苯乳酸抑制链格孢霉作用靶位的分析

以从自然腐败的樱桃上分离的链格孢霉（Alternaria sp.）LD3.0086为指示菌，研究苯乳酸对链格孢霉的主要抑制作用靶位。应用分光光度法测定苯乳酸对链格孢霉的最小抑菌浓度，通过卡尔科弗卢尔荧光增白剂染液（calcofluor white，CFW）染色观察苯乳酸对菌丝顶端生长的破坏作用，利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察链格孢霉的超微结构变化，通过测定苯乳酸作用前后链格孢霉上清液中N-乙酰葡萄糖胺质量浓度变化研究苯乳酸对菌丝细胞壁的破坏作用，应用荧光双染色法观察苯乳酸对链格孢霉菌丝细胞膜的损伤作用。结果表明，12.5 mmol/L的苯乳酸能有效抑制链格孢霉的生长；与对照组（无菌水处理）相比，苯乳酸处理后链格孢霉顶端生长细胞无明显形变，经12.5 mmol/L苯乳酸处理的链格孢霉上清液中N-乙酰葡萄糖胺质量浓度基本不变；苯乳酸处理24 h，链格孢霉菌丝细胞壁表面无明显损伤，细胞内结构发生明显变化；苯乳酸短时间（4 h）处理链格孢霉，菌丝细胞膜仍较为完整，加入苯乳酸较长时间（8 h）后细胞膜发生破裂。综合分析可知，苯乳酸对链格孢霉的主要作用靶位应不是菌丝体的细胞壁和细胞膜，而是在菌丝体内部，通过破坏菌丝内部细胞器结构或引起细胞内的生化反应，从而抑制链格孢霉的生长和繁殖，发挥抑菌活性。     

健肝颗粒Ⅱ方联合恩替卡韦治疗乙肝e抗原阳性慢性乙型病毒性肝炎150例临床观察

目的观察健肝颗粒Ⅱ方联合恩替卡韦治疗乙肝e抗原(HBe Ag)阳性慢性乙型病毒性肝炎(CHB)的临床疗效。方法将300例HBe Ag阳性CHB患者随机分为对照组和治疗组,各150例。对照组给予恩替卡韦治疗,治疗组在对照组治疗方法的基础上给予健肝颗粒Ⅱ方。治疗52周后比较2组治疗前后患者外周血丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量、HBe Ag及乙肝e抗体(HBeAb)血清学转换情况。结果与对照组比较,治疗组HBe Ag转阴率及HBeAb转阳率均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与同组治疗前比较,2组外周血ALT及血清HBV-DNA载量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01),且治疗组外周血ALT降低幅度明显大于对照组(P<0.05)。对照组ALT复常率为65.3%,治疗组为78.0%,2组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组血清HBV-DNA载量低于检测限比率为62.7%,治疗组为74.7%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论健肝颗粒Ⅱ方联合恩替卡韦治疗HBe Ag阳性CHB疗效显著,可升高患者的HBe Ag转阴率、HBeAb转阳率、ALT复常率及血清HBV-DNA载量低于检测限比率,其疗效优于单用恩替卡韦。     

珍贵橙色束丝放线菌发酵产安丝菌素P-3的分离纯化工艺优化

安丝菌素是从珍贵橙色束丝放线菌的发酵液中分离出来的苯安莎类抗生素，具有显著的抗肿瘤活性。常采用乙酸乙酯对发酵液进行分离萃取，然而其发酵液成分复杂，除菌丝体外还含有许多杂蛋白质及易溶于有机溶剂的色素，这对后续提取和精制有很大的影响，影响产品质量和回收率。本文通过对AP-3发酵液进行预处理，将AP-3发酵液调整pH至3后，用10g/L硅藻土辅助抽滤；收集滤液，添加20g/L活性炭于60℃吸附2h，然后用洗脱液乙酸乙酯对活性炭进行脱附处理，2h后达到动态洗脱平衡，对洗脱液采用中性氧化铝柱层析，以乙酸乙酯和石油醚作为洗脱剂进行梯度洗脱，最终获得AP-3纯度86.15%，经重结晶后得到AP-3纯品，经过HPLC检测AP-3纯度达95%。     

水蜡叶斑病病原菌鉴定及对药剂的敏感性

[目的]为明确水蜡叶斑病致病菌,为其防治提供依据。[方法]采用柯赫氏法则、形态学测定、r DNA-ITS序列比对鉴定,研究了致病菌的分类地位;测定了病菌对不同杀菌剂的敏感性。[结果]水蜡叶斑病致病菌是极细链格孢菌(Alternaria tenuissima),测定了病菌对12种杀菌剂的敏感性。结果表明:10%苯醚甲环唑WP、30%氟菌唑WP、125g/L氟环唑SC对菌丝的敏感性较高,EC_(50)值分别为14.36、37.91、29.86 mg/L;对孢子的敏感性较高,EC_(50)值分别为125.81、245.73、207.03 mg/L。[结论]明确了水蜡叶斑病致病菌种类,筛选的3种杀菌剂可有效抑制病害的发生。     

