具有保护肠上皮细胞HT-29免受大肠杆菌和H2O2损伤潜力的植物乳杆菌的筛选

益生菌可在肠道定植从而发挥抗炎或抗氧化活性，有利于宿主肠道健康。本实验研究了从新疆传统发酵乳制品中分离得到的8?株植物乳杆菌对大肠杆菌侵袭和过氧化氢刺激肠上皮细胞HT-29的保护作用。结果表明：在8?株植物乳杆菌中，植物乳杆菌35具有最高的黏附能力。植物乳杆菌35可通过取代、竞争、排阻的方式抑制大肠杆菌对HT-29细胞的黏附，抑制率分别为42.60%、59.17%、60.19%。植物乳杆菌35及其多糖可抑制大肠杆菌刺激HT-29细胞产生白细胞介素-8；同时保护HT-29细胞免受过氧化氢的损伤，增加超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力水平并降低丙二醛含量。结论：植物乳杆菌35及其粗胞外多糖具有抑制大肠杆菌O157诱导的炎症性肠病的潜力。     

代谢工程改造大肠杆菌合成反式-4-羟基-L-脯氨酸

通过比对筛选,从Micromonospora sp.CNB394中获得高活性的L-脯氨酸-4-羟基化酶,随后利用规律成簇的间隔短回文重复-associated protein 9基因编辑方法,通过强化L-脯氨酸合成途径和引入高活性的L-脯氨酸-4-羟基化酶,构建1株以葡萄糖为碳源合成反式-4-羟基-L-脯氨酸的大肠杆菌基因工程菌HYP15。摇瓶发酵30 h,工程菌的反式-4-羟基-L-脯氨酸产量达到13.6 g/L。5 L发酵罐分批补料发酵40 h,反式-4-羟基-L-脯氨酸产量达到48.6 g/L,糖酸转化率和平均生产强度分别达到21.6%和1.22 g/(L h),具有良好的工业应用前景。     

改性石墨烯包覆光纤的马赫-曾德尔大肠杆菌传感器

针对日益严峻的食品安全问题,特别是食源性致病菌的快速检测,本文提出一种基于表面改性石墨烯粗锥型马赫-曾德尔干涉结构的光纤大肠杆菌传感器。首先,截取一根4 cm的实心光子晶体光纤,两端分别与两根单模光纤进行粗锥熔接,形成基于马赫-曾德尔干涉原理的传感结构;接着,制备一种表面改性石墨烯敏感材料,将它涂覆在实心光子晶体光纤的表面,使传感器对大肠杆菌溶液有较高的灵敏度;最后,将上述传感器置于水槽中,以此检测大肠杆菌溶液浓度。实验结果表明,在大肠杆菌溶液浓度为50~600 cfu/mL内,随着菌液的浓度增大,传感器的干涉光谱发生了明显的蓝移,灵敏度为3.43 pm/(cfu·mL^-1),菌液浓度与波长偏移的线性度为0.95649,检测限为67.18 cfu/mL,响应时间为15 s。该传感器成本低、体积小、响应时间快,适用于低浓度大肠杆菌浓度的快速检测。     

来源于P.bacterium 1109的甘露醇脱氢酶的重组纯化及酶学性质研究

本文将来自P.bacterium 1109的甘露糖醇脱氢酶(MDH)表达并提取纯化,研究了该重组酶的酶学性质及其在甘露醇生产中的工艺条件。结果显示重组MDH是一个相对分子量为37 kDa的四聚体。氨基酸序列比对发现其与大多数MDHs的同源性小于40%。该酶的最适pH和温度分别为8.5和80℃,且当金属离子Zn2+存在时,重组MDH的活力提高到对照组的260%。此外,重组MDH在75℃孵育6 h后仍可保留超过85%的残留活性,热稳定性较高,比大多数MDHs的活性高。底物特异性研究表明其对D-果糖具有较高的专一性。重组MDH催化D-果糖的米氏常数(K_m)和催化效率(k_cat/K_m)分别为20 mmol/L和7.5 L/(mmol·min)。重组MDH在以400 mmol/L的D-果糖为底物的反应系统中,可将80%以上的D-果糖转化为甘露糖醇。通过对反应条件的优化,为后续工业化生产制备甘露醇奠定了基础。     

广州某生猪养殖场大肠杆菌流行性及抗生素的耐药性

本研究采集广州某规模化养殖场腹泻仔猪、健康仔猪及环境样本共147份,据国标GB 4789.6-2016分离鉴定大肠杆菌,用K-B法分析分离株对12种抗生素的敏感性,并用PCR检测其对应的耐药基因。结果共检出大肠杆菌115株;分离菌株依次对复方新诺明,左氧氟沙星、加替沙星、环丙沙星呈高水平耐药,耐药率30%;对庆大霉素、头孢他啶、氨曲南也呈现一定水平耐药(20%~30%);对多粘菌素B、替加环素、亚胺培南耐药水平较低(15%),对美罗培南敏感;46.09%菌株呈现多重耐药(≥3种抗生素),且腹泻仔猪源菌株多重耐药率显著高于健康仔猪源及环境源菌(p0.05)。分离株耐药基因携带严重,其中ant(3')-Ⅰa、aac(3')-Ⅰb、sul1、aac(3)-Ⅱb,blaTEM、blaCTX、tet M基因检出率50%,因此,这可能是本研究菌株的主要耐药机制。研究结果表明该养殖场大肠杆菌污染严重,耐药水平高,有关部门需加强养殖中腹泻仔猪防治用药的监管与指导。     

