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1.
为分析转基因水稻外源基因拷贝数,利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析。转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因(GUS和HPT基因)和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得。定量分析了14株T0代的转基因水稻植株,得到了外源基因插入分别为1、2、3和4的转基因植株,同时利用Southern Blot方法进行验证分析。随机选择18个已经过定量PCR检测分析的转基因水稻植株,用Southern Blot的方法分析转基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷贝数,Southern Blot分析结果显示有15个转基因水稻植株的分析结果与定量PCR分析的结果是一致的,3个植株定量PCR分析的转基因拷贝数稍高于Southern Blot的分析结果,主要原因是Southern Blot方法在同一个插入位点有多拷贝的T-DNA片段插入时,转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA片段,电泳分析时很难分辨清楚。定量PCR方法则完全避免了这种情况的发生,除非目的基因DNA片段在PCR引物处发生断裂。两种方法分析结果的比较显示定量PCR方法分析转基因拷贝数更加有效、适用。  相似文献
2.
实时荧光定量PCR技术原理及在食品检测中的应用   总被引:3,自引:0,他引:3  
《食品与发酵工业》2015,(3):243-247
实时荧光定量PCR技术是一种新兴的核酸定量分析技术,与普通PCR定性分析相比,具有简单高效、准确灵敏、实时分析等更多的优势,是一项实用性很强的技术方法。文中主要对实时荧光定量PCR技术的操作原理、荧光类型及其在食品检测和科学研究领域中的应用进行综述。  相似文献
3.
嗜虫书虱β-actin基因克隆及定量PCR方法的建立   总被引:2,自引:2,他引:0  
旨在建立嗜虫书虱的实时荧光定量PCR分析方法,为嗜虫书虱基因的定量分析提供技术支持。利用RT-PCR方法,从嗜虫书虱体内克隆获得了β-actin基因cDNA片段(GenBank登录号:FJ041117),该基因片段长度为822 bp,编码273个氨基酸残基(从第3个碱基开始编码)。根据此β-actin基因的序列设计引物,建立了基于SYBR Green I染料技术的实时荧光定量PCR方法。建立的嗜虫书虱β-actin实时荧光定量PCR法扩增效率高、检测范围广、检测周期短,为β-actin作为内参基因进行嗜虫书虱功能基因的定量分析奠定了基础。  相似文献
4.
受PVY诱导的烟草NtERD1的基因分离与表达分析   总被引:2,自引:1,他引:1  
通过抑制差减杂交和cDNA芯片法从受PVY诱导的烟草抑制差减杂交文库中筛选得到一段长为745 bp的基因EST片段,经Blast同源性比对分析,该序列与植物脱水诱导早期应答基因(ERD)在核苷酸和氨基酸水平上高度同源.ORfinder分析表明,该序列包含一个492 bp的开放读码框,编码163个氨基酸.氨基酸Blastp比对显示,该氨基酸序列与其他植物脱水诱导早期应答蛋白具有很高的同源性.所以筛选得到的这个新基因属于烟草脱水诱导早期应答基因,被命名为NtERD1(GenBank登录号为GU144573).实时荧光定量PCR分析表明,NtERD1在PVY接种早期上调表达,因此NtERD1受PVY侵染诱导,可能对烟草抗病毒具有重要作用.  相似文献
5.
荧光PCR方法定性和定量检测BT63转基因大米   总被引:2,自引:0,他引:2  
采用实时荧光定量PCR技术,建立定性(量)鉴定转BT基因稻米成分的方法.根据稻米内源蔗糖磷酸合成酶(SPS)和结构特异性BT基因序列的特点设计引物和探针,可特异性地对转BT基因的稻米进行品种鉴定.把100%转BT基因稻米提取得到的DNA进行梯度稀释,作为标准DNA构建荧光定量标准曲线.检测限为0.5%,在0.5%水平上检测误差为20%.  相似文献
6.
