基因工程HBsAg纯化中盐析及超速离心技术的改进

自1992年我所引进了可分泌表达重组HBsAg的CHO－C28I程细胞系，采用长吞生物制品所建立的硫酸铁盐析一两步超离心一分子筛层析的纯化流程用于基因工程乙肝疫苗的生产。纯化过程中外对一些问题，我们借鉴血源苗纯化经验，在盐析和超离心技术的应用方面做了一些改进、提高了HBSAg纯化收率。在硫酸被盐析方面．收获的细胞培养液经1500r／min连续离心动除细胞残片后．上请中加入硫酸镀粉末时由手工搅拌改为电动机搅拌，并改进了搅拌机叶片，可根据液量调整其角度使搅伴力量适中，能充分搅匀且不起大量泡沫。同时，注意少量慢速加人硫酸按粉…     

百白破混合制剂接种反应及血清学效果

我们对新配方吸附及不吸附的百白破混合制剂进行了人群使用反应及效果观察。结果表明,免疫效果前者优于后者,免疫反应前者较明显低于后者,这为修订规程,统一配方及提高制品质量提供了依据。观察中吸附制品的无菌化脓率为0.29%。     

梅毒螺旋体血凝试剂盒的研制

以超声波处理的梅毒螺旋体为抗原,致敏经醛化、鞣化处理的绵羊红血球,应用血凝试验检测梅毒患者血清中梅毒螺旋体特异性抗体。同时以国际上公认的标准方法——FTA-ABS作为对照试验。共检测1125份血清(其中梅毒血清205份,非梅毒血清920份).两种方法检测结果完全相符,即敏感性皆为100％,血凝试验的特异性为99％。     

伤寒-鼠伤寒基因重组菌株Vi4072与伤寒Ty2株和枸橼酸杆菌的Vi抗原比较

将来源于枸橼酸杆菌编码产生Vi抗原的ViaB基因片段,通过基因重组技术引入减毒的鼠伤寒杆菌而组建的Vi4072重组株与伤寒沙门氏菌Ty2株和枸橼酸杆菌的Vi抗原,通过琼脂双向扩散试验、被动血凝试验、对BALB/c小鼠的免疫力试验以及对Vi抗原分子的化学元素含量、红外光谱、超导核磁C谱、H谱分析测试。结果表明上述三种菌株产生的Vi抗原其血清学特性、免疫保护作用及化学分子结构等基本相同。且Vi4072重组株表达Vi抗原量高于伤寒Ty2株。     

芋头多糖的理化性质及体内免疫调节活性研究

经水浸提、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白、DEAE-纤维素离子交换色谱分离及Sephadex G-100凝胶色谱纯化,从芋头块茎中获得了一种分子量为65 300的非淀粉中性多糖(TPS),其比旋光度为 154.1(c 0.80,H_2O),特性粘度为14.57×10~(-3)ml/g对TPS体内免疫活性的研究发现,在细胞免疫中TPS对巨吞噬细胞的吞噬作用无影响,在适当剂量下可显著提高体内T淋巴细胞和NK细胞的活性;在体液免疫因子中,TPS对血清溶血素无明显的影响,但等于或高于150mg/(kg·d)的剂量可提高血清IgG的含量     

口服轮状病毒活疫苗LLR-85株的选育及鉴定

一株羊轮状病毒经初生小牛肾原代细胞传代，定名为LLR－85株。按Jennerian种痘法的原理，取第37代和第19代毒种，作为人用口服轮状病毒活疫苗的候选疫苗株。疫苗株电镜检查形态典型，抗原鉴定为A群、亚群Ⅰ、血清型G10和P12。电泳型为长型，11条带。病毒滴度可达105.0～7.0TCIDEA50。经无菌试验、支原体检查、外源因子检查及动物安全试验等项目检定，均符合我国规程要求。疫苗株遗传性状稳定，有望用于婴幼儿轮状病毒急性腹泻的预防。     

重组人γ-型干扰素单克隆抗体的鉴定

5株小鼠杂交瘤细胞ID5、1C10、1C11、3H9和6F8，所分泌抗重组人γ－型干扰素（rIFN－γ）单克隆抗体经双扩散试验证明其中4种为小鼠IgG1型，另一种为IgG2b型。用ELISA间接法测定小鼠腹水抗体效价为1：8000～1：128000。经免疫印迹试验证实5种单抗均能特异地识别rIFN－γ，其中1D5、3H9和1C11单抗对rIFN－γ具有中和活性，中和效价＞1：8000，用2种单抗建立的ELISA夹心法检测rIFN－γ，最低可测值为10．0ng／ml，且与白细胞介素－2，重组人α和β干扰素无交叉反应。     

大质粒DNA提纯方法的改进

本文报道了一种源于Kado-Liu法经系列改进后产生的大质粒DNA检测与提取方法。改进之处主要是:裂解液组成中的Tris度为500mM,pH值为12.8～13.0;蛋白质的抽提除了酚—氯仿外同时使用了适量的醋酸钠(3M pH4.8)溶液;以异丙醇室温静置30分钟左右,取代冷乙醇较长时间的低温处理,进行DNA浓缩。该方法在肠道菌方面的应用中,显示了其简易、快速和较好的重复性。另外,用930～950μl新鲜10N NaOH液使裂解液pH值为最佳的经验值,既可避免因不同类型pH计产生不同结果的麻烦,亦为该方法能在普通实验室推广应用提供了方便。     

培养基质控用菌株(7316)的鉴定

菌株（7316）经鉴定，其培养特性：能在营养琼脂表面生长，集落灰白色，不透明，粗糙型，边缘不整齐。在营养肉汤中呈絮状生长，肉汤透明。菌体为0．9～1．1×2．2～4.6μm，革兰氏染色阳性。能形成芽胞，芽胞位于菌体中央或偏端，孢子囊不膨大或稍膨大，无副芽胞，无荚膜。其生化反应：能分解葡萄糖和甘露醇，不分解阿拉伯糖和木糖；分解酪蛋白和明胶；降解酪氨酸；不水解淀粉；不分解卵磷脂和七叶灵。该菌株（7316）鉴定为短芽胞杆菌（Bscillusbrevis）。     

轮状病毒DNA疫苗的制备及其抗体应答

将轮状病毒G1型Wa株的Vp7基因克隆到真核表达载体pCDNA3 1(+)中 ,经Sepharose CL4B柱层析 ,获得纯化的质粒 ,通过肌肉注射和皮下注射 ,免疫BALB c及F1小鼠后 ,产生了抗轮状病毒Wa抗体。其中F1小鼠的抗体应答高于BALB c小鼠。肌肉注射优于皮下注射。