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内质网(ER)腔内的甘露糖基化修饰共同存在于N-糖基化、糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定化、O-和C-甘露糖基化中,对于真核生物来说具有重要的作用。ER腔内的甘露糖基化的底物供体为多萜醇磷酸甘露糖(Dol-P-Man),因此Dol-P-Man的合成对于理解不同种类的糖基化修饰具有重要的意义。本研究原核表达纯化了酵母Dol-P-Man的合成酶(Dpm1),并鉴定了重要的DXD motif。利用纯化的Dpm1蛋白,及简单的植烷醇(Phytanol)代替复杂的多萜醇(Dolichol),体外酶法合成了Dol-P-Man的替代结构Phy-P-Man。在N-糖基化途径中Alg3催化Dol-PPGlcNAc2-Man5和Dol-P-Man生成Dol-PP-GlcNAc2-Man6。通过体外酶反应,本研究证明PhyP-Man同样能够作为Alg3的底物供体用于N-糖基化途径的研究,为以后合成高甘露糖型的N糖结构及GPI、O-和C-甘露糖基化的研究奠定了基础。 相似文献
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