从蚕的生命到艺术：中国古代生命观的哲学表达

中国考古出土的蚕业实物及蚕的艺术形象比较丰富,蚕的艺术形象如蚕纹、陶蚕蛹、牙雕蚕、玉石蚕、铜蚕、金蚕等,可统称为"蚕的模拟形态"。对蚕的模拟形态的功用,已有的诸多解释都有待完善。研究表明,蚕的模拟形态或艺术形象表达的功用或为饰品,或为装饰图案,或有待进一步考究。但无论哪种功用,用"蚕"这一形象都蕴含了特有的用意。通过对中国古代生命观的考察,文章认为蚕的艺术形象折射出相应的中国古代哲学生命观,即中国古人追求的死而复生、生生不息、羽化成仙、长乐无极等观念。     

《吉》

宝相花纹样象征着圆满、吉祥,不同的表现形式有着不同的圆满特点。两个作品以宝相花的结构特点为设计元素,选取"离心"和"二方连续"两个结构特点,运用不同贵金属材质及宝石的排列进行了设计。对传统图案进行创新表达,旨在传承传统文化的同时融入现代审美,提高大众的接受度。     

抗甲硝唑单链抗体融合蛋白的表达及其ELISA检测方法建立

为实现甲硝唑单链抗体(single-chain variable fragment,scFv)在大肠杆菌中的可溶性表达,以甲硝唑抗体可变区基因(VH、VL)为模板,扩增甲硝唑的scFv基因,scFv双酶切后与PLIP6/GN载体重组,构建重组质粒PLIP6/GNscFv,转化大肠杆菌JM109,阳性克隆转大肠杆菌BL21经温度诱导表达重组单链抗体,并通过聚丙酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对其鉴定。采用竞争酶联免疫(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明诱导表达的scFv分子量接近33 kDa,能够特异性识别兽药甲硝唑,半抑制率(IC50)为(0.72±0.04)ng/mL。选择虾样品进行添加回收试验,建立的方法检测其回收率在88.54%到113.27%之间。这说明成功构建重组质粒PLIP6/GN-scFv并实现可溶性表达并可用于实际样品检测。     

赤红球菌组氨酸激酶的融合表达和功能分析

对赤红球菌的组氨酸激酶基因进行密码子优化，将优化后的组氨酸激酶基因（rhks）构建重组表达质粒pGEX-4T-2-rhks。将此质粒导入到大肠杆菌BL21（DE3）中进行异源表达。在25 ℃和1 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导条件下，组氨酸激酶融合蛋白（GST-RHK）获得成功表达，并具有催化活性。经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化，获得电泳纯的GST-RHK，其中纯化倍数为3.1，得率为19.5%。该蛋白大小约为72.75 kDa，Km、Vmax和Kcat值分别为20.92 μmol/L、0.17 μmol/（L·min）和1.4 min－1。野生型赤红球菌、组氨酸激酶基因增强株sdrhkE和组氨酸激酶基因敲减株sdrhkD在分别含有苯酚、甲苯、氯苯、异辛烷4 种有机溶剂的培养基中培养，菌株sdrhkD的生长情况都优于野生型赤红球菌，菌株sdrhkE的生长情况都低于野生型赤红球菌。本研究为进一步揭示赤红球菌SD3中组氨酸激酶涉及的信号转导途径与赤红球菌有机溶剂耐受性的关联机制提供一定参考依据。     

实验设计在原核表达条件优化中的应用

目的应用实验设计(Design of Experiment,DOE)优化原核表达条件。方法分别通过单因素变量和DOE方案优化pET32a-Ferritin在E. coil BL21(DE3)中的诱导表达条件(诱导时间、诱导剂浓度和起始菌体密度),并对两种方案得出的诱导条件的表达效率进行比较。结果单因素变量实验方案的最优条件为:菌体A600为0. 6时添加0. 5 mmol/L IPTG诱导4 h;DOE方案最优条件为:菌体A600为0. 8时添加1. 0 mmol/L IPTG诱导10 h。DOE方案更加便捷和准确,且表达效率更高。结论在处理多因素交互作用问题中,DOE方案能更加便捷地获得准确的外源蛋白表达的最优条件。本研究为原核表达系统的优化提供了新的方案,也为DOE方案在生物工程领域的更多应用提供了参考。     

