基于RPA-LFD法的多黏菌素耐药基因mcr-1可视化快速检测方法建立与应用

目的：建立一种快速、高效、可视化的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1检测方法，为其基层检测的展开提供依据和便利。方法：利用重组酶聚合酶扩增结合胶体金侧向流试纸条技术(Recombinase polymerase amplification combined with a lateral flow dipstick,RPA-LFD)，辅以手持式胶体金读数仪；根据mcr-1基因保守序列设计合成一对特异性RPA引物，通过对反应条件和体系的优化，以及特异性试验、灵敏度试验、模拟食样试验和实际样品试验，成功建立了可视化定量检测细菌多黏菌素耐药基因mcr-1的RPA-LFD方法。结果：在引物浓度400 nmol/L，引物比例1:1时，该方法最佳反应条件为Mg²⁺浓度14.0 mmol/L，反应温度37℃，反应时间20 min；灵敏度好，标准曲线方程为y=0.117x+0.051，定量限为10¹～10⁸ copies/μL，检出限为10¹ copies/μL，比PCR法低一个数量级且模拟样品检出结果与PCR法一致。利...     

微波辅助孵育法富集麦胚多肽的工艺优化

目的 麦胚孵育过程中蛋白酶将蛋白质水解成肽和氨基酸，多肽具有明确的生理活性和营养调节作用。本研究以麦胚为试验原料，采用微波辅助预处理的方法，研究孵育的温度、时间、pH及料液比4种因素对孵育后的蛋白酶活力及多肽含量的影响。 方法 通过单因素和响应曲面试验进行工艺条件优化。 结果 与未进行微波辅助预处理的样品相比，微波辅助处理（600 W, 10 s）能显著提高孵育后样品中的蛋白酶酶活力（约9.4倍）和肽含量（约3.1倍）。经过微波辅助处理后，孵育温度为51.5℃、pH为4.0、时间为6.33 h、料液比为1:7时，蛋白酶活力达最高为3826.24 U/g；孵育温度为45.0 ℃、pH为4.8、时间为8 h、料液比为1:7时，肽含量达最高为262.63 mg/g。 结论 微波辅助处理能有效的激活麦胚孵育液中的内源性蛋白酶活性，促进蛋白水解反应，显著提高孵育后的肽含量。该研究结果为麦胚多肽的制备新工艺开发提供了研究基础。     

菌酶协同改善花生粕的饲用品质

花生粕是重要的蛋白饲料原料，但由于其氨基酸不平衡，特别是精氨酸与赖氨酸比例严重失衡（精氨酸与赖氨酸含量比值在3~4，理想的精氨酸与赖氨酸含量比值为1.0），限制了其在动物养殖中的应用。研究了复合酶预处理结合乳酸菌发酵花生粕对其品质的改善。结果表明：经菌酶协同处理后，花生粕粗蛋白质含量由46.4%提高至506%，大分子蛋白明显降解为小分子蛋白，酸溶蛋白质含量由2.3%提高至17.8%，多肽含量由1.6%提高至15.7%，蛋氨酸和赖氨酸含量分别提高了77.1%和42.0%，精氨酸降解率为18.7%，精氨酸与赖氨酸含量比值从3.7降低至2.1，总酸含量由06%提高到4.7%，其中乳酸含量由0.64 mg/g提高至14.63 mg/g。菌酶协同处理后的花生粕抗氧化性明显增强，其中每克菌酶协同处理后的花生粕对羟自由基的清除能力与171.6 mg VC相当，比花生粕（与47.6 mg VC相当）提高了2.6倍。     

漆酶的吸附固定及其对双酚A的降解

以介孔硅为载体,采用吸附法将漆酶固定。结果表明,酶固定量为30.3 wt%,活性回收率14.52%,ADS/Lac的米氏常数K_m和反应速率V_(max)分别为29.60μM和0.025μM/min,而游离酶的米氏常数K_m和反应速率V_(max)分别为20.32μM和0.045μM/min,说明固定后酶的亲和力降低,同时反应速率也降低,而稳定性得到了一定的提高。将ADS/Lac应用于双酚A模拟废水的降解时,发现在pH=5时,双酚A的降解效果最好,且降解能力优于游离酶,也可以实现重复利用。     