目的:构建肉制品副溶血性弧菌实时荧光定量PCR的标准阳性模板和检测方法。方法:以副溶血性弧菌toxR基因上特异性片段为目标,设计并合成引物及Taqman探针,将目标片段连接到PGM-T载体上构建重组质粒,建立实时荧光定量检测体系,并考察方法的灵敏性、特异性、重复性和准确性。结果:构建出副溶血性弧菌荧光定量PCR检测方法的标准模板并建立了相应的检测方法,获得的标准曲线方程为:Y=-3.151 lgX+42.86,灵敏度40copies/反应体系,对副溶血性弧菌具有特异性,同时,该方法具有良好的重复性,变异系数小于5%。结论:使用基于Taqman探针技术的荧光定量PCR检测方法能够对食品中致病性副溶血性弧菌进行快速、简便、准确、高效的定量检测。  相似文献
7.
实时荧光定量PCR监测镇江香醋醋酸发酵过程中微生物变化   总被引:2,自引:2,他引:0  
对镇江香醋醋酸发酵阶段醋醅中功能微生物的变化进行定量分析。建立了实时荧光定量PCR方法,对醋酸发酵阶段醋醅中总细菌、总真菌、醋酸菌、乳酸菌和酵母的动态变化进行了定量分析。研究结果表明,发酵起始阶段(1~7天)醋醅中总细菌、醋酸菌和乳酸菌的生物量快速上升,分别于第6、7、4天达到最大值,为4.85×1011,1.14×1010和3.37×1011copies/g干醅。随后各类细菌的生物量逐渐下降,并维持在一定水平。醋醅中总真菌和酵母的生物量在发酵前期变化不大,7天后至发酵结束总真菌的生物量逐渐下降为7.59×104copies/g干醅,而酵母生物量则在发酵8~12天内下降为0。  相似文献
8.
挪威三文鱼(学名大西洋鲑)和虹鳟的鱼肉颜色和纹理相似。在市场上常存在将一些挪威三文鱼片错贴标签或以虹鳟冒充挪威三文鱼的现象。为了鉴别挪威三文鱼制品的真伪,以COI基因为靶基因,设计2对鲑科鱼类的通用引物,优化退火温度和两对引物的浓度比值,然后做稳定性试验,建立基于SYBR-Green实时荧光定量PCR熔解曲线快速鉴别大西洋鲑的方法。试验结果显示,当鲑科鱼类DNA模板100 ng,两对通用引物的浓度比值1∶1、退火温度50℃时,大西洋鲑和虹鳟鱼的Tm值分别为(86.29±0.172),(83.50±0.201)℃,且3个检验批次的Tm值没有显著性的差异(P=0.772),表明大西洋鲑和虹鳟可通过实时荧光定量PCR熔解曲线法进行鉴别。该方法可用于大西洋鲑与红鲑、银鲑以及大马哈鱼及其制品的鉴别,具有快速、操作方便、成本低廉、准确度高和重复性好的特点。  相似文献
9.
实时荧光定量PCR技术在食源性致病菌检测中的应用   总被引:1,自引:0,他引:1  
近年来食源性疾病爆发数量呈上升趋势,食品安全问题已经成为危害人们生命和健康的严重问题,引起了全世界消费者对食品品质、安全和卫生的关注。实时荧光定量PCR技术是在定性PCR技术的基础上发展起来的核酸定量技术,灵敏性高、特异性强,实现了对DNA模板的定量检测,目前已广泛应用于食品检测领域。本文概述了实时荧光定量PCR技术的原理及其在食源性致病菌检测中的应用,并对其应用前景进行了探讨。  相似文献
10.
TaqMan探针荧光定量PCR检测甜菜低温胁迫相关miRNAs   总被引:1,自引:0,他引:1  
本项研究根据模式植物拟南芥中miR156,157,159,167,319,396在植物中所具有的广泛同源性及其在非生物胁迫环境下可能具有的共同调控机制,采用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术检测低温胁迫下甜菜幼苗同源miRNAs的差异表达,以期揭示甜菜响应低温胁迫的可能分子机制.实验表明,甜菜中存在与拟南芥同源的miR156,157,159,167,319,396基因,miR159基因表达稳定,在本实验中用作定量内参,miR156,157,167,396明显下调,而miR319虽然被认为与miR159属于同一家族,但在甜菜幼苗低温胁迫下表现为明显上调,说明miR156,157,167,319,396是甜菜中响应低温信号的调控分子.本研究首次识别甜菜中存在与拟南芥同源的6个miRNAs,为进一步探索甜菜响应低温胁迫的分子机理奠定了技术.  相似文献
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