谷氨酰胺代谢在原发性肝癌发生发展及治疗中的研究进展

肝癌是我国高发并且危害性极大的恶性肿瘤，其具有高死亡率并起病隐匿等特点。目前，肝癌治疗主要是以靶向药物，手术和放化疗为主，容易出现复发率高、耐药性强等现象。本文以谷氨酰胺代谢为切入点，对目前研究较多的肝癌相关的谷氨酰胺代谢酶及相关基因分别予以综述，以期为肝癌的发病机制及药物治疗提供开放性新思路。     

红肉蜜柚果实冷藏过程中的活性氧代谢

从活性氧代谢的角度揭示冷藏延缓果实衰老的机制,为延长红肉蜜柚货架期提供理论依据。实验以红肉蜜柚果实为试材,室温贮藏为对照,研究冷藏(8℃)过程中汁胞、白皮层和外果皮的活性氧相关物质的含量和酶活性。结果显示,果实的过氧化物酶、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性整体呈现外高内低趋势:外果皮>白皮层>汁胞;与对照组相比,冷藏显著(P<0.05)抑制汁胞丙二醛和过氧化氢含量增加,通过保持过氧化氢酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性,维持汁胞活性酶的清除能力,从而延长果实的贮藏保鲜期。     

气相色谱-三重四极杆质谱法快速测定糙米中氟虫腈及其代谢物残留

目的建立气相色谱-三重四极杆质谱(gas chromatography-triple quadrupole mass spectrometry,GC-MS/MS)测定糙米中氟虫腈及其代谢产物氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚残留的的分析方法。方法糙米加水涡旋混匀后乙腈提取,通过N-丙基乙二胺(primary secondary amine,PSA)、C_(18)粉末、石墨化炭黑(graphitized carbon black,GCB)粉末净化提取液,气相色谱-三重四极杆质谱多重反应离子监测模式(multiple reaction monitoring,MRM)检测,以外标法定量。结果在1～50μg/L范围下,氟虫腈及其代谢物具有良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.99,在2、10、20μg/kg 3个添加水平下,氟虫腈及其代谢物的平均回收率为91.6%～109.9%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为4.3%～6.3%。氟虫腈及其代谢物在糙米中的定量限为0.2～0.5μg/kg,定量限添加回收率在85.0%～108.0%,RSD为5.9%～6.9%。结论该方法操作简单快速、试剂耗材消耗少、灵敏度高,适用于快速处理大批量糙米中氟虫腈及其代谢产物的残留量检测。     

基于核磁共振代谢组学分析不同品种草莓的化学成分差异

目的采用基于核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)的代谢组学方法对"丰香""久香""宁玉"和"甜查理"4个不同品种草莓进行指纹图谱比较和化学成分差异分析。方法采用主成分分析法综合评价4个不同品种草莓的整体分布状况;采用正交偏最小二乘判别分析法筛选并鉴别出引起不同草莓品种有所差异的潜在差异代谢物。结果研究发现,苹果酸在"丰香"草莓中含量最低,蔗糖含量则最高;蔗糖在"久香"草莓中的含量最低;丙氨酸、柠檬酸、天冬酰胺、D-葡萄糖和D-果糖在"宁玉"中含量最低;丙氨酸、苹果酸、柠檬酸、天冬氨酸和D-葡萄糖在"甜查理"中含量最高。结论基于NMR的代谢组学技术可以用于草莓品种的鉴别和化学成分的差异分析,并为草莓的品种溯源提供科学数据。     

改性魔芋葡甘露聚糖对齐口裂腹鱼脂质代谢及相关基因表达的影响

对比了两种改性魔芋葡甘露聚糖对齐口裂腹鱼生长性能、肝脏基础成分、血清生化指标及肝脏相关基因表达的影响,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对齐口裂腹鱼血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(T-CHO)及甘油三酯(TG)进行分析,利用实时荧光定量PCR技术对鱼类脂肪合成和沉积过程的关键基因肝脏脂蛋白酯酶(lpl)、肝酯酶(hl)、脂肪合成酶(fas)相对表达量进行定量分析。结果表明:改性魔芋葡甘露聚糖种类、添加剂量以及两者交互水平对齐口裂腹鱼生长均无显著影响。在魔芋葡甘露聚糖硫酸酯(OKGMS)改性条件下,随着添加剂量的增加肝脏脂肪、血清LDL-C、T-CHO、TG含量显著降低,当添加质量分数1.6%OKGMS达到最低;在酸解魔芋葡甘露聚糖改性条件下(AOKGM),随着添加剂量的增加血清LDL-C、T-CHO、TG质量分数呈先降低后增加趋势,当添加质量分数0.8%AOKGM达到最低,均与对照组达到显著差异。与基础组相比,添加质量分数1.6%OKGMS、0.8%AOKGM血清HDL-C显著增加,肝脏lpl m RNA表达量分别增加7.7和2.7倍。     