响应面优化重组大肠杆菌表达RGD-TRAIL发酵工艺

为了提高RGD-TRAIL的表达量,对重组大肠杆菌的发酵工艺进行优化。在单因素实验的基础上,采用Box-Behnken实验设计进行了四因素三水平的响应面分析试验,研究了接种体积分数、pH值、诱导时间、诱导温度对RGD-TRAIL表达的影响。响应面结果表明,RGD-TRAIL表达的最佳条件为:接种体积分数7.88%,pH值7.02,诱导时间10.25 h,诱导温度22℃。在此条件下RGD-TRAIL的表达量达到17.27%,与模型预测表达量(17.31%)接近,较优化前提高了40.06%。     

流式分析技术快速定量检测牛乳中大肠杆菌O157:H7

建立一种基于流式分析技术的快速定量检测牛乳中大肠杆菌O157:H7的方法。用偶联有异硫氰酸荧光素的大肠杆菌O157单克隆抗体对大肠杆菌O157:H7进行特异性标记,通过优化抗体反应条件,建立流式检测方法,然后对磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffer saline,PBS)和人工污染牛乳样品中不同浓度的大肠杆菌O157:H7进行定量检测。本研究建立的流式检测方法的在PBS中的检测范围为2.57×10~3~1.12×10~8 CFU/m L,灵敏度达到2.57×10~3 CFU/m L。将所建立的流式检测方法应用于牛乳样品检测,当人工污染牛乳样品中大肠杆菌O157:H7的浓度在2.31×10~4~1.48×10~8 CFU/m L之间时,流式检测方法与平板计数方法检测结果基本一致,方法的灵敏度为2.31×10~4 CFU/m L,检测时间为35 min。该方法能快速、定量地检测出牛乳样品中的大肠杆菌O157:H7,在食源性致病菌的快速筛查和监控中具有重要的应用价值。     

城镇污水处理厂尾水消毒与自然水体微生态的关系

现行标准要求下,环保部门对污水处理厂排放的微生物指标要求较高。为了保证出水达标,污水处理厂普遍采用消毒方式进行处置。但是,部分消毒剂随出水进入水体,对自然水体的微生态造成了破坏,并不利于水环境质量的提升。文中结合上海城建设计研究总院/上海雨洪工程研究中心张显忠常务副主任的工程经验和同济大学环境学院戴晓虎院长的研究成果,对如何平衡水厂出水达标和水生态之间的问题进行了分析和思考。     

降糖肽Aglycin的高效表达及活性鉴定

基于自组装肽ELK16能在大肠杆菌细胞内自聚集的特性,本研究将Aglycin通过一个内含肽Mxe GyrA与自组装肽连接,构建能在体外自剪切的重组表达载体pET30a-Aglycin-Mxe-PT-ELK16。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行蛋白表达条件的优化,得到目的蛋白聚集体,随后对聚集体进行DTT切割条件的优化,经过进一步纯化最终可得到纯度为98.15%、产量为5.53mg/g菌体湿重的Aglycin肽。采用基因工程手段重组表达Aglycin的产量比目前化学提取方法提高了近100倍。此外,经体外实验证明,Aglycin对α-葡萄糖苷酶抑制的IC50(36.48μmol/L)比阿卡波糖(991.33μmol/L)低,说明Aglycin比阿卡波糖有更强的α-葡萄糖苷酶抑制活性,这进一步证明Aglycin有开发为α-葡萄糖苷酶抑制剂的潜力。     

黄曲霉毒素分解酶基因克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

通过GenBank公布的黄曲霉毒素分解酶基因序列,合成ADTZ基因引物。从发霉的玉米样品中提取混合菌液,经菌液PCR扩增,筛选ADTZ基因片段,构建表达载体,将目的基因转化到大肠杆菌中,并进行诱导表达。通过SDS-PAGE检测表达产物大小和浓度。通过酶解试验检测表达产物对AFB1的降解能力。结果成功从发霉玉米混菌悬液中扩增到ADTZ基因,该基因序列全长2 088 bp,与已报道的ADTZ基因相似度达到99%。该基因可在大肠杆菌中进行融合表达,表达产物蛋白大小为118.5 kDa。重组大肠杆菌培养后获得的粗酶液可降解发霉玉米中的AFB1,降解率达到77.69%。