对硫磷酶联免疫吸附分析方法的建立和评价

通过制备对硫磷的多克隆抗体,建立了对硫磷的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(icELISA)。通过活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,获得免疫抗原和包被抗原。使用对硫磷抗血清,经优化条件参数建立了对硫磷的icELISA分析方法。该方法检测线性范围为3.39～533.05ng/mL,最低检测限为0.90ng/mL,对蔬菜样品和水样品的平均添加回收率为75.6%～127.4%,能用于实际样品中对硫磷的检测。     

食源性致病菌快速检测方法研究进展

食源性致病菌是影响食品安全的重要因素,随着生物技术发展及人们对食品安全要求的提高,食源性致病菌的检测方法也不断更新和升级。微流控技术将样品预处理、分离、检测等过程集成在微小的芯片上完成多种功能,而液滴微流控作为其中一个重要的分支,可利用两液体互不相溶特性形成的分散微液滴进行高通量的测试。本文针对核酸扩增方式的不同,比较总结了液滴微流控-数字化聚合酶链式反应、液滴微流控-数字化环介导等温扩增、液滴微流控-数字化重组酶聚合酶扩增检测方法的特点,介绍了其在食源性致病菌检测中的应用,并对该技术的未来发展前景进行了展望。液滴微流控技术结合数字化核酸扩增,可实现对食源性致病菌的智能化、连续化、精准化和微型化的快速检测,本文为其在食源性致病菌快速检测领域的发展提供了参考资料。     

食用油中黄曲霉毒素B1的污染调查

为了初步了解市售的食用油中黄曲霉毒素B1的污染状况,为食品安全监管提供科学依据。采用统计学方法随机抽取市场上食用油1103份,采用高效液相色谱法进行测定。检出不合格样品24份,不合格率为2.2%,含量范围为17.5~282.7μg/kg;其中花生油共248份,不合格数21份;玉米油共170份,不合格数为2份;调和油共123份,不合格数为1份;其余的样品均为合格样品,所有检出不合格样品中黄曲霉毒素B1的含量均≥10μg/kg。其中散装油不合格率(5.2%)是定型包装油不合格率(1.2%)的4.3倍。调查结果显示,市售的食用油存在一定程度的黄曲霉毒素B1污染,应做好一定的防范工作,有利于国家的监管。     

小肠结肠炎耶尔森氏菌生物膜和浮游态的蛋白质组学对比分析

小肠结肠炎耶尔森氏菌是革兰氏阴性食源性致病菌,能够在食物以及食品加工设备表面形成生物膜。生物膜可以增强菌株的生存能力并危害食品安全。该文以分离自速冻食品且具有强生物膜形成能力的小肠结肠炎耶尔森氏菌C1967-1作为出发菌株。通过蛋白质组分析生物膜与浮游态细菌中的蛋白表达差异。GO富集分析表明富集程度最大的前9个GO条目中,7个条目在生物膜中呈现下调趋势。仅GO:0046873（金属离子跨膜转运蛋白活性）条目在生物膜中未呈现明显上下调趋势。KEGG富集结果表明富集程度最大的前20个KEGG通路主要涉及碳水化合物、氨基酸和脂质的代谢过程。亚细胞定位分析结果表明,45.65%的差异蛋白位于细胞质内。为进一步验证蛋白质组数据,从GO:0046873条目中筛选出生物膜上调蛋白MgtA并敲除基因mgtA。结果表明,mgtA的敲除没有抑制菌株的生长,但ΔmgtA的生物膜量下降约80%且生物膜结构松散。综上所述,研究结果为小肠结肠炎耶尔森氏菌生物膜形成机制以及其在食品行业生物膜防控提供重要理论依据。     

