一株产普鲁兰酶菌株的筛选鉴定、酶学性质及海带多糖酶解产物的抗氧化活性

本研究从连云港海泥中筛选产普鲁兰酶菌株,利用形态学、生理生化特征、基因序列(16S rRNA和gyr B)进行分析鉴定。利用产酶菌株发酵制备普鲁兰酶,初步纯化后分析其酶学性质。利用该普鲁兰酶粗提物对海带多糖进行水解,并对其水解产物进行抗氧化活性分析。结果表明:筛选得到一株产普鲁兰酶的巨大芽孢杆菌P6(Bacillus megaterium),经发酵纯化后普鲁兰酶比活力为62.3 U/mg,分子量约为43 k Da。该酶的最适反应温度为45℃,最适p H为6.5,在温度40℃下保温5 h,相对残余酶活达95%以上,而60℃下保温1 h,酶全部失活。在p H6~7.5之间保温12 h后,该酶仍有40%以上的相对残余酶活。DPPH和·OH自由基清除实验表明:海带多糖经普鲁兰酶水解后抗氧化活性显著增强(p0.05),为普鲁兰酶在食品工业中的应用研究提供了新的方向。     

头孢泊肟酯的合成改进

以D-7-ACA为原料,经甲基化、 N-酰化和酯化反应等合成了头孢泊肟酯。对反应温度、 pH值、原料配比和催化剂等因素进行了工艺优化。通过IR、1H NMR、13C NMR和ESI-MS确证了头孢泊肟酯及中间体的结构。该工艺操作简单,原料价廉易得,总收率54.9%,产品纯度98.4%,具有工业化应用前景。     

嗜水气单胞菌RPA-LFS快速检测方法的建立

根据嗜水气单胞菌的气溶素(aerolysin,aerA)基因设计了特异性引物和探针,基于重组酶聚合酶扩增结合侧向流试纸条(RPA-LFS),建立了嗜水气单胞菌的快速检测方法.结果显示:建立的嗜水气单胞菌RPA-LFS检测方法在37℃孵育20 min即可完成;与其他水产养殖与食品安全致病菌无交叉反应;检测限为单次反应10 CFU.结果表明,建立的RPA-LFS检测嗜水气单胞菌的方法具有快速、特异、灵敏等优点,不依赖精密仪器,适用于实验资源有限的嗜水气单胞菌现场检测.     

迟缓爱德华氏菌等温扩增快速检测方法的建立

迟缓爱德华氏菌是一种危害淡水及海水水产动物的致病菌,可感染包括鳗鲡、牙鲆、罗非鱼、鲤鱼等在内的多种水产鱼类,极易给水产养殖业造成严重的经济损失.现有的迟缓爱德华氏菌检测方法须借助实验室条件才能完成,检测过程较为复杂.建立一种简便的、无需依赖实验室条件即可快速检测迟缓爱德华氏菌的方法,对水产养殖业预警和该病菌引发病害的防治具有重要指导意义和实用价值.针对迟缓爱德华氏菌的基因组设计了特异性引物和探针,建立了重组酶聚合酶扩增与侧向流试纸条(RPA-LFS)相结合的检测方法,评价了该方法的特异性和灵敏度,并使用人工模拟样本进行了方法验证.结果显示,RPA-LFS法在37℃孵育20 min即可完成核酸扩增步骤,整体检测时间不超过40 min,与参试的嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌、创伤弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、灿烂弧菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌这8种水产和食品中常见的致病菌不发生交叉反应,对迟缓爱德华氏菌培养物的检测限为单次反应1个菌落形成单位(CFU),在富集培养后,可检出1×101 CFU/g人工污染样本中的迟缓爱德华氏菌.该方法具有良好的特异性和灵敏度,不依赖精密仪器,是一种快速、便捷的迟缓爱德华氏菌检测方法,具有良好的应用前景.     

