虾仁组织结构具有较好的维持作用。由上,低聚木糖、卡拉胶寡糖、海藻糖和海藻胶寡糖可作为冷冻虾仁的抗冻保水剂加以开发与利用。     

硒化低聚氨基多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响。用噻唑蓝比色法分别考察硒化低聚氨基多糖、Na2Se O3对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响,并观察巨噬细胞形态的变化。通过中性红法、酶联免疫吸附测定法及实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法分别检测巨噬细胞的吞噬能力、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-6及IL-10细胞因子的分泌量及其m RNA表达水平。结果表明:硒质量浓度为100~1 000μg/L时,硒化低聚氨基多糖对细胞的相对增殖率无显著影响;而Na2Se O3的硒质量浓度超过200μg/L即对巨噬细胞RAW264.7产生细胞毒性作用。硒化低聚氨基多糖能增强巨噬细胞吞噬活性,显著提高RAW264.7细胞TNF-α、IL-6及IL-10分泌量及其m RNA表达水平,且效果比Na2Se O3处理组、低聚氨基多糖处理组及Na2Se O3+低聚氨基多糖复合添加组好。实验结果提示硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7具有一定的免疫调节作用。     

长鳍金枪鱼多肽制备及其对H2O2诱导的张氏肝细胞的保护作用

目的:以长鳍金枪鱼废弃物为原料提取多肽,探究其对H2O2诱导的张氏肝细胞的保护作用。方法:以H2O2诱导张氏肝细胞损伤建立细胞模型组,以相对增殖率为指标筛选长鳍金枪鱼废弃物最适酶种,通过正交试验确定最佳酶解条件。酶解产物经超滤、阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱方法纯化分离得到多肽,用噻唑蓝(MTT)比色法对其每步分离效果进行评价。多肽活性的评价是利用试剂盒方法测定张氏肝细胞上清液中AST、ALT、MDA、ADH和SOD的含量,倒置显微镜观察细胞形态及流式细胞仪检测多肽对H2O2诱导后的张氏肝细胞凋亡的影响。结果:最适酶种为胰蛋白酶,最佳酶解条件为料液比1∶3(g/mL),pH 9,加酶量900 U/g,温度45℃,时间5 h。经一系列纯化后制成多肽,命名为长鳍金枪鱼多肽。其氨基酸序列为Gly-Ala-Pro-Gly-Glu-Arg-Gly-Ser-Lys-Cys-Phe-Lys。经长鳍金枪鱼多肽作用于H2O2诱导的张氏肝细胞后,ALT、AST、ADH和MDA含量下降,SOD含量上升。通过流式细胞仪检测发现晚期凋亡细胞相比于模型组减少明显。结论:利用酶解方法提取的长鳍金枪鱼多肽对H2O2损伤的张氏肝细胞具有一定的保护作用。     

细点圆趾蟹含肉下脚料酶解物中抗氧化肽的分离与鉴定

目的：从细点圆趾蟹含肉下脚料的胰蛋白酶酶解产物中分离鉴定具有高ABTS+·清除率的抗氧化肽。方法：通过超滤系统、Sephadex G-15和半制备型RP-HPLC，从细点圆趾蟹含肉下脚料酶解产物中分离制备抗氧化肽，用超高效液相色谱-电喷雾飞行时间串联质谱（UPLC-ESI-TOF-MS/MS）对肽的结构进行表征，再通过合成肽对其结构与ABTS+·清除率进行验证。结果：获得2个ABTS+·清除能力较强的抗氧化肽，其氨基酸序列分别为Tyr-Glu-Gly（YEG）和Tyr-Glu（YE）。合成肽YEG和YE的分子质量分别为367.35 u和310.30 u，纯度分别为98.52%和98.04%，清除ABTS+·的IC50值分别为0.456 mg/mL和0.184 mg/mL，且YE的IC50值比L-还原型谷胱甘肽高30.30%。结论：细点圆趾蟹含肉下脚料的胰蛋白酶酶解产物含有抗氧化活性的肽类成分，为其抗氧化肽的开发提供理论依据。     

秘鲁鱿鱼骨粉添加对酱油制曲的影响

通过在传统酱油曲料中添加鱿鱼骨粉,研究了鱿鱼骨粉对酱油曲料发酵过程中酵母和孢子数量、酶系及固形物含量变化的影响,并采用气相色谱质谱联用仪(gas chromatograph-mass spectrometer-computer,GC-MS)对酱油成曲进行挥发性香气成分分析。结果表明,添加适量鱿鱼骨粉对微生物生长及酶系分泌有一定促进效应,实验组中酵母数量、孢子数量、蛋白酶及淀粉酶活力及固形物含量等均高于对照组,其中鱿鱼骨粉添加量为1.3%的实验组在36 h时曲料外观、色泽、香气较好;GC-MS结果显示,添加量为1.3%实验组,成曲中挥发性成分达到36.31%,显著高于对照组的32.73%,但鱿鱼骨粉添加量与挥发性成分含量间并无正相关效应。     

