赤红球菌组氨酸激酶的融合表达和功能分析

对赤红球菌的组氨酸激酶基因进行密码子优化，将优化后的组氨酸激酶基因（rhks）构建重组表达质粒pGEX-4T-2-rhks。将此质粒导入到大肠杆菌BL21（DE3）中进行异源表达。在25 ℃和1 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导条件下，组氨酸激酶融合蛋白（GST-RHK）获得成功表达，并具有催化活性。经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化，获得电泳纯的GST-RHK，其中纯化倍数为3.1，得率为19.5%。该蛋白大小约为72.75 kDa，Km、Vmax和Kcat值分别为20.92 μmol/L、0.17 μmol/（L·min）和1.4 min－1。野生型赤红球菌、组氨酸激酶基因增强株sdrhkE和组氨酸激酶基因敲减株sdrhkD在分别含有苯酚、甲苯、氯苯、异辛烷4 种有机溶剂的培养基中培养，菌株sdrhkD的生长情况都优于野生型赤红球菌，菌株sdrhkE的生长情况都低于野生型赤红球菌。本研究为进一步揭示赤红球菌SD3中组氨酸激酶涉及的信号转导途径与赤红球菌有机溶剂耐受性的关联机制提供一定参考依据。     

七种坚果仁中多酚、三萜含量及其抗氧化活性比较

坚果因富含抗氧化等活性成分已成为备受推崇的休闲食品。该研究将核桃、巴旦木、银杏果、花生、葵花籽、野生和种植香榧仁进行对比,评价7种坚果仁的活性成分含量及其抗氧化能力差异。结果表明,不同坚果的主要活性成分和抗氧化能力存在显著差异(P 0. 05)。葵花籽仁和核桃仁中分别具有最高的总黄酮(35. 16 mg Qu E/g DM)和总酚含量(9. 69 mg GAE/g DM)(槲皮素,quercetin equivalent,Qu E;干原料,dry material,DM;没食子酸,gallic acid equivalent,GAE),(齐墩果酸,oleanolic acid equivalent,OAE),其次为种植香榧仁;种植香榧仁具有最高的总三萜含量(4. 37 mg OAE/g DM),其次为核桃仁。抗氧化实验表明,种植香榧仁提取物具有最高的DPPH·和ABTS+·清除能力,其IC50值分别为0. 08 mg E./m L和0. 07 mg E./m L(提取物,extract. E.),但核桃仁提取物的Fe3+还原能力最高,其槲皮素当量还原能力为115. 25 mg Qu E/g E.,种植香榧仁的还原能力次之。以上结果表明,种植香榧仁具有较高的活性成分含量和抗氧化活性,是优于巴旦木、银杏果、花生和葵花籽仁的天然抗氧化剂资源。     

高压脉冲电场对β-乳球蛋白结构和抗原性的影响

采用电泳、圆二色谱、荧光光谱及酶联免疫吸附法,研究不同高压脉冲电场(pulsed electric fields,PEF)处理条件对β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-Lg)结构和抗原性的影响。结果表明:PEF处理对β-Lg分子质量无明显影响,但对其二级结构、三级结构和抗原性有显著影响,且其抗原性变化与结构变化密切相关。β-Lg的β-折叠含量、内源性荧光强度、表面疏水性和抗原性均随处理时间的延长呈先增加后降低的趋势,且均在25k V/cm处理30μs的条件下达到最大值,此时抗原性为1 344μg/m L。同时,当处理时间为210μs时,β-Lg的抗原性降低了约58%。这表明,PEF为制备低过敏性β-Lg提供了一种潜在的新方法。     

~(18)O标记联合高效液相色谱-高分辨率质谱技术定量测定阿胶中的明胶

采用胰蛋白酶催化的~(18)O标记联合高效液相色谱-高分辨率串联质谱技术(high performance liquid chromatography-linear ion trap/Orbitrap high-resolution mass spectrometry,HPLC-LTQ/Orbitrap MS/MS)研究阿胶的特征性多肽的~(18)O标记情况和明胶混合物中阿胶、牛皮明胶的定量情况。结果表明,阿胶的特征性多肽均能被2个~(18)O原子标记,当~(18)O和~(16)O标记多肽以20∶1、10∶1、5∶1、1∶1和1∶5的质量比例混合时,检测到的~(18)O与~(16)O标记多肽比值分别为19.66、10.24、5.01、1.00和0.20。当阿胶和牛皮明胶质量比以1∶10、1∶1和10∶1混合,以~(18)O标记物为内标,检测到的阿胶与明胶比值分别为0.10、1.02和9.72。因此,胰蛋白酶催化的~(18)O标记联合HPLC-LTQ/Orbitrap MS/MS适用于阿胶产品中目标明胶的含量检测,可为阿胶产品的质量控制提供技术支撑。     

