南美白对虾肝胰腺蛋白提取方法优化及无水保活环境胁迫对细胞凋亡蛋白的影响

为提高Western Blotting结果的可靠性，以蛋白溶出率和凝胶电泳蛋白条带完整性为指标，比较提取液种类、研磨方式、酶抑制剂种类及其体积分数和提取时间对南美白对虾肝胰腺蛋白提取效果的影响。采用优化后的提取方法获得高质量蛋白样品，并采用Western Blotting法分析无水环境胁迫后南美白对虾肝胰腺组织中细胞凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。结果表明：RIPA裂解液作为提取溶剂所得的蛋白溶出率高于水提和磷酸盐缓冲液，电动匀浆和液氮研磨所得蛋白条带更完整，4%蛋白酶磷酸酶混合抑制剂能有效抑制肝胰腺内源酶引起的蛋白降解；采用Western Blotting法分析无水保活期间南美白对虾肝胰腺蛋白，发现低温诱导休眠的同时会引起细胞轻微凋亡，且凋亡水平呈应激时间依赖性增加，环境胁迫解除后有所回调。     

东北地区传统发酵食品中两株植物乳杆菌的安全性评价

针对已分离的植物乳杆菌L12和L20通过体外和体内两种方法进行安全性评价。通过体外实验测定乳酸水解活性抗生素敏感性，胆盐水解酶活性，D-乳酸含量，γ溶血等指标；体内实验是对小鼠进行短期口服毒性的研究，口服0.2 mL（109 CFU/mL）的实验性细菌溶液30 d。结果表明，体外实验中，两株菌株均具有良好的抗氧化活性，对抗生素敏感性高，胆盐水解酶活性高，D-乳酸含量低，γ溶血；体内实验中灌胃给药对治疗小鼠的生长、行为、摄食量、器官重量或组织病理学分析均无不良影响。与对照组相比，益生菌组小鼠血清MDA浓度和肝脏GSH含量差异有统计学意义(P<0.05)。这些结果表明，菌株L12和L20是非致病性的，人直接食用是安全的。     

Btk/JAK3双靶点共价抑制剂的设计、合成及其活性研究

布鲁顿式酪氨酸激酶(Btk)和两面神激酶3(JAK3)均是自身免疫性疾病和血液系统恶性肿瘤的潜力靶标。以4-氯吡咯并嘧啶为原料,经7步反应合成了一系列7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺衍生物,其结构经¹HNMR、¹³CNMR和MS(ESI)分析证实。体外依次考察了所得化合物分别对Btk和JAK3激酶的活性、以及对部分B淋巴细胞瘤细胞系的抗增殖活性。结果表明,四氢吡咯烷基取代的衍生物NB1~4对Btk(IC₅₀<3 nmol/L)和JAK3(IC₅₀<165 nmol/L)均能有效抑制,其余化合物只对Btk显示抑制效果;而且NB2和NB4对所测试的多种B细胞淋巴瘤细胞系的抗增殖活性均优于阳性对照泛激酶抑制剂依鲁替尼及Btk单靶点抑制剂。其中,对Jeko-1细胞的抑制能力最佳(IC₅₀<3μmol/L),其次是OCI-LYI(IC₅₀<4μmol/L)、SUDHL-6(IC₅₀<6μmol/L)和HBL-1^*(IC₅₀<6.5μmol/L),最差为SUDHL-4细胞(IC₅₀<11μmol/L)。这些发现可为开发B细胞淋巴瘤的多靶点药物提供新的思路。     