大蒜粉处理对海鲈鱼嘌呤含量的影响

采用高效液相色谱法测定不同处理方式（清水浸泡、3 mg/mL大蒜粉溶液浸泡、清水水煮和3 mg/mL大蒜粉溶液水煮）的海鲈鱼的可食用部分腺嘌呤、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤及总嘌呤含量的变化，结果表明：水煮可以有效降低海鲈鱼中的总嘌呤含量，而浸泡处理不能达到脱除嘌呤的效果。加入3 mg/mL大蒜粉后，水煮处理组嘌呤脱除率显著提高，浸泡处理组嘌呤含量相较于空白组有所减少。不同处理方式的总嘌呤脱除率由大到小依次为：大蒜粉水煮试验组＞清水水煮试验组＞大蒜粉浸泡组＞清水浸泡组。结论：水煮12 min时，在保证口感的同时，降低海鲈鱼的嘌呤含量。     

响应面法优化鲣鱼(Katsuwonus pelamis)内脏鱼油酶法提取工艺

为优化蛋白酶酶解鲣鱼内脏条件,提高鲣鱼加工利用率,以鲣鱼内脏为原料,以鱼油提取率为评价指标,采用生物酶解技术提取鲣鱼内脏鱼油,首先对酶进行筛选,其次通过单因素及响应面分析确定pH、酶解时间、酶解温度、液固比、酶添加量等对鲣鱼鱼油提取率的影响,并优化提取工艺。研究结果表明,胰蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶等五种蛋白酶对鲣鱼内脏中鱼油的提取率均有不同程度的提高,其中采用碱性蛋白酶处理的内脏鱼油提取率效果最佳,达到57.46%。此外,鲣鱼内脏中鱼油在pH8.40,酶解时间5.5 h,酶解温度55℃,液固比1∶1,酶添加量2.0%的条件下鱼油提取率最高,达到58.49%±0.45%。该研究为鲣鱼下脚料的进一步开发和综合利用提供了基础数据和理论依据。     

壳寡糖锌配合物的制备及抑菌活性

探索壳寡糖锌配合物的制备工艺及评价其抑菌活性。根据Box-Behnken试验原理,以壳寡糖(chitosan oligosaccharide,COS)与Zn~(2+)配比、体系pH值、反应温度及时间为影响因素,以对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制活性作为响应值,进行壳寡糖锌(COS-Zn~(2+))制备工艺响应面优化分析。结果发现,COS-Zn~(2+)制备条件对其抑菌活性影响从大到小依次为:COS与Zn~(2+)配比反应温度反应时间体系pH值,进而获得最佳制备工艺参数:pH5,反应时间2 h,糖盐比例1:1(质量比),反应温度45℃。在此参数条件下,制备COS-Zn~(2+)对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈直径为33.08 mm和32.23 mm,与建立模型的预测值基本相符。研究结果可为海洋壳寡糖资源生物活性开发及应用,提供一定的参考与理论基础。     

卡拉胶寡糖对秘鲁鱿鱼肌原纤维蛋白功能特性的影响

为探讨卡拉胶寡糖对冻藏鱿鱼肌肉品质特性的影响,以0、0.2%、0.4%和0.6%(w/v)卡拉胶寡糖与鱿鱼肌原纤维蛋白溶液进行混合,在120d冻藏过程中,分析测定肌原纤维蛋白浊度、乳化能力、Ca~(2+)-ATPase活性、羰基含量、总巯基含量及表面疏水性等变化情况。结果表明,经冻藏120d后,空白组鱿鱼肌原纤维蛋白浊度、羰基含量和表面疏水性显著增加至0.623m~2/g、6.47nmol/mg和38.12μg,而其乳化活性指数(EAI)、乳化稳定性(ESI)、Ca~(2+)-ATPase活性和总巯基含量则显著下降至8.31m~2/g、9.39%、0.131U/mg和16.46μmol/mg(P<0.05)。相比于空白组,0.6%卡拉胶寡糖处理鱿鱼肌原纤维蛋白的浊度、羰基含量和表面疏水性增加至0.562m~2/g、5.05nmol/mg和32.05μg,而其EAI、ESI、Ca~(2+)-ATPase活性和总巯基含量则维持在9.18m~2/g、10.18%、0.163U/mg和21.03μmol/mg,对鱿鱼肌原纤维蛋白功能特性的保护作用显著优于空白组(P<0.05)。由上,较高浓度的卡拉胶寡糖对冻藏鱿鱼肌原纤维蛋白冷冻氧化变性的抑制作用较好,其可为冻藏鱿鱼的品质保障技术提供一定的理论依据。