生活废弃油脂高效降解菌的筛选、鉴定及应用

筛选能够降解废弃生活油脂的微生物,实现丹江口库区生活污水中废弃油脂的生物降解,减少生活油脂对库区水体的污染。以大豆油为目标污染物,先进行菌种富集和驯化,然后进行中性红平板筛选及生理生化鉴定。筛选获得了一株高效降解丹江口库区生活废弃油脂土著微生物,且具有较好的环境适应性和应用潜力。经鉴定,该微生物与Proteus mirabilis最为接近,命名为Proteus mirabilis NY-201801。5%(体积分数)油脂初始浓度,接种量10%,p H值7. 0,在35℃、150 r/min下培养36 h,Proteus mirabilis NY-201801对油脂的降解率可以达到92%。同时,在库区最高水温的条件下,对5%油脂的降解率也可以达到50%。为实现库区废弃生活油脂的生物降解奠定了坚实的基础。     

微载体浓度与细胞接种密度对MDCK细胞生长的影响

目的探讨微载体浓度与犬肾脏上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞接种密度之间的关系,及其对MDCK细胞生长代谢的影响。方法实验设计了4组不同的单个微载体周围的细胞数范围,分别为0~10、10~20、20~60和60~120个,每组范围分别通过控制微载体浓度或细胞接种密度得到2组不同条件的实验组,即12 g/L微载体组和5×104个/ml MDCK细胞组、7 g/L微载体组和1×105个/ml MDCK细胞组、3 g/L微载体组和5×105个/ml MDCK细胞组、1 g/L微载体组和1×106个/ml MDCK细胞组,其中1、3、7、12 g/L微载体组细胞接种密度均为2×105个/ml,5×104、1×105、5×105、1×106个/ml MDCK细胞组微载体浓度均为3 g/L。经转瓶培养,每隔24 h取样,进行细胞计数,并检测细胞代谢。按确定的最佳细胞接种密度和微载体浓度培养MDCK细胞72 h后,接种0.01 MOI的甲型流感病毒株A/PR8/34,检测病毒的HA效价。结果当一个微载体周围的细胞数控制在20~60个之间,微载体浓度为3 g/L,细胞接种密度为5×105个/ml时,活细胞密度(viable cell density,VCD)可达3×106个/ml以上,细胞在72~96 h之间,能获得一个较为稳定的平台期,葡萄糖等营养物不会消耗过多以致耗竭,而乳酸、氨等代谢副产物的累积对培养环境造成的压力较小,有利于后期流感病毒的接种,同时还可达到理论最高活细胞值的60%以上。HA效价可达12 log2HA units/50μl。结论控制单个微载体周围细胞数在20~60个之间,细胞生长和代谢显著优于其他条件,且有利于病毒的复制,提高了病毒滴度。为基于MDCK细胞大规模高效生产流感病毒疫苗的工业化生产提供了数据参考。     

海水中噻唑啉酮和异噻唑啉酮的高效液相色谱测定

标题化合物为一类新型的海洋防污剂,但在海水样品中因其较低的溶解度使得其含量十分低。为此,建立了同时分析检测6种标题类化合物的高效液相色谱定量分析方法,以甲醇-水溶液为流动相,Eclipse XDB-C18色谱柱分离,二极管阵列检测器检测,检测波长为225和280 nm,可以实现有机溶剂中(甲醇)样品中添加的1,2-苯并异噻唑-3(2H)-酮(BIT)、3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐水合物(MBT)、5-氯-2-苯并噻唑啉酮(CBT)、6-溴-2-苯并噻唑啉酮(BBT)、2-正辛基-4-异噻唑啉-3-酮(OIT)和4,5-二氯-2-正辛基-4-异噻唑啉-3-酮(DCOIT)6种化合物的含量分析。它们的检测下限分别为1.7×10-6、4.1×10-5、1.8×10-6、1.1×10-6、3.6×10-7、2.5×10-7mol/L,回收率为92%~110%,RSD为2.6%~3.6%。此外,我们还进一步考察了C18小柱固相萃取前处理方法,可以实现海水样品中添加2.5×10-7mol/L DCOIT的分析检测,方法的回收率为92%。     

根癌农杆菌介导透明颤茵血红蛋白基因(vgb)在短密青霉菌中的克隆表达

利用根癌农杆菌LBA4404介导,将编码透明颤菌血红蛋白的结构基因(Vitreoscilla Hemoglobin gene,vgb)导入到短密青霉ATCC16024中,用于改善菌体对氧的摄取能力,提高霉酚酸(Myhophenoilc Acid,MPA)的发酵水平,降低生产成本。通过潮霉素抗性筛选、PCR分子鉴定和MPA发酵验证等结果表明,vgb基因在短密青霉中成功获得了表达;vgb基因的表达提高了短密青霉的菌体密度,转化子MPA产量达到2.18 g·L?1,比原始菌株提高了27.5%。     