庆大霉素生物合成基因genB4的研究

以庆大霉素生物合成基因簇为模版,构建了genB4基因阻断质粒pGB403.经接合转移导入绛红色小单孢菌G1008,得到一株genB4基因缺失工程菌GB4408.对菌株GB4408的发酵产物进行了TLC、HPLC和MS分析,结果表明GB4408不再合成庆大霉素C族组分,而是积累中间代谢产物G418、西索霉素和威大霉素,阻断了从西索霉素到庆大霉素C1a的转化以及从威大霉素到庆大霉素C2的转化,这可能是genB4基因参与了庆大霉素绛红糖胺C4′和C5′的双脱氢作用.据此推论,在菌株GbK(△genK)基础上敲除了genB4基因,并成功获得一株主产西索霉素的工程菌GbKB4,进一步验证了genB4的功能.     

桔子囊孢罐头关键生产工艺优化

本文阐述了桔子囊孢罐头关键生产工艺及质量要求,对桔子囊孢关键生产工艺质量问题进行分析,提出桔子囊孢罐头关键生产工艺优化方案。     

双对苯醌的抗氧化活性分析及其固体发酵条件优化

为探索生物活性未知的双对苯醌（2,7-dihydroxy-3,6,9-trimethyl-9H-xanthene-1,4,5,8-tetraone，DTXT）的抗氧化活性，并提高其发酵产量，考察DTXT的还原力以及对超氧阴离子自由基、羟自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基的清除效果，在单因素试验基础上，采用响应面法优化了DTXT产生菌瓶生顶孢霉（Acremonium cavaraeanum）CA022菌株的固体发酵培养基。结果表明：在200 μg/mL质量浓度下，DTXT的还原力与芦丁差异不显著，高于VE和2,6-二叔丁基-4甲基苯酚，对超氧阴离子自由基清除率达到67.00%，对羟自由基清除率达到78.83%，对DPPH自由基清除率达到76.53%。通过响应面试验，得到最佳培养基配方为葡萄糖0.773%、硝酸钠0.185%、H3BO3 0.032%、VB1 100 μg/100 g，在此条件下实际获得的DTXT产量为4 150.8 mg/kg，是优化前产量的（2 864.83 mg/kg）1.45 倍。     

光诱导作用对木霉菌产孢量的影响研究

通过固体发酵和液体发酵,对比研究了光诱导作用对8株木霉菌菌株产孢量的影响。结果表明,在固体发酵条件下,50～200 Lux蓝光照射能显著提高菌株Tr673、TL02、Tr25、Tr775的产孢量(P≤0.01);菌株Tr673、TL02、Tr25、Tr775在避光处理36 h后再进行蓝光照射的产孢量较持续光照显著降低(P≤0.01)。在液体发酵条件下,菌株Tr673、TL02、Tr25、Tr775在100～200 Lux白光或蓝光照射下的产孢量较避光处理提高数倍(P≤0.01),较其它光源照射提高2～8倍;100～200 Lux蓝光照射能显著提高Tr673、TL02、Tr775的产孢量(P≤0.01),但对Tr25的产孢量提高不明显。     

抗肿瘤药物恩曲替尼的合成工艺优化

改进了抗肿瘤药物恩曲替尼的合成工艺。以4-氟-2-硝基苯甲酸为起始原料,经酯化反应、亲核取代、还原、亲核加成、三氟乙酰基保护、水解后得到4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-[2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基]苯甲酸。2-氟-5-溴苯腈和硼酸三甲酯发生亲核取代,再与3,5-二氟苄溴发生Suzuki偶联反应,经成环后得5-(3,5-二氟苄基)-1H-吲唑-3-胺。4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-[2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基]苯甲酸与5-(3,5-二氟苄基)-1H-吲唑-3-胺发生缩合反应,再经脱三氟乙酰基得到目标化合物,纯度99.12%,总产率26.0%(以4-氟-2-硝基苯甲酸计)。相比于文献路线,合成工艺缩短了酰胺的合成步骤,进行了原工艺中价格昂贵的原料(3-氰基-4-氟苯基)硼酸的合成,节约了成本,优化了多步反应的条件及后处理方法。改进后的合成路线具有原料易得、操作简便、产率高的特点,更适合工业化生产。