鹰潭地区胃癌新发病例人群分布及HER-2表达情况与预后的相关性研究

目的:探讨鹰潭地区胃癌新发病例人群分布及HER-2表达情况与预后的相关性。方法:选取2015年1月-2017年12月本院收治行胃癌根治术的121胃癌患者作为研究组,选取30例胃良性病变患者作为对照组。应用免疫组织化学方法对研究组中的109例胃癌标本进行HER-2基因的表达,并将检测结果与患者的随访资料及临床病理参数进行综合分析。分析胃癌组织HER-2表达状况、HER-2表达与生物学和胃癌临床行为关系、HER-2表达与预后相关性。结果:研究组中12例未进行HER-2表达检测,对照组患者HER-2表达全部为阴性,胃癌组织已行HER-2检测的109例患者,其中HER-2阳性表达例数为15例,阳性率为13.76%,两组阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中HER-2表达与有无远处转移、Lauren分型、肿瘤部位、浸润深度、分化程度均存在明显差异(P<0.05),与临床TNM分期、性别、有无淋巴结转移和年龄均无明显差异(P>0.05);研究组HER-2过表达患者9例,阴性表达者中位生存时间明显长于过表达者(P<0.05)。结论:有无远处转移、Lauren分型、肿瘤部位、浸润深度、分化程度与HER-2是否表达均存在相关性,可对患者预后和生物学行为进行有效判断。对HER-2是否表达和预后探究具有较高临床价值,为临床治疗提供了有效理论依据,可根据患者病情制定合理治疗方案,进一步促进病情恢复。     

红色红曲菌组蛋白去乙酰化酶MrSir2的原核表达及活性分析

根据基因组序列信息,利用cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)得到了红色红曲菌中组蛋白去乙酰化酶mrsir2基因的完整cDNA序列,其编码序列(coding sequence,CDS)为1539 bp,编码512个氨基酸,含有一个SIR2蛋白保守结构域。根据大肠杆菌的密码子的偏好性对mrsir2序列进行优化,优化后的序列与p ET-28b载体连接后转入宿主菌E.coli BL21中进行IPTG诱导表达,并优化表达条件。实验结果表明:在16℃条件下用终浓度为0.25 mM的IPTG诱导培养16 h后,目的蛋白Mr Sir2可溶性表达效果良好。Ni2+柱亲和层析纯化后的Mr Sir2重组蛋白在SDS-PAGE上显示为一条约75 ku大小的条带,蛋白定量浓度达1.97 mg/mL,经Western blot鉴定为目的蛋白,测定酶活为78.5(OD/min/mg),780μM的二氢香豆素(dihydrocoumarin,DHC)对Mr Sir2蛋白的酶活抑制率为47%。Mr Sir2蛋白的可溶性表达为全面了解其酶学特征提供了材料,也为体外分析蛋白相互作用奠定了基础。     

宏基因组文库新型β-葡萄糖苷酶的筛选、克隆及酶学性质分析

利用宏基因组文库方法,通过功能筛选法从文库中筛选到一个新型β-葡萄糖苷酶基因bgl2238(Gen Bank:KU320675.1),对新基因进行生物信息学分析和原核表达,并研究其酶学性质。结果表明,该基因全长2 238 bp,可编码745个氨基酸,通过氨基酸序列分析,预测bgl2238蛋白分子质量为80.67 k Da,p I值为4.95,是一种结构较稳定、疏水性高且无信号肽序列的酸性蛋白质;经同源性分析,发现其与来源于Bacteroides thetaiotaomicron的β-葡萄糖苷酶具有58%的相似性,属于GH3超家族和GH3C超家族酶。将重组质粒p ET-32a(+)-bgl2238转化入Escherichia coli BL2l(DE3)细胞进行异源表达,酶学性质测定结果显示,以对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside,p NPG)为底物,β-葡萄糖苷酶bgl2238最适反应p H值和温度分别为6.10、44℃,此时该酶最大比活力达到29.1 U/mg;且在4~50℃范围内,热处理β-葡萄糖苷酶bgl2238 4 h后仍保留70%以上的酶活力,热稳定性较好;其动力学参数Vmax为576?μmo L/(L·min),Km为0.296 mmol/L;不同浓度的K+、Na~+、Fe~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)、Ca~(2+)、Co~(2+)和Ni~(2+)对酶活力均有较大促进作用,其中Fe~(2+)对bgl2238酶活力的促进作用最大,10 mmol/L Fe~(2+)使相对酶活力高达260%,而重金属离子Ag~+、Hg~(2+)及Cu~(2+)对酶活力有抑制作用。bgl2238具有良好的酶学性质,可以尝试应用于工业上纤维素降解的生产。