盖子环替换及定点突变提高菜豆环氧化物水解酶对邻甲基苯基缩水甘油醚的催化性能

菜豆环氧化物水解酶1和2（PvEH1、PvEH2）能够动力学拆分外消旋邻甲基苯基缩水甘油醚（rac-oMGE），从而保留(R)-oMGE。基于对PvEH1和PvEH2结构的同源模拟和分析，发现二者分子中的盖子环差异较大，故本文选择盖子环作为研究目标。经融合聚合酶链式反应（FPCR），获得了PvEH2的盖子环区域被PvEH1对应区域替换的杂合酶Pv2Pv1。用全细胞酶E. coli/pv2pv1催化rac-oMGE，当(S)-oMGE刚好水解完全时，产物(S)-3-邻甲苯基-1,2-丙二醇（(S)-oTPD）的ee_p由PvEH2的58.3%提高至75.5%。为进一步提高酶的性质，在Pv2Pv1中选取11个氨基酸位点进行丙氨酸(A)突变，获得最优突变子E. coli/pv2pv1^K176A，活性为E. coli/pv2pv1（4.2U/g）的2.1倍，且当S构型的底物刚好完全水解时，(S)-oTPD的ee_p进一步提高为80.3%。分子对接分析发现，盖子环替换和K176位点突变为A，均使(R)-oMGE环氧环中的C_α更易受到酶中D101位点的攻击。利用E. coli/pv2pv1^K176A催化150mmol/L rac-oMGE水解制备(R)-oMGE（ee_s＞99%）和(S)-oTPD（ee_p=80.4%），二者的产率Y_S和Y_P分别为32.7%和60.1%，时空产率STY_S和STY_P为1.6g/(L·h)和3.3g/(L·h)。本实验为改善EH的催化性质提供了一种有效策略。     

结合专科“三基”为先导的CBL教学方法与传统教学的比较研究——以在肾脏内科临床实习教学中的应用为例

目的:开展结合专科"三基"为先导的肾脏内科临床典型案例实习教学,并与传统实习教学相比较。方法:将在江南大学附属医院肾脏内科进行临床实习的江南大学医学院2012级、2013级临床医学本科学生进行分组,分为"三基"案例教学组(A组)与传统实习教学组(B组)。对两组学生实习教学结束后开展问卷调查、出科考试成绩及综合评价的比较与分析。结果:学生对以专科"三基"为先导的CBL教学法认可度高、依从性佳,专科素养与临床能力有显著提高,实习出科考试成绩及综合评价优于传统组(均P<0.001)。结论:以专科"三基"为先导的实习教学法能提高医学生的实习效果与临床能力。     

熔体静电纺聚乳酸纤维膜的制备、表征及细胞毒性评价

调试熔体静电纺聚乳酸(PLA)过程中的电压场和温度场的参数,对不同条件下的纤维膜进行测试,研究电压场与温度场与纤维直径间的关系,并评价熔体静电纺PLA膜的细胞毒性。以聚乳酸(PLA)为原料,采用熔体静电纺丝方法,电压调整在20~26 k V范围,空间温度在10~70℃之间,分别进行熔体纺丝实验,将制得的纤维膜进行细胞毒性评价。熔体静电纺丝PLA纤维的平均直径随电压的升高逐渐增大,当空间温度为50℃时,所得纤维平均直径为最小。细胞活力测试证实熔体静电纺PLA膜无细胞毒性,具有良好的组织工程材料的应用前景。     

工业化提取中药王不留行中黄酮苷和刺桐碱的工艺探究

探究工业化提取王不留行中黄酮苷和刺桐碱的最佳生产工艺。先通过索式抽提法考察生王不留行和炒王不留行含油量,然后采用单因素和正交实验设计考察不同料液比、时间和乙醇浓度对乙醇浸渍提取生王不留行中黄酮苷和刺桐碱的含量影响。最佳提取工艺为料液比1:14,提取时间4 d,乙醇浓度75%,黄酮苷和刺桐碱的提取率分别为5.37 mg/g和1.22 mg/g。该提取工艺简单合理,结果稳定,节省能源,为工业化提供参考。     

