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1.
单增李斯特氏菌MALDI-TOF-MS鉴定与分型研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
为建立单增李斯特氏菌的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)快速鉴定与分型方法,实验收集37株单增李斯特氏菌分离株,应用MALDI-TOF-MS采集图谱,获取独特的蛋白质指纹图谱,汇总成标准图谱,建立单增李斯特氏菌鉴定数据库。采用单增李斯特氏菌标准菌株进行验证,表明鉴定结果的可信度很高。在数据库信息的基础上,对37株单增李斯特氏菌分离株进行聚类分型。分型结果表明,在蛋白质水平上,MALDI-TOF-MS可把37株单增李斯特氏菌分成9个型别。  相似文献
2.
为建立食品中各种李斯特菌的快速检测和鉴定方法,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对单增李斯特菌、绵羊李斯特菌、英诺克李斯特菌、威尔斯李斯特菌和格氏李斯特菌5种李斯特菌进行检测,并与传统的生化鉴定方法(VITEK 2)和聚合酶链式反应(PCR)方法检测结果进行比较;用不同培养基和不同培养时间培养的单增李斯特菌对该方法进行检测,还对60份人工感染5种李斯特菌的食品样品分别进行MALDI-TOF-MS、PCR以及传统生化方法的检测和鉴定。结果表明:MALDI-TOF-MS能够快速、可靠地区分上述5种李斯特菌,而且具有很好的稳定性和重复性,在检测时间、重复性和准确性方面的总体表现优于传统生化鉴定方法。MALDI-TOF-MS技术适用于对李斯特菌等食源性病原菌进行高通量、低成本的快速鉴定。  相似文献
3.
采用基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOFMS)对由3种真菌毒素伏马菌素B1(FB1)、赭曲霉毒素A(OTA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)与两种载体蛋白卵清白蛋白(OVA)、血清白蛋白(BSA)分别偶联制备得到的4种小分子-载体蛋白偶联物FB1-OVA、FB1-BSA、OTA-BSA、DON-OVA的偶联结合比进行测定,并与紫外吸收光谱法进行比较。基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱法测得偶联物FB1-OVA、FB1-BSA、OTA-BSA、DON-OVA的结合比分别为5:1、11:1、3:1、0;紫外吸收光谱法测得OTA-BSA的结合比为4.4:1,DON-OVA的结合比为3.4:1,无法测定FB1-OVA、FB1-BSA结合比。  相似文献
4.
以高纯度高粱原花青素(sorghum procyanidins,SPC)混合物和高粱原花青素四聚体(sorghum procyanidins tetramers,SPC-Ⅲ)为原料,采用荧光标记的方法比较其抑制Streptococcus mutans Ingbritt(c)黏附效果,在此基础上结合双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-associated laser dissociation/ionization time of fl ight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)探究其干预S.mutans Ingbritt(c)黏附的主要途径并期望阐明其作用机理。结果表明:SPC-Ⅲ比SPC混合物抑制S.mutans Ingbritt(c)体外黏附的效果更强,SPC-Ⅲ处理细菌的抑制效果强于处理获得性膜的抑制效果,是其抑制细菌黏附主要途径;类葡萄糖基转移酶(glycosyltransferases,GTFs)活性蛋白(3.10-Ⅱ)经SPC-Ⅲ作用前后的2-DE图有明显差异,差异点均为S.mutans中的不同蛋白酶类,其中A24可能是一种新蛋白。  相似文献
5.
建立了水解胶原蛋白口服液中肽分子量分布的基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测方法。实验探讨了基质的选择、基质与样品的配比及检测方式对测定的影响,结果表明,采用合适的基质与样品的配比,在正离子反射模式下,以2,5-二羟基苯甲酸(DHB)为基质,可得到水解胶原蛋白口服液中肽分子量分布的质谱图,该水解胶原蛋白口服液中肽的分子量主要集中在0.6~1.5ku。该方法简单快速,有较高的准确性,且提高了检测效率,可实现批量检测。  相似文献
6.