富硒长双歧杆菌DD98菌株对伊立替康所致小鼠腹泻及肠道菌群的影响

本研究建立伊立替康所致腹泻小鼠模型,通过长期灌胃富硒DD98(Selenium-enriched Bifidobacterium longum Se-DD98)菌株(一株新的长双歧杆菌菌株),评价其对伊立替康所致腹泻及肠道菌群的影响。正常对照组和伊立替康组小鼠每天灌胃无菌蒸馏水,实验组小鼠每天灌胃低剂量(活菌数1×108 CFU/kg)、高剂量(活菌数1×109 CFU/kg)Se-DD98菌液,除正常对照组外其他各组在第17 d腹腔注射伊立替康,实验周期为24 d。测定小鼠体重,小鼠腹泻等级,免疫指标,肠道菌群以及回肠组织结构。结果表明:与伊立替康组比较,Se-DD98低、高剂量组小鼠体重显著增加(P<0.05);腹泻等级显著降低(P<0.05);高剂量组白细胞数目显著增加(P<0.05),低、高剂量组脾脏指数和中性粒细胞数目均显著增加(P<0.05),说明Se-DD98具有调节免疫功能的作用。同时,低、高剂量组大肠杆菌、梭菌和拟杆菌含量均比正常组和伊立替康组显著减少(P<0.05),而双歧杆菌含量显著增加(P<0.01)。此外Se-DD98低、高剂量均能减轻伊立替康导致的肠道粘膜、细胞和腺体损伤。上述结果表明Se-DD98可能通过调节肠道菌群和保护肠道粘膜发挥缓解伊立替康导致的腹泻的作用。提示Se-DD98在辅助治疗伊立替康所致的腹泻等方面具有潜在应用前景。     

基于视觉伺服的细胞载玻片精确点胶方法研究

目前在机械臂与点胶机协同完成细胞载玻片点胶的过程中,由于点胶路径的固定造成系统的稳定性较差,主要表现为细胞在载玻片上的粘附位置一旦出现偏移则会导致点胶失败。为了解决这一问题,我们把视觉技术引入到点胶机的点胶位置测量过程中,根据细胞载玻片样本的图像特征,运用图像处理技术实现点胶位置的识别,与原点胶路径比对得到偏差,并根据此偏差大小判断是否需要改变点胶路径,从而实现对点胶位置实时监测与校正,提高工作效率,使系统的稳定性增强。实验结果表明,点胶准确率可以提高30%左右,满足样本制作的要求。     

在线生物活细胞浓度和电导率测量系统设计

为了实时在线监测活细胞生长状态，进而给细胞培养和生物反应过程提供积极的指导，设计了活细胞浓度和电导率测量系统，由传感探头、激励信号源、调理板、采集板、上位机这五部分构成，传感探头利用四电极，将激励和检测两部分分离，大大降低了电极极化效应给测量带来的影响，激励信号源采用FPGA+DDS方案，为系统提供激励信号，调理电路采差分接收方式并利用同频解调原理解调出电压幅值信息，采集电路将调理信号进行模数转换，采用了过采样技术提高测量精度，结果上传至上位机显示处理，测试表明，测量系统可以检测的细胞介电常数测量范围达400ｐＦ/ｃｍ以上，电导率测量范围达到40ｍＳ/ｃｍ以上。     

抗抑郁样及焦虑样行为乳酸菌的筛选

越来越多的证据表明益生菌可以通过微生物-肠-脑轴来调节大脑功能和行为。本试验利用行为模型从益生菌库中初筛选出7株具有抗抑郁样/焦虑样行为潜能的乳酸菌菌株。进一步采用明暗箱和高架十字迷宫实验研究乳酸菌对健康小鼠焦虑样行为的影响;利用悬尾实验和强迫游泳实验研究乳酸菌对健康小鼠抑郁样行为的影响。研究显示补充马乳酒样乳杆菌ZW3,植物乳杆菌MA2和植物乳杆菌299(10~8CFU)4周后,与空白对照小鼠相比,可以增加小鼠在明暗箱中亮箱的停留时间和高架十字迷宫实验中开臂的停留时间,改善小鼠的焦虑样行为;此外这3株菌还可以降低小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验中的不动时间,改善小鼠的抑郁样行为;并且它们可以降低小鼠脑区生物标记物5-羟色胺含量以及血清皮质酮水平。这些结果表明马乳酒样乳杆菌ZW3,植物乳杆菌MA2和植物乳杆菌299作为益生菌,具有改善焦虑样和抑郁样行为的潜能。