基于SNaPshot技术对ABO血型亚型分型的方法

ABO亚型会导致红细胞凝集反应出现正反定型不符,目前实验室针对ABO亚型的鉴定主要使用PCR-SSP,该技术存在假阳性、通量低等缺点,因此开发可准确鉴定ABO血型亚型的方法迫在眉睫.为解决该问题,作者构建了一种基于SNaPshot技术鉴定ABO血型亚型的方法,该方法通过检测ABO基因第六外显子(261、297)、第七外显子(425、467、695、700、803、871、1054)上的9个SNP位点,并根据它们的组合鉴别14种不同的ABO等位基因.作者还提取50个外周血样本的基因组DNA,运用SNaPshot技术成功地对所有样本进行分型,共检出10种等位基因,分别为A101、A102、B01、B305、BW11、O101、O102、O02、B(A)02和CisAB.经验证,该方法适用于ABO血型亚型的分型.     

基于RPA-LFD法的多黏菌素耐药基因mcr-1可视化快速检测方法建立与应用

目的：建立一种快速、高效、可视化的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1检测方法，为其基层检测的展开提供依据和便利。方法：利用重组酶聚合酶扩增结合胶体金侧向流试纸条技术(Recombinase polymerase amplification combined with a lateral flow dipstick,RPA-LFD)，辅以手持式胶体金读数仪；根据mcr-1基因保守序列设计合成一对特异性RPA引物，通过对反应条件和体系的优化，以及特异性试验、灵敏度试验、模拟食样试验和实际样品试验，成功建立了可视化定量检测细菌多黏菌素耐药基因mcr-1的RPA-LFD方法。结果：在引物浓度400 nmol/L，引物比例1:1时，该方法最佳反应条件为Mg²⁺浓度14.0 mmol/L，反应温度37℃，反应时间20 min；灵敏度好，标准曲线方程为y=0.117x+0.051，定量限为10¹～10⁸ copies/μL，检出限为10¹ copies/μL，比PCR法低一个数量级且模拟样品检出结果与PCR法一致。利...     

基于形态审美的产品基因网络造型研究

目的 利用产品形态审美基因网络，对台灯外轮廓曲线的相关性进行综合分析，析出产品优化与创新设计的关键要素。方法 以三次贝塞尔曲线对台灯的外轮廓曲线进行基因编码，规律性调整控制点的坐标生成新曲线形态，进行曲线视觉力感知识别，挖掘曲线间的相关性;以曲线基因为节点，相关性为边构建产品形态审美基因网络，并对网络进行拓扑分析，析出关键设计节点辅助设计者进行产品设计。结果 运用产品形态基因网络的理论找到原型设计的关键性节点，并进行设计优化，使产品造型设计更符合消费者的审美习惯和偏好。结论 通过对台灯外轮廓线的案例实践，证实了产品形态基因网络在产品细节优化和造型创新设计方面具有实用性和可靠性，能够辅助设计者找到关键设计节点并协调设计的基因集团。     

烟草“8306”NtCPS2基因敲除及叶面化学成分改良

8306是重要的高香气烤烟育种材料，因其腺毛分泌物中含有赖百当化合物而使其杂交后代具有晾晒烟香气特征。为此，本研究利用CRISPR/Cas9技术，对8306中赖百当生物合成途径的关键酶基因NtCPS2进行敲除，获得了gRNA区发生单碱基插入突变导致翻译提前终止的纯合突变体8306-1。与8306相比，该突变株系生长发育正常，腺毛类型和腺毛密度无显著变化；利用GC-MS技术对叶面化学成分进行检测，在8306-1中并未发现8306中所含有的顺冷杉醇和赖百当二醇等赖百当类化合物，而腺毛分泌物的其他主要成分，如西柏三烯一醇、西柏三烯二醇及蔗糖酯的含量与对照相比并无明显变化；RT-PCR检测分析显示，8306-1与8306中MEP途径及二萜生物合成途径的关键基因，如NtDXS、NtDXR、NtCMS、NtGPPS、NtGGPPS、NtCYC、NtCYP71D16等在转录水平上的表达均无明显差异。该研究结果表明，NtCPS2基因敲除能有效降低烟草赖百当类二萜化合物的含量，而对叶面其他化学成分及类萜途径基因表达无明显影响。因此，NtCPS2基因是进行烟草叶面化学成分定向改良的理想靶点，对烤烟高香气育种具有重要意义。      

5株发酵食品源乳酸菌的抗药性分析

以实验室前期分离自混合果蔬酵素的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum S)、分离自树莓酵素的植物乳杆菌(L. plantarum WD)和分离自不同奶制品的保加利亚乳杆菌(L. bulgaricus LB-DR)、鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus Lr-05-281)与干酪乳杆菌(L. casei D-400)5株乳酸菌为研究对象,采用平板药敏纸片扩散法、PCR及RT-PCR技术从表型、基因型以及基因表达几个方面分析菌株的抗药性。结果表明5株菌对氨基糖苷类、喹诺酮类、糖肽类抗生素、多粘菌素B均有抗性;对大环内酯类、四环素类、磺胺类抗生素、呋喃妥因均敏感,并有较为相似的耐药谱;而对不同的β-内酰胺类抗生素敏感性不同;5株乳酸菌均含有质粒,供试的12个抗性基因中,在质粒上检测到erm、aph、vanⅠ、aacⅠ4种抗性基因,基因组DNA上检测到aph、erm、vanⅠ、blaⅡ、aacⅠ、aacⅡ6种抗性基因。部分抗性基因在MRS和加抗生素的MRS培养下会表达,不表达的抗性基因在相应抗生素诱导的条件下其抗性基因不表达。L. plantarum WD菌株质粒上因只含一种vanⅠ抗性基因,其应用安全性较好。     