为了评估金桔的食用风险,试验采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)调查金桔表面肠杆菌科微生物分布情况,筛选致病微生物,同时采用与生化鉴定和16S rDNA测序鉴定辅助鉴定结果。实验共分离6种的肠杆菌科细菌,分别为日沟维肠杆菌、分散泛菌、肺炎克雷伯菌、阪崎肠杆菌、生癌肠杆菌、阴沟肠杆菌,其中分散泛菌、阴沟肠杆菌和肺炎克雷伯菌出现频率较高;对三种鉴定方法进行比较分析,MALDI-TOF-MS鉴定结果与另外两种与属水平一致,种水平有偏离;MALDI-TOF-MS对分离微生物进行聚类分析表明同属微生物亲缘较近,同种微生物峰谱图仍有差异。试验结果表明,金桔表面具有肠道致病微生物,有一定食用风险,建议加强农产品致病菌常规的检测及风险评估力度;MALDI-TOF-MS方法可分辨率高且能提供基于蛋白质水平归类分析可以用于农产品微生物的快速检测。  相似文献
7.
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱( Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS) 技术在微生物检测与鉴定中有着广泛的应用前景。着重介绍MALDI-TOF MS分析技术微生物检测原理、前处理技术及其在微生物检测、鉴定、分型、溯源分析中的应用。与传统的检测鉴定方法相比,MALDI-TOF MS分析技术表现出成本低、检测时间短、易于操作等显著的技术优势。随着微生物质谱数据库以及分析方法的逐渐完善,该技术将成为微生物实验室致病菌快速检测鉴定的重要分析手段。  相似文献
8.
目的 评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)对食源性金黄色葡萄球菌的鉴定效果。方法 应用MALDI-TOF MS对210株食源性金黄色葡萄球菌进行鉴定, 与传统的生化鉴定结果进行比较, 并用SPSS19.0软件分析鉴定结果。结果 MALDI-TOF MS将210株金黄色葡萄球菌鉴定到种、属水平分别为98.10%和1.43%, 与VITEK 2鉴定方法无差异(P>0.05)。结论 MALDI-TOF MS具有简便、快速、准确等优点, 适用于对食源性金黄色葡萄球菌进行高通量、低成本的快速鉴定。  相似文献
9.
目的 建立快速检测和鉴定溶藻弧菌的方法, 采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI- TOF-MS)和SARAMIS分析软件, 对来自水产品中的溶藻弧菌进行了检测和鉴定。方法 将从样品中分离得到的可疑菌落于37 ℃纯化培养24、48、72 h后, 分别用微生物API生化鉴定系统和MALDI-TOF-MS方法进行分析鉴定, 并对MALDI-TOF-MS鉴定方法的稳定性、准确性和重复性进行初步探讨。结果 不同的培养时间, 24、48和72 h对MALDI-TOF-MS检测的蛋白质谱图影响较小, 鉴定值分别为94.10%, 93.90%, 92.70%; 同时用微生物API-20E生化鉴定试剂盒进行辅助分析鉴定, 培养24 h后, 鉴定值为97.7%, T值为0.47, 但培养72 h后, 鉴定值为52.4%, T值为0.15。同一样品点样2次, 得到的6张图谱显示出峰位置基本一致。用标准菌株大肠埃希菌ATCC 8739和溶藻弧菌ATCC 17749纯化培养24 h后, 鉴定值分别为99.90%和97.60%。结论 与传统的生化鉴定方法相比, MALDI-TOF-MS和SARAMIS软件分析方法具有较高的稳定性、重复性和准确性, 可以快速、准确地鉴定溶藻弧菌, 可用于水产品中溶藻弧菌的高通量、低成本的快速检测鉴定。  相似文献
10.
目的利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术鉴别生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门氏菌的常规检验中出现的类似菌。方法在郑州市不同地区分批次采集164份生鲜猪肉样品,按照国标方法进行增菌培养,选择性培养基HE和EMB对细菌进行分离纯化。通过MALDI-TOF-MS技术对疑似菌落进行鉴定;提取被检菌株基因组DNA,根据MALDI-TOF-MS鉴定出的细菌种类,参考Gen Bank中相关菌株的已知基因序列分别设计引物,进行PCR扩增、测序和序列比对,以验证MALDI-TOF-MS鉴定结果。结果经MALDI-TOF-MS方法鉴定,从68个疑似菌株中分别检出柠檬酸杆菌(Citrobacter)6株、奇异变形杆菌(Proteobacteria)5株、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)9株、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)1株、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)3株、不动杆菌(Acinetobacter)1株。PCR结果与MALDI-TOF-MS鉴定结果完全一致。结论 MALDI-TOF-MS可用于生鲜猪肉检验过程中大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定。本次共检出6种在HE和EMB培养基上与沙门氏菌/大肠杆菌菌落特征类似的肠杆菌科其他细菌,说明在生鲜猪肉中存在着一定程度的条件致病性肠道细菌污染,因此具有一定的食品安全风险。  相似文献
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