兔小肠吸收纳豆激酶的免疫组织化学定位研究

目的研究口服纳豆激酶粗制液后,纳豆激酶(Nattokinase,NK溶栓酶)在小肠中的吸收定位情况.方法分离纯化得到电泳纯纳豆激酶,并经免疫得到兔抗纳豆激酶抗血清;实验日本大耳白兔随机分为正常对照组、口服大豆提取液对照组、口服纳豆激酶粗制液实验组,10周后剖杀动物并取十二指肠、空肠、回肠组织固定,分别作HE染色,并用链霉菌抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物法(Streptavidin-biotin-peroxi-dase complex method,SABC)进行免疫组织化学染色,各组均以PBS代替兔抗纳豆激酶抗血清作为替代对照,以正常兔血清代替兔抗纳豆激酶抗血清作为空白对照.结果HE染色结果表明,口服纳豆激酶不影响兔肠道的吸收功能;免疫组织化学检测结果表明,正常对照组与口服大豆提取液对照组各肠段未检出纳豆激酶免疫反应阳性部位,口服纳豆激酶粗制液实验组空肠纹状缘深棕色阳性吸收颗粒最多,且在上皮细胞胞浆中也有深棕色的阳性吸收颗粒,十二指肠与回肠纹状缘也有棕色、弥漫性的阳性吸收颗粒;各组的替代对照与空白对照均为免疫反应阴性.结论纳豆激酶可经口服被小肠吸收,空肠吸收效果最佳,回肠与十二指肠也都有吸收.     

用酶联免疫法测定水产品中氯霉素的残留量

运用酶联免疫法测定水产品中的氯霉素残留，氯霉素浓度在0.05-4.05μg/kg范围内呈线性，线性方程为Y=0.31211-0.34014X,r=0.994，向样品中分别添加0.45,1.35,4.05μg/kg 3个浓度水平的氯霉素，平均回收率分别为84.5%,88.4%和79.9%,最低检测限为90ng/kg，批内变异系数为6.0%-8.5%，批间变异系数为5.8%-14.3%。结果表明该方法灵敏度高，重复性好，适合水产品中氯霉素残留筛选检测。     

锐孔凝固浴法制备表面活性肽微胶囊

采用锐孔凝固浴法制备表面活性肽微胶囊,并以海藻酸钠为壁材,氯化钙溶液作为固化液。在单因素的基础上,以包埋率作为评价指标,通过响应面实验对微胶囊制备过程中的氯化钙浓度、芯壁比、海藻酸钠浓度、操作温度四个因素进行优化。结果表明:氯化钙浓度为2%,操作温度为49℃,海藻酸钠与表面活性肽比例为1∶2,海藻酸钠浓度为2.4%时,包埋率达到了87.6%,载药量为12.5%。通过肠液缓释实验发现,微胶囊在9h内的释放率达到了91.7%,具有很好的缓释效果。      

茶树花多糖超声波辅助热水浸提工艺优化

利用响应曲面法优化超声波辅助热水浸提技术提取茶树花多糖工艺。在单因素实验的基础上,通过Central Composition Design建立多糖提取率与超声时间、超声功率和液料比之间的数学模型,确定最优提取工艺参数。结果表明,最优工艺条件为:超声时间12min,超声功率540W,液料比30∶1m L/g,在此条件下茶树花多糖提取率为7.69%。该方法实用、可靠,可用于茶树花多糖的提取。      

超声波辅助-盐析-水蒸气蒸馏法提取葛缕子精油的研究

对超声波辅助-盐析-水蒸气蒸馏法提取葛缕子精油的工艺进行研究。以葛缕子精油得率为考察指标,考察料液比、氯化钠浓度、浸泡时间、超声频率、超声功率和超声时间6个因素对超声辅助水蒸气蒸馏法提取葛缕子精油得率的影响以及最佳工艺条件。实验结果表明,超声辅助-盐析-水蒸气蒸馏法提取葛缕子精油的最佳工艺条件为:料液比1:15,氯化钠浓度为15%,浸泡时间60min,超声频率25kHz,超声功率250W,超声时间30min,在此条件下,葛缕子精油的平均得率可达到5.42%±0.01%,比盐析-水蒸汽蒸馏法得率提高了1.24%。利用气相色谱-质谱联用技术对葛缕子精油的化学成分进行鉴定,共分离鉴定出27种化学成分,其主要成分是柠檬烯（31.08%）和右旋香芹酮（66.42%）,与盐析-水蒸汽蒸馏法提取精油在组成成分（15种化合物）和主要成分含量上（柠檬烯21.84%和右旋香芹酮76.29%）都存在比较大的差异。结果表明超声辅助-盐析-水蒸汽蒸馏法提取葛缕子精油不仅可以缩短提取时间,提高精油产率,还可以改善精油的质量。      

