毛细管区带电泳-间接紫外检测法测定婴儿配方奶粉中的胆碱

目的建立毛细管区带电泳-间接紫外检测法测定婴儿配方奶粉中胆碱含量的新方法。方法用5 mmol/L乙酸提取婴儿配方奶粉样品中的胆碱,涡旋混匀、9000 r/min离心,上清液经0.45μm醋酸纤维素滤膜过滤后进样。用未涂覆熔融石英毛细管75μm×70 cm(有效长度:60 cm)作为分离柱。以10 mmol/L磷酸二氢钠+20 mmol/L磷酸+7 mmol/L 4-甲基咪唑为分离缓冲体系。分离电压为28 k V,进样压力及时间为0.5 psi、10 s,检测波长为214 nm。结果胆碱的校正峰面积与质量浓度在8.7~86.8 mg/L范围内间线性关系良好,相关系数为0.9997、检出限为2.6 mg/L、定量限为8.7 mg/L,方法的日内和日间精密度分别为1.9%和3.9%(n=7)。3个质量浓度添加水平的平均加标回收率分别为98.8%、95.2%及97.6%,相应RSD分别为0.8%、0.9%及0.6%(n=5)。用本法分析了10件婴儿配方奶粉样品,均获满意结果。结论本方法简单、无需有机溶剂,适用于婴儿配方奶粉中胆碱的常规检测。     

气相色谱-串联质谱法同时检测代用茶中的16种农药残留

目的建立气相色谱-串联质谱法同时检测代用茶中16种农药残留的分析方法。方法代用茶样品中的农残经乙腈提取后,用25 mg N-丙基乙二胺(primary secondary amine, PSA)、150 mg MgSO4净化,引入分析保护剂补偿基质效应,用气相色谱-串联质谱法测定其中16种农药残留。结果 16种农药成分在0.005～0.400μg/mL范围内有良好线性关系,相关系数均大于0.98;检出限均在0.003～0.007 mg/kg之间,定量限在0.011～0.022 mg/kg之间;在3个添加水平下(0.04、0.10和0.40 mg/kg)的平均回收率为80.2%～104%,相对标准偏差(n=6)为3.4%～12.4%。结论本方法样品处理简单快速,灵敏度和选择性高,重复性好,适用于代用茶中多种农药残留的同时检测。     

实时荧光定量PCR法评价甘薯蛋白对结直肠癌移植瘤荷瘤鼠肿瘤相关因子的影响

目的 利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)法评价甘薯蛋白(sweet potato protein, SPP)对结直肠癌移植瘤荷瘤鼠肿瘤相关因子的调控作用。方法 12只雄性Babl/c裸鼠腹腔接种人结直肠癌LOVO细胞后经灌胃给予SPP干预21 d, 通过qPCR和免疫组化技术检测肿瘤组织中胰岛素样生长因子1受体(insulin like growth factor 1, IGF1R)、环氧酶2(cyclo-oxygen-ase 2, COX2)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A, VEGFA)、β链蛋白(β-catenin)的表达和分泌情况。结果 所有裸鼠均成瘤, SPP干预后, 肿瘤总重量及个数略减少, HE染色显示, 蛋白干预后肿瘤组织内小血管数量减少, 纤维组织增加。免疫组化检测显示, SPP干预后, IGF1R、COX2、VEGFA、β-catenin表达量均显著减少。qPCR检测显示, 与模型组相比，低剂量SPP干预后, VEGFA mRNA的相对表达量显著降低, 中、高剂量SPP干预后IGF1R、COX2、VEGFA、beta-catenin mRNA的相对表达量均显著降低。结论 SPP具有下调结直肠癌细胞移植瘤荷瘤鼠肿瘤中IGF1R、COX2、VEGFA、β-catenin表达和分泌的作用。     

