超快速液相色谱法测定大鼠肝细胞中腺苷酸含量

目的建立大鼠肝细胞中3种腺苷酸[三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)]的超快速液相色谱测定法。方法制备3种腺苷酸混合标准工作液,同时将BRL大鼠肝细胞样品经超声波破碎仪处理提取目标化合物。液相色谱条件:色谱柱为Poroshell 120 SB-AQ C18(100 mm×3. 0 mm,2. 7μm),流动相为20 mmol/L磷酸氢二钠+20 mmol/L磷酸二氢钠缓冲溶液,流速为0. 20 mL/min,柱箱温度为30℃,二极管阵列检测器光谱扫描范围为190～800 nm,定量波长为259 nm,进样量为5μL。同时对方法的线性范围、稳定性、重复性及准确性进行验证。结果色谱柱对标准品和待检样品的3种腺苷酸组分分离状况良好,样品目标峰位无杂峰干扰,色谱分离在15 min内完成。各目标组分在10～100μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,检测限在0. 652～0. 793μg/mL之间;样品提取液于不同时间点进样所得ATP、ADP和AMP的峰面积RSD分别为2. 06%、1. 15%和1. 26%;6份平行样品在同一检测流程下所得的ATP、ADP和AMP峰面积的RSD分别为2. 13%、2. 04%和1. 89%;样品各组分平均回收率在97. 05%～102. 58%之间,RSD在2. 16%～2. 55%之间。结论建立了大鼠肝细胞中3种腺苷酸含量的超快速液相色谱测定法,且具有良好的线性、稳定性、重复性及准确性。     

沙棘熊果酸对H22荷瘤小鼠抑瘤活性及其机制的探讨

建立小鼠H_(22)移植瘤模型,观察沙棘(Hippophae rhamnoides L.)熊果酸(ursolic acid,UA)对小鼠H_(22)移植瘤的抑制作用并探讨其可能的作用机制。根据公式计算抑瘤率及脏器指数;苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察各组小鼠肿瘤组织病理学变化;酶联免疫吸附法检测荷瘤小鼠血浆中白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;免疫组化法测定肿瘤组织中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达;免疫印迹法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及Ras蛋白表达量。结果表明,沙棘熊果酸能明显改善H_(22)荷瘤小鼠的一般状况;抑制移植瘤的生长,抑瘤率分别为17.46%、35.11%、55.22%;与模型组相比,沙棘熊果酸能明显升高TNF-α、IL-12的水平(P0.05),降低MMP-2的阳性表达,下调VEGF、Ras蛋白过表达,且呈现剂量效应关系。其机制可能与其提高血中IL-12等抗肿瘤活性细胞因子的浓度诱导细胞免疫,提高机体免疫力,抑制肝癌细胞外基质降解以及新生血管形成有关。     

基于小波变换的分数阶微分算法在肝脏肿瘤CT图像纹理增强中的应用

图像纹理增强过程中容易丢失平滑区域纹理细节，而分数阶微分增强虽然能够非线性保留平滑区域纹理细节，但对频率分辨率敏感。针对这个问题，提出一种基于小波变换的分数阶微分纹理增强算法，应用于平扫计算机断层扫描（CT）图像的肝脏肿瘤区域的纹理增强。首先，通过小波变换将图像感兴趣区分解成多个子带分量；其次，基于分数阶微分定义构造一个带补偿参数的分数阶微分掩膜；最后，使用该掩膜与每个高频子带分量进行卷积并利用小波逆变换重组图像感兴趣区。实验结果表明，该方法在使用较大分数阶次显著增强肿瘤区域的高频轮廓信息的同时，有效地保留了低频平滑的纹理细节：增强后的肝细胞癌区域与原区域相比，信息熵平均增加36.56%，平均梯度平均增加321.56%，平均绝对差值平均为9.287；增强后的肝血管瘤区域与原区域相比，信息熵平均增加48.77%，平均梯度平均增加511.26%，平均绝对差值平均为14.097。     