大孔吸附树脂法分离脂肪氧合酶的研究

脂肪氧合酶作为一种绿色食品催化剂广泛存在于植物和微生物中。采取大孔吸附树脂法从基因工程菌PET-32a-ana-LOX发酵产物中分离脂肪氧合酶,结果表明,HPD600树脂对脂肪氧合酶的选择性吸附能力较强,当上样量为4.3BV,上样浓度为4.026mg/mL,吸附流速为1.0BV/h时,其吸附率达到96.8%;洗脱剂采用混合剂（乙醇∶乙酸乙酯=1∶1）,洗脱剂用量为33.3BV,洗脱流速为4.0BV/h时,其洗脱率为94.8%,得率为95.0%,纯化倍数为6.2。本研究结果为脂肪氧合酶的工业化生产提供了一定参考。      

基于NRPS基因筛选鉴定产生环脂肽葡萄附生细菌的研究

本研究采用平板稀释法和斜面分离纯化技术,从夏黑葡萄中筛选分离到5株附生细菌,提取菌株的基因组DNA,PCR扩增16S r DNA序列,产物纯化后进行克隆测序,利用MEGA 6.0软件对序列进行同源性比对分析,构建系统进化树后,将5株附生细菌分别鉴定为克雷伯肺炎杆菌（Klebsiella pneumoniae）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、克考氏菌（Kocuria marina）、嗜气芽孢杆菌（Bacillus aerophilus）、类芽孢杆菌（Paenibacillus agaridevorans）。在此基础上,以非核糖体多肽合成酶基因（non-ribosomal peptide compounds synthetase,NRPS）为靶点,筛选到含有目的条带的菌株PTWA2,经系统发育树预测该菌株能够产生环脂肽类化合物。该菌株发酵产物经有机溶剂萃取、常压硅胶柱层析、Sephedex LH-20等分离手段纯化得到一个单体化合物,采用核磁共振和质谱方法鉴定该化合物为环脂肽Surfactin A。该研究结果为以功能基因定向筛选产生环脂肽化合物的菌株提供了新的研究方法与理论依据。      

高光谱图像法对稻谷贮藏中五种常见真菌生长拟合及区分

利用高光谱成像系统（HIS）获取稻谷贮藏中常见真菌（黑曲霉、米曲霉、杂色曲霉、构巢曲霉、桔青霉）在马铃薯葡萄糖琼脂板上培养期间的高光谱图像,波峰709 nm处的光谱值和全波段光谱值的第一主成分得分两种方法构建真菌Gompertz函数的生长模拟模型。Gompertz函数拟合结果显示,五种真菌基于全波段光谱值PCA分析后的第一主成分得分建立的生长拟合模型R2为0.1781⁰.9501,基于波峰709 nm光谱值建立的拟合模型R2为0.9095⁰.9679,效果明显优于第一主成分得分的建模效果。另外,主成分分析（PCA）结合偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）可以区分五种不同菌种。其中,训练集和测试集中,PLS-DA模型对培养48 h的黑曲霉、米曲霉、构巢曲霉、桔青霉四种真菌及对照组的区分准确率为100%;而对杂色曲霉,训练集区分准确率为100%,测试集的区分率为33.33%。结果表明高光谱图像技术能够用来对真菌种类进行区分。      

Alcalase对高沟捆蹄肌肉蛋白质水解变化规律研究

以猪后蹄肉为原料,在腌制过程添加Alcalase作为酶解剂,并通过响应曲面实验法优化酶解工艺;通过SDSPAGE电泳分析及游离氨基酸组分分析Alcalase对捆蹄蛋白质的酶解作用规律。结果表明,Alcalase在腌制温度为4~16℃时,对促进高沟捆蹄蛋白质水解及提高其感官品质有显著的促进的作用(p<0.05),过量的Alcalase(大于1.6 U/g)会导致蛋白质过度水解,不利于产品的感官品质。响应曲面法优化捆蹄加工工艺结果为:Alcalase添加量1.32 U/g、腌制温度14.2℃、腌制时间21.3 d,产品蛋白质水解指数为14.81%,感官评分92.47。另外,添加Alcalase蛋白酶后,捆蹄中高分子蛋白(≥120 ku)有明显的分解作用,并且在30~40 ku及50~70 ku处,蛋白质条带逐渐累积;Ala、Leu、Val、Tyr、Phe、Ile、Gly、His有显著的增加,而Pro、Glu含量显著降低(p<0.05)。因此,Alcalase能显著促进捆蹄中蛋白质的分解,提高产品的感官品质,可以应用于捆蹄产业的生产加工。      

响应曲面优化红曲米发酵香肠强化高温风干成熟工艺研究

为探讨发酵香肠中红曲米替代亚硝酸盐的最适添加量及有效缩短发酵香肠成熟时间的加工工艺,采用Design-expert中的响应曲面法对强化高温风干成熟红曲米发酵香肠过程中的三个主要因素即强化高温温度、红曲米添加量与成熟时间进行优化。分析结果表明强化高温风干成熟工艺能有效地缩短香肠成熟时间,并且最佳工艺条件为成熟温度27℃、红曲米添加量1.6g/kg,高温成熟20d。在此条件下加工出的香肠游离氨基酸总量和感官评分较高,实验结果与模型拟合的预测值拟合良好,说明优化出的回归方程对于生产实际有一定的理论指导意义。