胶束电动毛细管色谱法分析3种交链孢毒素主成分含量

目的 建立胶束电动毛细管色谱法(micellar electrokinetic chromatographic, MEKC)测定3种交链孢毒素[交链孢酚(alternariol, AOH)、交链孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether, AME)和交链孢菌酮酸(tenuazonic acid, TeA)]主成分含量的新分析方法。方法 以未涂层熔融石英毛细管柱(50μm×30 cm, 20 cm, i.d.)为分离柱,分别以3种分离缓冲溶液[40 mmol/L Na_2B_4O_7-120 mmol/L十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)(含体积分数为5%的乙腈)、30mmol/LNa_2B_4O_7-40mmol/LSDS(含体积分数为30%的异丙醇)和60mmol/L Na_2B_4O_7-180 mmol/L脱氧胆酸钠]及2种样品缓冲溶液[8 mmol/L硼砂(含体积分数为57%的甲醇用于AOH和TeA)、8mmol/L硼砂(含体积分数为57%的异丙醇用于AME)]分析AOH、AME和TeA的主成分含量。结果 AOH、AME、TeA的方法精密度分别为0.05%、0.01%和0.21%(n=5),检出限分别为5、15和0.5 mg/L。主成分含量分别为99.94%、99.78%和97.28%,且与高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)的结果无显著差异(α=0.05)。结论 MEKC法可作为HPLC法测定3种交链孢毒素主成分含量方法的互补方法 ,能够满足3种交链孢菌毒素主成分含量分析的要求。     

黏膜佐剂mLT63及CpG-ODN鼻内免疫的佐剂作用

目的研究大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63和CpG-ODN鼻内免疫对抗原的佐剂效应。方法选用破伤风类毒素(TT)和小牛血清白蛋白(BSA)为抗原,mLT63和CpG-ODN为佐剂,经鼻内免疫BALB/c小鼠。ELISA间接法检测免疫小鼠血清和肺、直肠及阴道组织萃取液的特异性抗TT、BSA的IgA、IgG水平。结果mLT63和CpG-ODN均能协助TT和BSA抗原在血清、肺、阴道、直肠组织中诱导出高滴度的IgG抗体。在血清中IgA抗体滴度均比较低,而TT-IgA在肺和阴道组织中滴度较高,BSA-IgA在肺组织中滴度较高。各佐剂组之间IgG和IgA抗体水平相比,差异均无显著意义。不同剂量的mLT63诱导的BSA-IgA抗体水平差异无显著意义。结论mLT63和CpG-ODN经鼻内免疫对TT和BSA抗原均有良好的佐剂作用。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肝中的17-β-雌二醇

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS)测定猪肝中17-β-雌二醇(17-β-estradiol, E2)残留量的检测方法。方法 猪肝样品经β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解后用25.0 mL甲醇提取, 加入2.0 g氯化锌除脂, 用25.0 mL水溶液稀释后上样液过ENVI-Carb柱, 用5.0 mL甲醇淋洗, 二氯甲烷:甲醇(7:3, V:V)洗脱后经氨基柱进一步净化, 以甲醇-0.50 mmol/L氟化铵作为流动相, 经ACQUITY UPLC BEH C18 (50 mm×2.1 mm, 1.7 μm)色谱柱分离后, 在电喷雾负离子多反应监测扫描(multiple reaction monitoring, MRM)模式下进行检测。结果 E2的线性范围为0.01~100.00 μg/L, 相关系数r2>0.999, 检出限为7 ng/kg, 定量限为20 ng/kg, 添加水平为0.02、0.05和0.10 μg/kg时的平均回收率为101.1%~106.7%, 日内精密度为5.1%~7.3% (n=6), 日间精密度为10.0%。应用建立的方法对5份猪肝样品进行测定, 所有样品均检出E2。结论 该方法具有灵敏度高、操作简单快速的特点, 适用于猪肝中E2残留量的检测。     