血小板源性生长因子/蛋白激酶B通路在压力超负荷诱导的心室重构中的作用及机制研究

目的:分析血小板源性生长因子（PDGF）/蛋白激酶B（AKT）通路在压力超负荷诱导的心室重构中的作用及机制。方法:选取C57BL/6雌性小鼠55只，建立主动脉弓缩窄模型，成功建模45只，小鼠随机数字表法分为假手术组、DMSO组和实验组，假手术组小鼠开胸后逐层缝合，不进行主动脉缩窄术（TAC），开胸24 h后给予PBS溶液200 μL加DMSO 50 μL，DMSO组TAC术后24 h给予PBS溶液200 μL加DMSO 50 μL，实验组TAC术后24 h给予PBS溶液200 μL加抑制剂AG1296 50 μL，观察小鼠心功能及心肌组织病理形态。慢病毒感染建立PDGF基因不同表达人脐静脉内皮细胞（HUVEC）细胞鉴定和培养，依据细胞不同处理方式分为对照组、PDGF组、shRNA组和PDGF+IMA组，检测p-AKT及t-AKT蛋白在HUVEC细胞内表达情况。结果:DMSO组小鼠左室收缩末期容积（LVESV）、左室舒张末期容积（LVEDV）、左室收缩末期内径（LVESD）及左室舒张末期内径（LVEDD）较假手术组升高，左室射血分数（EF）、左室短轴缩短率（FS）较假手术组降低。实验组LVESV、LVEDV、LVESD及LVEDD较DMSO组降低，EF、FS较DMSO组升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。假手术组小鼠心肌组织整齐排列，间隙正常；DMSO组小鼠形态不规整，炎性细胞浸润，细胞间隙变大，胞核深染。实验组小鼠膨大或坏死细胞减少，间隙变小，炎性浸润降低。DMSO组小鼠心肌细胞横截面积较假手术组升高，实验组小鼠心肌细胞横截面积较DMSO组降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。PDGF+IMA组细胞内p-AKT及t-AKT蛋白表达较PDGF组及shRNA组显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:PDGF可加速压力超负荷诱导心室重构，促进形成心肌组织纤维化，而抑制PDGF/AKT通路可改善心肌细胞肥大。     

长鳍金枪鱼多肽制备及其对H2O2诱导的张氏肝细胞的保护作用

目的:以长鳍金枪鱼废弃物为原料提取多肽,探究其对H2O2诱导的张氏肝细胞的保护作用。方法:以H2O2诱导张氏肝细胞损伤建立细胞模型组,以相对增殖率为指标筛选长鳍金枪鱼废弃物最适酶种,通过正交试验确定最佳酶解条件。酶解产物经超滤、阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱方法纯化分离得到多肽,用噻唑蓝(MTT)比色法对其每步分离效果进行评价。多肽活性的评价是利用试剂盒方法测定张氏肝细胞上清液中AST、ALT、MDA、ADH和SOD的含量,倒置显微镜观察细胞形态及流式细胞仪检测多肽对H2O2诱导后的张氏肝细胞凋亡的影响。结果:最适酶种为胰蛋白酶,最佳酶解条件为料液比1∶3(g/mL),pH 9,加酶量900 U/g,温度45℃,时间5 h。经一系列纯化后制成多肽,命名为长鳍金枪鱼多肽。其氨基酸序列为Gly-Ala-Pro-Gly-Glu-Arg-Gly-Ser-Lys-Cys-Phe-Lys。经长鳍金枪鱼多肽作用于H2O2诱导的张氏肝细胞后,ALT、AST、ADH和MDA含量下降,SOD含量上升。通过流式细胞仪检测发现晚期凋亡细胞相比于模型组减少明显。结论:利用酶解方法提取的长鳍金枪鱼多肽对H2O2损伤的张氏肝细胞具有一定的保护作用。     

人参多糖对氧化应激损伤肝细胞的保护作用机制研究

目的:以氧化应激损伤模型,通过对人参中物质基础的筛选,研究其对氧化应激造成的肝细胞损伤的保护作用及其可能的作用机制的初步探讨。方法:采用浓度为25 μmol/L的过氧化氢溶液建立肝细胞损伤模型,对人参中总蛋白、总多糖、总皂苷的保护作用进行筛选。在此基础上,采用流式细胞术检测其凋亡程度、线粒体膜电位的改变,活性氧的含量变化。并采用ELISA法测肝糖原,超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)及ATP酶等指标的变化情况。结果:经过氧化氢诱导后的肝细胞,细胞活力极显著降低(P<0.01),通过对比人参中活性成分,发现人参多糖的保护作用较强,且呈现浓度依赖性;与模型组比较,人参多糖高剂量组大鼠肝细胞中MDA含量非常显著降低(P<0.001);中、高剂量组大鼠肝细胞中SOD含量显著升高(P<0.05);低剂量组大鼠肝细胞中G6P含量显著升高(P<0.05),中、高剂量组中G6P含量极显著升高(P<0.01);中剂量组大鼠肝细胞中PEPCK的含量显著升高(P<0.05),高剂量组中PEPCK的含量极显著升高(P<0.01);低、中剂量组大鼠肝细胞中ATP酶含量极显著升高(P<0.01);中、高剂量组大鼠肝细胞中肝糖原含量显著升高(P<0.05)。结论:人参多糖通过提高肝细胞中ATP酶的活力,升高线粒体膜电位来恢复肝细胞线粒体的功能,通过恢复G6P与PEPCK的含量来恢复肝脏糖异生的功能,同时通过升高SOD,降低MDA来减弱氧化应激带来的损伤,为后续研究氧化应激造成肝损伤提供一定的基础。     