重组限制性内切酶Pst Ⅰ发酵条件优化

由于限制性内切酶在重组表达时具有切割宿主DNA的细胞毒性,生产难度大,其供应一直被国外企业垄断。实验室前期通过广谱甲基化保护,初步实现了部分限制性内切酶的国产化,但工艺仍停留在低密度摇瓶培养水平,产量无法满足市场需求。研究以限制性内切酶Pst Ⅰ为对象,通过单因素试验筛选了诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度、补充碳源、pH值与诱导时机等多个发酵条件。结果表明,在37℃下,开始发酵后6 h,添加终浓度1.4 mmol/L IPTG进行诱导发酵8 h,以甘油为补充碳源,控制发酵体系pH为8.0时Pst Ⅰ的表达量最高,Pst Ⅰ蛋白产量为0.0129 g/L,为未优化的2.15倍,同时酶产率为1.926×10⁶ U/L,为未优化的3.74倍。     

一种新孢子虫病实时RPA快速检测方法的建立及应用

犬新孢子虫(Neospora caninum)引起的新孢子虫病严重影响着养牛业的发展,目前对于该疾病尚无有效治疗的药物或疫苗.为了提高对新孢子虫病的诊断及预防,根据犬新孢子虫中特异性保守基因NC-5建立了一种新型实时RPA检测方法;同时进行了特异性以及敏感性试验,并应用该方法对国内养牛场收集的32份临床样品进行了检测.结果表明:所建立的实时RPA检测方法结果准确、操作便捷,仅需25 min即可得到检测结果.在特异性试验中仅有犬新孢子虫发生了特异性扩增,其余对照病原体在检测中均未有扩增结果;在敏感性试验中最低检测限为37拷贝/反应;在32份临床样品试验中有16份阳性样品,与已有检测技术相比,准确率达100％.说明该方法具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等优势,为新孢子虫病的快速检测奠定了基础.     

治疗阿尔茨海默症的中药有效成分研究进展

阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)是以进行性认知功能障碍和行为损害为特征的中枢神经系统退行性病变,是最常见的老年痴呆病类型.现有治疗阿尔茨海默症的临床常用药物有多奈哌齐、利斯的明、他克林、加兰他敏等,但患者服药后会产生较强的毒副作用.目前已发现多种中药有效成分(如苷类、黄酮类、生物碱类等)对AD有较好的治疗作用且毒副作用小.结合国内外已有的对AD有治疗作用的中药有效成分的相关报道,综述了不同类型中药有效成分对AD的治疗作用,以期为治疗AD的中药类药物开发提供一定的参考.     

基于识别重叠序列特性的限制性内切酶的重组表达策略研究

甲基转移酶可以保护宿主基因组DNA免受限制性内切酶的消化，根据这一特性，经典的限制性内切酶制备策略是首先通过表达与其配对的甲基转移酶来保护宿主菌株，然后再共表达限制性内切酶，即“一对一”的重组表达模式。作者设计了一个新的策略：通过共表达识别重叠序列的甲基转移酶来保护宿主菌株，以制备限制性内切酶。首先将识别重叠序列的甲基转移酶转入大肠杆菌ER2566，以保护宿主基因组DNA，然后将能识别重叠序列的多个限制性内切酶分别转入该宿主菌株，以进行限制性内切酶的重组表达，即“一对多”的重组表达模式。根据这一方法，利用甲基转移酶M. EsaDix5 I、M. Alu I和M. Hha I实现了识别重叠序列(TTAA、AGCT和GCGC)的一系列限制性内切酶的重组表达，还利用甲基转移酶M. Alu I成功实现了两个新的R. Sac I同裂酶R. EcoSP4ORF25090P和R. Gma5ORF28P的重组表达。该方法简化了对抵抗限制性内切酶消化的宿主菌株的大量筛选工作，并提供了大规模制备限制性内切酶的能力。这一方法也可用于发现其他微生物中新的同工酶或同裂酶。     

利奈唑胺合成新进展

利奈唑胺是第一个人工合成的噁唑烷酮类抗生素,主要用于治疗革兰氏阳性球菌引起的感染.利奈唑胺独特的作用部位和作用方式使其不易与其他抗菌药发生交叉耐药,具有良好的治疗效果,在临床上得到广泛应用.综述了近5年利奈唑胺的合成方法,并对各种方法进行了分析比较.