一株Bifidobacterium longum CCFM760的生理特性、安全性评价和基因分析

长双歧杆菌(Bifidobacterium longum CCFM760)是一株从江苏省无锡市滨湖区两岁健康幼女粪便分离筛选得到的具有良好缓解便秘功效的益生菌。作者对其生长产酸能力、人工模拟肠胃液耐受性、抑菌能力、低聚糖利用能力、抗生素耐受能力和总超氧化物歧化酶(SOD)活性进行了检测。该菌具有良好的生长产酸能力和人工模拟肠胃液耐受性,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用,能显著利用7种低聚糖,对14种抗生素敏感,培养液中总SOD活性达到(99.14±9.91)U/mL。此外,对该菌进行基因组草图测序,并从基因组角度解析了其低聚糖代谢能力、抗生素敏感性以及抗氧化能力。以上结果表明,B.longum CCFM760是一株安全的、具有实际应用潜力的益生菌。     

6个烟草重要产量相关性状的遗传分析

  目的  探索和分析烟草重要产量相关性状的遗传规律，为深入研究其遗传机制及烟草新品种选育过程中重要产量相关性状的选择提供依据。  方法  以烤烟Y3（P₁）和K326（P₂）为亲本配制杂交组合，在2年2点4个环境条件下利用主基因+多基因混合遗传模型方法对该组合各单世代（P₁、P₂、F₇和F₈）的株高、叶数、节距、茎围、腰叶长和腰叶宽进行遗传及相关分析。  结果  （1）在4个环境条件下，株高分别与叶数、节距间呈极显著正相关，腰叶长与腰叶宽两者间也呈极显著正相关，而节距与叶数间则呈现极显著负相关，且上述性状间的平均相关系数范围为-0.687~0.832。（2）最优遗传模型对于株高、叶数和节距3个性状均符合2对加性-上位性主基因+加性-上位性多基因混合遗传模型（MX2-AI-AI），其主基因遗传率分别为94.304%、95.632%和91.532%，多基因遗传率分别为3.965%、0和5.489%；腰叶长和腰叶宽2性状均是受2对抑制作用主基因+加性多基因（MX2-IE-A）控制，其主基因遗传率分别为88.383%和90.166%，多基因遗传率分别为7.348%和8.807%；茎围则由3对加性-上位性主基因（3MG-AI）控制，其主基因遗传率为72.051%。  结论  上述性状在多个环境条件下主要受主基因+多基因混合遗传模型控制（除茎围外），主基因遗传率远大于多基因遗传率，受环境影响较小，且以主基因遗传为主。故此，在烟草育种过程中针对产量相关性状的定向选择宜在早期世代进行。      

产胞外葡萄糖氧化酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质初步研究

乳酸脱氢酶（LDH）是乳酸生成途径中的关键酶，敲除乳酸脱氢酶基因，理论上可以减少甚至消除乳酸的产生，提高2,3-丁二醇的产量和得率。该研究采用体外拼接方式构建乳酸脱氢酶基因的同源线性片段ldhL-Cmr-ldhR，将其电转化至Klebisella oxytoca HD79中，通过Red同源重组技术筛选敲除成功的重组菌株，经聚合酶链式反应（PCR）、荧光定量-聚合酶链式反应（FQ-PCR）及2,3-丁二醇产量检测验证。结果表明，重组菌株2,3-丁二醇产量为40.20 g/L、转化率为0.38 g/g和生产强度为0.48 g/（L·h），相比供试菌株分别提高了26.8%、11.8%和45.5%；而乳酸产量则由4.83 g/L下降至2.45 g/L，相比供试菌株降低了49.3%。该实验为后续进一步提高2,3-丁二醇的产量和扩大菌株选择范围奠定基础。     

乌龙茶加工过程中α-法呢烯的形成关键调控基因的筛选与表达分析

为探讨乌龙茶加工过程中做青工序的机械力对香气成分中α-法呢烯的影响及形成机理,本实验以乌龙茶品种黄旦的鲜叶、萎凋叶、摇青叶为供试材料,未摇青等时间摊放叶为对照组,采用GC-TOF-MS 方法检测乌龙茶加工过程中α-法呢烯含量,结合转录组和茶树基因组数据库筛选α-法呢烯合成酶(AFS)关键基因,构建系统进化发育树,利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)进行数据验证,并进行α-法呢烯含量与基因表达水平间的相关性分析。结果表明,α-法呢烯的含量在第一次摇青时有所下降,由于机械胁迫的累加,摇青叶中α-法呢烯的含量逐渐增加并在第三次摇青时达到峰值(0.9485%)。筛选获得的CL11384.Contig7_All转录本与茶树α-法呢烯合成酶基因(CsAFS,GenBank登录号:MH125264.1)高度相似,暂命名为CsAFS7基因,该基因表达模式与测序数据相一致。皮尔逊相关系数分析表明,乌龙茶加工过程中α-法呢烯含量与CsAFS7基因的相关表达水平之间存在极显著正相关(r=0.951,P<0.01)。因此,乌龙茶做青过程中α-法呢烯的累积可能受到CsAFS7基因的表达调控。