嗜铁钩端螺旋菌氧化难处理金矿的研究

采用改良双层板方法从酸性矿坑水(AMD)中筛选、鉴定并命名为氧化效果最佳的分离株—嗜铁钩端螺旋菌(Leptospirillum ferriphilum)LJ-02。当温度在36~46℃范围内,矿石氧化率呈现出先升后降的趋势;降低pH对提高细菌氧化能力有着显著影响;在接种量不超过10%(v/v)的条件下,接种量的提高有利于矿石的生物氧化。该菌株对难处理金矿的吸附属于Langmuir等温吸附,其吸附平衡常数为8.72"10-10 mL/cells,单位质量矿物颗粒的最大吸收能力为1.99"109 cells/g。     

复乳凝胶作为脂肪替代物 对鸡肉肠理化性质的影响

本实验将海带水提多糖以0%、0.25%、0.5%、0.75%、1.00%、1.25%的浓度添加到复乳凝胶中,以改善其持水性和热稳定性。并将1.00%多糖复乳凝胶以0%、15%、30%、45%、60%、75%替代度替代猪背脂,分析其对鸡肉肠持水持油性、乳化稳定性、质构与感官的影响。随着海带多糖浓度的增加,复乳凝胶的持水性和热稳定性增加(P<0.05),当添加量大于1.00%时,硬度、粘聚性、咀嚼性显著降低(P<0.05)。随着复乳凝胶替代猪背脂比例增大,鸡肉肠的持油性、乳化稳定性、硬度和咀嚼性显著提高(P<0.05),L*值、b*值逐渐增大,a*值逐渐降低(P<0.05),当替代度为30%时,脂肪含量为9.29%;替代度为75%时,脂肪含量仅2.68%。感官评定结果显示,当替代度达到60%时,感官评分与对照组相似。由以上结果说明,复乳凝胶可替代鸡肉肠中60%的猪背脂,且保证了产品性质和质量。     

Plackett-Burman与响应面法相结合优化化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基

目的采用Plackett-Burman与响应面法相结合优化化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基。方法在自主研发的含蛋白无血清培养基的基础上,通过Plackett-Burman试验和响应面试验设计考察23组营养物质对MDCK细胞生长的影响,以细胞比生长速率、维持时间及最大活细胞密度作为响应值进行筛选和定量优化。以最优化的因子浓度配制化学成分明确的无血清无蛋白培养基,分别于细胞培养板和搅拌瓶中培养MDCK细胞,考察细胞比生长速率、维持时间和最大活细胞密度3个响应值的大小。结果通过Plackett-Burman试验筛选出4种对MDCK细胞生长具有显著性促进作用的因子:半胱氨酸、苏氨酸、亮氨酸和葡萄糖,苏氨酸和亮氨酸有助于提高细胞比生长速率,半胱氨酸和葡萄糖有利于提高最大活细胞密度;该化学成分明确的无血清无蛋白培养基能很好地支持MDCK细胞悬浮生长,单细胞悬浮培养MDCK细胞时,细胞比生长速率可达0.058/h,最大活细胞密度可达32.65×105个/ml,分别比基础培养基提高了2.15和3.09倍。结论采用Plackett-Burman与响应面法相结合优化了化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基,为采用MDCK细胞大规模工业化生产流感疫苗奠定了基础。     

产碱杆菌DN25的氰降解代谢途径分析与产酶条件优化

本实验室分离保藏的一株产碱杆菌Alcaligenes sp.DN25具有较高降氰活性,通过分析氰降解代谢产物确定了其降解途径,并根据降氰酶催化活性部位特征对产酶条件进行了优化.结果显示,氰的降解代谢途径可推断为由氰水解酶、氰水合酶和酰胺水解酶共同作用的水解途径,而其中氰水解酶的活性占主要作用;在培养基中分别添加4种含硫...     

有机酸对肺炎克雷伯杆菌厌氧代谢甘油的影响

在肺炎克雷伯杆菌厌氧发酵甘油生产1,3-丙二醇的过程中,大量的副产物,特别是乳酸和乙醇等副产物的生成,导致1,3-丙二醇的浓度和得率下降.为了进一步了解有机酸加入后菌体的代谢情况,在菌体生长期同时加入柠檬酸、琥珀酸和延胡索酸三种有机酸的混合液,使其浓度达到3.8 mmol.L-1·5L罐发酵结果显示,产物的生成发生显著...