基于吖啶酯-磁微球的自动化学发光免疫法检测赭曲霉毒素A

该研究建立了一种基于吖啶酯-磁微球的自动化学发光免疫法（Chemiluminescence Immunoassay,CLIA）检测牛奶中的赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）。采用磁微球偶联二抗,吖啶酯标记OTA-BSA偶联物,优化了磁微球浓度、OTA抗体浓度、吖啶酯标记物浓度、抗体和标记物稀释液、反应时间、样品预处理条件等各种CLIA方法的试验条件。结果表明,CLIA方法对OTA的检出限为6.38 ng/kg,半抑制浓度（IC50）为31.40 ng/kg,线性范围为11.23~99.20 ng/kg,批内和批间的变异系数<8%;测定牛奶样品中的OTA时,检出限为25.52 ng/kg,IC50为125.60 ng/kg,线性范围为44.92~396.80 ng/kg,添加回收率为95.08%~105.83%;对赭曲霉毒素B、赭曲霉毒素C的交叉反应率为6.52%和24.57%,对其他真菌毒素均无明显的交叉反应;对牛奶样品的检测结果与高效液相色谱-串联质谱法一致;且CLIA方法的试剂能在2~8 ℃稳定保存9个月以上。该研究建立的CLIA方法,具有灵敏、准确、快速和操作便捷等特点,检测时长仅30 min,尤其适用于大规模牛奶样品中OTA残留的快速筛查。     

Monitoring of organophosphorus pesticides in vegetables using monoclonal antibody-based direct competitive ELISA followed by HPLC-MS/MS

A multi-analytes method for monitoring of organophosphorus pesticides (OPs) using a combination of broad-specificity direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay (dcELISA) and high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) was developed. The reaction formats of dcELISA as well as the matrix effects of vegetable samples by different treatments were studied. The dcELSIA based on horseradish peroxidase-labelled monoclonal antibody and solid-phase extraction can analyse 42 samples in duplicate simultaneously for 12 OPs with a limit of detection at 20 μg L⁻¹ within 40 min, with good accuracy and reproducibility. For screening purpose, the dcELISA can distinguish positive samples from hundreds of negative samples at a rapid, high-throughput and low cost manner. The positive samples can be following confirmed by HPLC-MS/MS for the kinds and the relative amounts of OPs. The method is suitable for monitoring of OP contamination in vegetables samples with high-efficiency and low cost.     

玉米赤霉烯酮样品前处理与快速检测技术 研究进展

玉米赤霉烯酮是一种毒性极强的小分子,具有弱雌激素活性,其性质相对稳定,缺乏特效解毒剂。其检测方法主要有生物检测法、理化检测法和免疫学检测法,其中免疫检测法因快速、简便、灵敏而得到较为广泛的应用。本文综述了玉米赤霉烯酮的样品前处理技术、免疫学快速检测技术及相关专利的研究进展情况,并对玉米赤霉烯酮的样品前处理技术及其检测产品的开发进行了展望。     

粪肠球菌Z096对副溶血弧菌生物被膜及群体感应的抑制作用

为了研究粪肠球菌Z096对副溶血弧菌生物被膜和群体感应（quorum sensing,QS）系统的抑制作用,采用竞争、清除、排阻三种方式模拟Z096与副溶血弧菌在微菌落环境中的相互作用,并进一步探究了Z096的提取物（Z096-E）对副溶血弧菌生物被膜形成、成熟生物被膜清除、细胞表面疏水性、自聚性、QS信号分子AI-2活性、群集泳动能力以及胞外多糖和蛋白合成的影响。结果表明:Z096可通过竞争、清除、排阻的方式与副溶血弧菌相互作用,降低浮游和生物被膜状态的副溶血弧菌细胞数量,干扰副溶血弧菌在载体表面的粘附,且Z096-E能够显著抑制副溶血弧菌生物被膜形成,有效清除成熟生物被膜,1.6 mg/mL的Z096-E处理12 h,副溶血弧菌生物被膜抑制率为70.43%,代谢活性减少率为84.15%;12.8 mg/mL的Z096-E处理副溶血弧菌成熟生物被膜4 h,生物被膜清除率为58.21%,代谢活性减少率为69.84%。而且1.6 mg/mL的Z096-E对副溶血弧菌群集和泳动能力、细胞表面疏水性和自聚性、胞外多糖和蛋白合成的抑制率分别为47.26%、53.56%、63.37%、89.38%、77.65%和51.91%,抑制效果具有浓度依赖性。此外,Z096-E可使副溶血弧菌QS信号分子AI-2活性减弱,表明Z096-E是一种AI-2类群体感应抑制剂,其可通过干扰QS系统,从而影响副溶血弧菌的生理特性。因此,本研究发现了一株能够抑制副溶血弧菌生物被膜的乳酸菌,其提取物Z096-E能作为一种防控副溶血弧菌生物被膜的新型乳酸菌生物制剂,这对消除致病菌生物被膜污染以及开发新型抗菌剂具有积极的作用。