更正

《食品科学》2020年10期生物工程栏目172-179页刊登的《黑曲霉发酵产木糖苷酶工艺优化》,由于作者笔误,误将第二作者“丁泓皓”姓名写为“丁鸿皓”,现更正为“丁泓皓”,特此说明。     

卤醇脱卤酶催化合成(S)-2-溴-1-苯基乙醇的工艺优化

以新型卤醇脱卤酶AbHHDH为催化剂,催化拆分外消旋2-溴-1-苯基乙醇生成光学纯的(S)-2-溴-1-苯基乙醇,通过单因素实验探究了缓冲液pH值、缓冲液浓度、催化剂用量、底物浓度以及温度对催化合成反应的影响。结果表明,在NaH_2PO_4-Na_2HPO_4缓冲液pH值为8.0、NaH_2PO_4-Na_2HPO_4缓冲液浓度为200 mmol·L~(-1)、催化剂用量为37.5 g·L~(-1)、底物浓度为20 mmol·L~(-1)、温度为28℃的最优工艺条件下反应15 min,(S)-2-溴-1-苯基乙醇的ee值为100%,收率为35.11%。     

不同热加工处理方式对中华绒螯蟹原肌球蛋白的消化稳定性和致敏性的影响

目的 探究不同热加工处理方式对中华绒螯蟹原肌球蛋白的消化稳定性和致敏性的影响。方法 以中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）为原料，采用4种不同热加工方式（蒸煮、超声波结合蒸煮、反压蒸煮、高温高压）对蟹肉进行处理，参照美国药典中模拟胃、肠液消化实验方法，对处理后蟹肉的TM粗蛋白进行体外消化，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS–PAGE）、免疫印迹（Western blotting）和抑制性酶联免疫吸附测定（Inhibition enzyme linked immunosorbent assay，Inhibition ELISA）等技术分析其消化稳定性及消化产物的致敏性。结果 结果显示，与未处理的样品相比，普通蒸煮处理后TM的消化稳定性及致敏性没有明显变化（P>0.05）；超声波结合蒸煮、反压蒸煮以及高温高压处理对TM降解具有明显的促进作用，TM及其消化产物的致敏性也显著降低（P<0.05）。结论 实验中反压蒸煮与高温高压处理对致敏性消减的效果较好。本实验为过敏原消减机制的研究和低致敏性水产品的开发提供了理论依据。     

加工食品中虾蟹类过敏原ELISA检测前处理方法的研究

目的建立了一种可应用于加工食品中虾蟹类过敏原检测的前处理方法。方法针对提取液和提取步骤2个部分选取条件先后进行优化,通过对相应样品提取后的蛋白溶出量等进行评估,选取最适合本ELISA检测的条件。结果采用含有0.5%SDS和0.5%DTT的磷酸盐缓冲液(pH 8.5),按照食物样品与提取液的1:9 (m/V)进行混合,在室温下均质30 min,3020×g离心15 min,取上清液进行检测效果最佳,此方法与PBS(pH7.4)溶液提取方法相比,蛋白质溶出量增加了约5倍。结论在已建立的检测虾蟹类过敏原夹心ELISA的基础上,建立优化前处理方法进一步提高了加工食品中过敏原的提取率。     

红色红曲菌组蛋白去乙酰化酶MrSir2的原核表达及活性分析

根据基因组序列信息,利用cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)得到了红色红曲菌中组蛋白去乙酰化酶mrsir2基因的完整cDNA序列,其编码序列(coding sequence,CDS)为1539 bp,编码512个氨基酸,含有一个SIR2蛋白保守结构域。根据大肠杆菌的密码子的偏好性对mrsir2序列进行优化,优化后的序列与p ET-28b载体连接后转入宿主菌E.coli BL21中进行IPTG诱导表达,并优化表达条件。实验结果表明:在16℃条件下用终浓度为0.25 mM的IPTG诱导培养16 h后,目的蛋白Mr Sir2可溶性表达效果良好。Ni2+柱亲和层析纯化后的Mr Sir2重组蛋白在SDS-PAGE上显示为一条约75 ku大小的条带,蛋白定量浓度达1.97 mg/mL,经Western blot鉴定为目的蛋白,测定酶活为78.5(OD/min/mg),780μM的二氢香豆素(dihydrocoumarin,DHC)对Mr Sir2蛋白的酶活抑制率为47%。Mr Sir2蛋白的可溶性表达为全面了解其酶学特征提供了材料,也为体外分析蛋白相互作用奠定了基础。