超声协同糖基化对蛋清粉致敏性及结构的影响

以市售蛋清粉为研究对象,通过电泳、紫外光谱、荧光光谱和酶联免疫吸附等方法研究超声波协同糖基化修饰对其蛋白结构和致敏性的影响。结果表明,超声波协同糖基化修饰能显著降低蛋清粉的致敏性,致敏性随超声强度的增加呈先增加后降低的趋势,且在15 min、600 W的条件下有最大程度降低。这和其结构变化密切相关,经复合处理后,蛋清蛋白分子量显著增加,同时三级结构发生显著变化,使表面疏水性增强、内源荧光和自由氨基含量降低,导致其致敏性降低。超声波协同糖基化修饰是一种良好的降低蛋清粉致敏性的方法。     

三重诱变选育腈水合酶高产菌株

[目的]获取高产的腈水合酶产生菌.[方法]以腈水合酶产生菌诺卡氏菌(Nocardia sp.)为出发菌株,采用加热、紫外线(UV)照射、硫酸二乙酯(DES)处理三重复合诱变,研究不同诱变剂量对致死率和正突变率的影响,选育腈水合酶高产菌株,并研究底物类似物乙腈对该菌株腈水合酶活性的影响.[结果]从中筛选出1株稳定、高活力的腈水合酶生产菌,所产腈水合酶最高活性提高到1238万U.在一定浓度下,随着底物类似物乙腈浓度的增大,菌株正突变率和所产腈水合酶最高酶活增大,但超过一定浓度后正突变率和最高酶活反而下降.[结论]获得了1株稳定的腈水舍酶高产菌株,所产腈水合酶活性高达1238万U.底物类似物乙腈对该菌株的正突变率和所产腈水合酶最高酶活性有一定的影响.     

抗性筛选在抗生素高产菌选育中的应用

抗生素产生菌的产抗能力与其对抗生素的抗性之间具有一定的相关性,这为抗生素高产菌株的定向筛选提供了一种有效方法,即抗性筛选.综述了抗生素高产菌选育中抗性筛选的机理及其应用.     

鱼鳔胶原肽抗氧化稳定性研究

以DPPH自由基、OH自由基清除能力和还原力为评价指标,探究pH、温度、食品配料、金属离子、防腐剂以及体外模拟胃、肠道消化对鱼鳔胶原肽抗氧化稳定性的影响。结果表明:鱼鳔胶原肽在酸性环境中抗氧化活性保持得较好,在碱性条件下丧失较快;鱼鳔胶原肽具有较强的耐热性,高温不会降低其抗氧化活性;蔗糖、葡萄糖以及防腐剂(苯甲酸钠和山梨酸钾)对鱼鳔胶原肽的活性影响不明显,但添加高浓度的食盐会降低鱼鳔胶原肽的抗氧化活性;金属离子Zn~(2+)、Cu~(2+)对鱼鳔胶原肽抗氧化活性的影响较大,Ca~(2+)的影响较小,K~+、Mg~(2+)无显著影响;模拟胃肠道消化对鱼鳔胶原肽抗氧化活性无显著影响。     

中山北部留守儿童近视发病率流行病学调查分析

目的:调查中山北部留守儿童近视流行病学特征,分析危险因素,为留守儿童近视防治提供依据。方法:2013年4月-2015年3月,以中山北部数个行政村内的20所幼儿园、小学内留守儿童为研究对象,对其进行问卷调查、近视筛查。结果:回收有效问卷500份,近视发生率47.2%(236/500),近视自知率70.76%(167/236),配镜率32.20%(76/236);有手机、家长未特意纠正过近视相关不良行为、家长有近视眼、7~12岁、营养不良、不喜欢课外活动、入学<7岁成为独立危险因素(P<0.05)。结论:中山北部留守儿童近视发病率较高,但自知率、矫正率低,发病影响因素较多,与遗传、环境、个人行为等有关;需做好不良行为纠正指导,限制手机使用,鼓励课间户外运动。     

D-氨基酸氧化酶的研究进展

D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种以黄素腺嘌呤(FAD)为辅基的典型的黄素蛋白酶类.DAAO可氧化D-氨基酸生成相应的酮酸和氨.介绍了D-氨基酸氧化酶的研究现状,包括在自然界的分布、生理功能、生物学特性、催化机理、基因克隆和序列分析以及基因表达.