染料木黄酮对β淀粉样肽介导的脑血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的研究染料木黄酮(Gen)对β淀粉样肽25-35(Aβ25-35)介导的脑血管内皮细胞损伤的调节作用。方法脑血管内皮细胞(b End.3细胞系)传代48 h后,分为4组(对照组、Aβ组、Gen组、Gen+Aβ组)。Gen预处理2 h后,Aβ25-35染毒建立细胞损伤模型;24 h后收集细胞进行指标检测。采用ELISA法检测脑血管内皮细胞8-OHd G水平;酶法试剂盒检测GSH-Px水平;RT-PCR和Western blot法检测Bcl-2、Bax基因和蛋白表达的改变。结果与对照组比较,Aβ组8-OHd G水平明显升高,GSH-Px活性明显下降,且差异均有统计学意义(P0.05);与Aβ组比较,Gen组和Gen+Aβ组8-OHd G水平明显下降,GSH-Px活性明显升高,且差异均有统计学意义(P0.05);同时,Aβ组Bcl-2基因和蛋白表达水平较对照组明显下调,Bax基因和蛋白表达水平明显上调,且差异均有统计学意义(P0.05);与Aβ组比较,Gen+Aβ组和Gen组Bcl-2基因和蛋白表达水平明显上调,Bax基因和蛋白表达水平明显下调,且差异均有统计学意义(P0.05)。结论 Gen可能通过拮抗Aβ25-35介导的脑血管内皮细胞氧化损伤,进而发挥对脑血管的保护作用。     

以秀丽隐杆线虫作为人类疾病模型的研究进展

随着医学研究的快速发展,秀丽隐杆线虫 (Caenorhabditis elegans,简称C.elegans或秀丽线虫)作为一种模式生物越来越多地应用于人类疾病的研究中。本文综述该领域的研究进展。     

高效毛细管电泳测定乳制品中的酪蛋白糖巨肽

建立了高效毛细管电泳(HPCE)分离测定乳制品中酪蛋白糖巨肽(CMP)的新方法。研究了影响CMP与杂质峰分离的因素,如分离缓冲溶液的种类、浓度、pH值等。结果表明,CMP校正峰面积与质量浓度在60～4 000 mg/L范围内具有良好线性关系,线性相关系数为0.9993,检出限(S/N=3)为20 mg/L,定量限为60 mg/L。该方法简单快速,适用于添加乳清蛋白粉的各种乳制品中酪蛋白糖巨肽的常规检测。     

反油酸对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞线粒体功能和细胞自噬的影响

目的研究反油酸对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞线粒体功能和细胞自噬的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞,加入不同剂量(0、10、20、50和100μmol/L)的反油酸,24 h后收集细胞,采用透射电镜观察细胞自噬小体;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和蛋白免疫印迹(western blot)方法检测细胞自噬相关的基因和蛋白表达水平。结果透射电镜观察细胞结构发现,50和100μmol/L反油酸可使细胞内出现自噬小体,并可以引起细胞活力下降,差异均有统计学意义(P0.01);100μmol/L反油酸作用24和48 h后,细胞活力明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);100μmol/L反油酸可使SH-SY5Y细胞中细胞色素C(cytochrome c,cyt-c)基因mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05);随着反油酸浓度的升高,细胞浆中cyt-c蛋白表达水平逐渐升高,差异均有统计学意义(P0.05)。但是不同剂量的反油酸对SH-SY5Y细胞自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)基因、Beclin1基因、p62基因、自噬相关基因5(atg5)、自噬相关基因12(atg12)mRNA水平表达差异无统计学意义(P0.05);但与对照组比较,50和100μmol/L反油酸可使SH-SY5Y细胞LC3B和Beclin1蛋白表达水平逐渐上调,差异均有统计学意义(P0.05)。结论反油酸可以引起人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞活力下降,可能与其引起细胞自噬小体形成,上调自噬相关蛋白表达水平,促进线粒体cyt-c蛋白释放入细胞浆有关。