阿糖胞苷联合吡柔比星对白血病患者血清VEGF及bFGF因子水平的影响

目的:探讨阿糖胞苷联合吡柔比星对白血病患者血清血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平的影响。方法:选取2017年2月-2019年2月本院收治的白血病患者74例,随机分为两组,对照组进行阿糖胞苷联合柔红霉素治疗,研究组进行阿糖胞苷联合吡柔比星治疗。比较两组疗效、VEGF和bFGF水平、毒副反应、感染情况。结果:治疗2个疗程后,研究组有效率为91.9%,高于对照组的73.0%(P<0.05)。两组化疗前VEGF、bFGF水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两组化疗后VEGF、bFGF水平均有所下降,且研究组均低于对照组(P<0.05);研究组毒副反应发生率为10.8%,感染发生率为10.8%,均低于对照组的37.8%和32.4%(P<0.05)。结论:白血病治疗中,阿糖胞苷联合吡柔比星的疗效较佳,可改善血清VEGF及bFGF因子水平,应该在临床上多加推广与应用。     

虫白蜡治疗雄激素性脱发的作用机理研究

目的:前期研究发现虫白蜡能明显促进脂溢性脱发毛发的生长,但促进毛发生长的机理尚不清楚。方法:采用组织切片法、酶联免疫法测定给药14 d、21 d、28 d、45 d、60 d后单位面积内小鼠毛发重量、生长期和休止期毛囊数量比(A/T)和碱性磷酸酶含量(ALP);采用酶联免疫法测定给药28 d后小鼠皮肤内血管内皮生长因子和表皮生长因子的表达量。结果:试验第28天, A/T比值和ALP含量明显高于其他测试时间;且10%虫白蜡组小鼠皮肤内VEGF、EGF和A/T比值的表达量明显高于模式组。结论:虫白蜡对毛囊生长周期没有调节,但其能促进毛囊营养的供应。     

高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱法测定食品中多形态硒含量

目的 探究急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入术(PCI)后血清成纤维细胞生长因子21(FGF-21)、髓过氧化物酶(MPO)水平与预后的关系。方法 选择2016年1月至2018年12月在我院接受PCI术治疗的108例AMI患者作为研究对象。根据随访过程中是否发生主要不良心血管事件(MACE),病人分为预后不良组(25例)和预后良好组(83例)。采用酶联免疫吸附法检测受试者血清FGF-21水平,采用胶体金免疫层析法检测受试者血清MPO水平。分析FGF-21、MPO与AMI患者PCI术后MACE发生的关系及诊断MACE发生的效能。结果 预后不良组血清FGF-21、MPO水平均高于预后良好组,差异均有统计学意义(P＜0.05)。FGF-21＋MPO诊断AMI患者PCI术后MACE发生的ROC曲线下面积(AUC)为0.860,高于FGF-21、MPO单独诊断AMI患者PCI术后MACE发生的AUC。FGF-21＞140.41 ng/L和FGF-21≤140.41 ng/L的患者,MACE发生率分别为39.58%和10.00%,差异有统计学意义(P＜0.001)。MPO＞419.42 μg/L和MPO≤419.42 μg/L的患者,MACE发生率分别为35.00%和8.33%,差异有统计学意义(P＝0.001)。Cox单因素及Cox多因素分析显示FGF-21、MPO与AMI患者PCI术后MACE发生密切相关(均P＜0.05)。结论 AMI患者PCI术后血清FGF-21、MPO水平与预后有关。高水平的FGF-21、MPO与MACE发生密切相关。     

明胶海绵微粒- TACE治疗15例大肝癌术后外周血Treg细胞的变化及意义

【摘要】 目的 初步探讨应用明胶海绵微粒（GSMs）行TACE治疗大肝癌术后外周血中调节性T淋巴细胞（Treg）变化及意义。方法 应用流式细胞技术检测健康组和大肝癌患者GSMs- TACE术前与术后第10天、第22天外周血Treg细胞的含量。结果 选择健康人7名，符合入组标准的肝癌患者共计15例。外周血中Treg细胞含量:健康对照组为（8.64±1.94）%；肝癌患者术前为（11.52±3.78）%，术后第10天为（9.07±1.94）%，与术前相比显著下降（P=0.039），术后第22天为（9.96±1.48）%，与术前比较差异有统计学意义（P=0.028）。结论 GSMs- TACE治疗大肝癌能够显著降低外周血Treg细胞的含量，表明该方法对机体免疫功能有正向调节作用。