TagS750-Cas9核酸酶的制备及体内代谢分布研究

Cas9核酸酶在CRISPR/Cas9系统中执行切割靶标脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)的重要功能,研究其在体内的代谢行为对活体水平的基因编辑具有重要的指导意义。本工作采用N-羟基琥珀酰亚胺酯键将近红外荧光染料Vivo TagS750与Cas9蛋白偶联,制备了标记率高达99%的TagS750-Cas9融合蛋白。采用荧光强度监测以及琼脂糖凝胶电泳的方法对Cas9蛋白在常见生理缓冲溶液中的稳定性及切割活性进行了鉴定,并将其尾静脉注射到BALB/c小鼠体内,通过监测TagS750-Cas9蛋白荧光强度的变化对其在体内的代谢和分布进行了研究。结果表明:TagS750-Cas9蛋白的体外稳定性良好,表面标记的TagS750并不影响Cas9蛋白的切割活性。TagS750-Cas9蛋白进入体内后,平均血浆消除半衰期(t1/2β)为55 h;主要分布于肝、肾、肺、脾脏中,心脏的分布较少;72 h可被机体完全代谢清除。研究结果为CRISPR/Cas9系统中Cas9核酸酶的体内应用奠定了基础。     

黄酒酿造过程中氨基甲酸乙酯形成的细胞生物学基础及消减研究进展

氨基甲酸乙酯(EC)是发酵食品(面包、酸奶、大豆奶酪等)和酒精饮料(葡萄酒、清酒、黄酒等)在发酵过程中，含氮化合物不完全代谢产生的副产物，与乙醇自发反应产生的，对人体具有潜在遗传毒性和致癌性。黄酒是我国传统而独特的发酵酒，因独特的风味和较高的营养价值，而深受消费者的喜爱。然而，在传统黄酒中，氨基甲酸乙酯含量显著高于其它酒精饮料，对消费者健康构成潜在的安全隐患。降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量对黄酒产业的可持续发展具有重要意义。本文综述尿素、瓜氨酸及精氨酸分别在酿酒酵母及乳酸菌细胞中代谢调控机制，以及黄酒酿造过程中EC消减的方法。     

绿豆皮对高脂饲料联合链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠糖脂代谢的改善作用

通过建立的高脂饲养联合链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠模型,探究绿豆皮对糖尿病小鼠糖脂代谢的影响。动物实验结果表明,将6%的绿豆皮添加到高脂饲料中,通过连续8周的干预,与模型组糖尿病小鼠相比,干预组小鼠的血糖、血脂和糖化血清蛋白水平显著降低(P0.05),胰岛素分泌水平显著升高(P0.05),葡萄糖耐量显著改善(P0.05)。通过对肝组织和胰腺组织进行病理学观察发现,补充绿豆皮可有效缓解糖尿病小鼠的肝和胰腺组织损伤。绿豆皮对糖尿病小鼠具有显著的改善作用,为扩大绿豆皮的应用以及辅助降糖功能食品的开发具有重要的意义。     

葡萄糖及其代谢产物对犬肾上皮-siat7e细胞生长代谢的影响

目的探讨葡萄糖及其代谢产物对转染siat7e基因的犬肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞(MDCKsiat7e)生长代谢的影响。方法采用含不同起始量(3. 86、6. 46、9. 29、10. 60、12. 80、16. 06 g/L)和维持量(3、5、7 g/L)葡萄糖浓度的无血清无蛋白培养基cellhappy BD001(简称BD001),分别分批培养MDCK-siat7e细胞,每24 h取样进行活细胞计数及葡萄糖、乳酸、氨含量测定。结果不同起始及维持量葡萄糖浓度的BD001对MDCK-siat7e细胞生长均无明显影响,细胞比生长速率以及乳酸、氨比生成速率和乳酸、氨含量差异均无统计学意义(P 0. 05)。结论葡萄糖并不是制约MDCK-siat7e细胞生长的重要因素,起始葡萄糖浓度较低时,细胞生长后期可能利用代谢副产物乳酸维持生长,而起始葡萄糖浓度较高时,代谢副产物乳酸则有可能抑制细胞的生长,氨对细胞的生长具有明显的抑制作用。     

超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法同时测定生菜中四环素类抗生素及其代谢产物

目的建立超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)测定生菜中9种四环素类抗生素及其代谢产物的残留分析方法。方法生菜样品采用EDTA-Mcllvaine缓冲液与乙腈混合溶液提取,HLB固相萃取小柱净化,色谱分离选择ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以乙腈和0.2%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,得到的分离效果较好。质谱采用电喷雾正离子电离、多反应监测模式检测。结果在0.01~0.5 mg/L范围内线性相关系数r2均大于0.99。仪器检出限为1.085~15.780μg/kg,方法的定量限为3.617~42.526μg/kg。在4个添加水平0.01、0.05、0.1和0.5 mg/kg下,除脱水四环素和差向脱水四环素(其回收率40%)外,其余四环素类抗生素及代谢产物在蔬菜中的添加回收率在为63.4%~101.3%,相对标准偏差为2.52%~12.56%。结论该方法灵敏度高,净化效果好,可以用于蔬菜中四环素类抗生素及其代谢产物的残留分析。