脂肪酶热稳定性改造研究进展

热稳定性改造是脂肪酶酶学性质研究的热点之一,随着技术的发展,越来越多的有效手段被用于脂肪酶热稳定性改造。作者综述了影响脂肪酶热稳定性的主要因素、提高其热稳定性的研究方法以及最新研究成果,为脂肪酶的进一步改造提供依据,并对其他酶的酶学性质改造具有借鉴意义。     

表达鼠源β-防御素14的植物乳植杆菌减轻小鼠急性结肠炎

抗菌肽β-防御素除抗菌活性以外,还具有免疫调节功能,在维持肠道稳态中发挥重要作用。本研究旨在探讨鼠源β-防御素14（mouse β-defensin 14,mBD14）在炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）中的作用。本实验采用植物乳植杆菌为载体,利用基因工程技术实现mBD14在小鼠肠道中的靶向递送,同时评估其对葡聚糖硫酸钠盐（dextran sulfate sodium,DSS）诱发的小鼠结肠炎的调控作用。结果显示,表达mBD14的植物乳植杆菌能够缓解小鼠急性结肠炎症状。基于表观指标的明显变化,进一步探究表达mBD14的植物乳植杆菌在结肠炎中的作用机制,发现该菌株可调节肠道菌群,进而缓解上皮损伤,维持肠道屏障,同时抑制结肠内促炎因子的分泌,并阻断NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3炎症小体以及下游炎症通路的激活。综上所述,表达mBD14的植物乳植杆菌可通过维持肠道稳态来减轻DSS诱导的小鼠急性结肠炎,本研究可为通过益生菌和抗菌肽防治IBD提供新思路。     

黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶的酶学特性

纯化的黑曲霉Aspergillus niger WM20-11所产的酸性β-甘露聚糖酶经Sephadex G-100凝胶过滤层析和SDS-PAGE分别测得相对分子质量为39 000和40 000;IEF-PAGE测得酶的等电点为4.0;最适作用pH值和温度分别为3.5和70℃;糖质量分数19.6%;Mg2 、Ca2 、Li 、Na 、K 对酶有激活作用,Pb2 、Co2 、Fe3 、Mn2 、Hg2 对酶有抑制作用;酶对角豆胶的Km和Vmax分别为66.7 g/L和333μmol/(min.mg);酶蛋白的氨基酸组成中Asp和Glu含量最高;HPLC分析角豆胶酶水解液的主要产物是低聚糖。     

阿魏酸酯酶与纤维素酶协同水解麦麸释放阿魏酸的研究

研究了重组阿魏酸酯酶和纤维素酶协同作用水解去淀粉麸皮对阿魏酸释放量的影响。以高效液相色谱法检测阿魏酸的提取量,结果显示,底物的超声预处理最佳条件为350 W,20 min,是未经超声处理的底物阿魏酸释放率的1.45倍,单独使用阿魏酸酯酶(re Ao Fae A)30 U时阿魏酸的释放率仅为4.1%,单独使用纤维素酶(r Au Cel12A)并不释放阿魏酸,当两种酶协同作用时,阿魏酸的释放率明显提高,经单因素试验确定双酶协同作用的最佳条件为:re Ao Fae A的最适添加量为30 U,r Au Cel12A的最适添加量为70 U,水解时间为10 h,水解温度为40℃,水解p H为5.0,料液质量体积比为1 g:30 m L,此时阿魏酸的释放率为23.6%。该结果表明,去淀粉麸皮中纤维素的降解,对提高阿魏酸酯酶水解释放阿魏酸效率具有重要作用。     

电离辐射对自然杀伤细胞活性的影响和干扰素调节作用

研究了电离辐射对小鼠脾脏中自然杀伤(NK)细胞杀伤YAC-1细胞活性的影响和干扰素对它的调节作用。结果表明尽管大鼠脾脏NK细胞具有一定的抗辐射作用,但在经16Gy~(60)Coγ照射后24h,NK细胞活性仍呈明显的下降。无论是在照射前向小鼠体内注入干扰素(IFN)还是在照射后将小鼠脾脏中NK细胞用IFN处理,对NK细胞杀伤YAC-1细胞的活性均呈现不同程度的增强。可以认为:IFN对接受高剂量放射治疗的癌症病人和偶然接触高剂量辐照的人们来说是很有益的。