玛丽鱼染色体核型及Ag-NORs研究

为获得玛丽鱼Poecilia latipinna细胞遗传学数据,以玛丽鱼的鳃丝和鳍条为试验材料,采用秋水仙素浸泡、低渗处理和热滴片法制备染色体标本,分析其染色体的核型和银染(Ag-NORs)。结果表明:玛丽鱼具有23对染色体,核型2n=46t,NF=46;Ag-NORs出现在t2和t9的染色体末端,其数目具有多态性,未发现性染色体。本研究结果可为研究玛丽鱼的遗传方式提供基础资料。     

检测脑膜炎球菌菌苗中内毒素方法的研究

作者应用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染(SDS—PAGE银染)和2—酮基—3—脱氧辛糖(KDO)方法来测定脑膜炎球菌外膜蛋白和多糖菌苗中的脂多糖(LPS)。这二种方法能比较真实地测定出存在于蛋白或多糖制品中的LPS实际含量。其结果和家兔热原质试验一致。KDO法并能定量测定蛋白样品中的LPS含量。     

仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系的优化

[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系.[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点.并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系.[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为:聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1 000 V下电泳2～3 h,0.1% AgNO3 染色15 min 后显影.[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定了技术基础.     

基于核酸适配子的高灵敏的ATP检测研究

目的：根据ATP核酸适配子与ATP结合的能力强于其互补核酸的原理，构建基于核酸适配子的高灵敏的ATP检测方法。方法：以ATP核酸适配子作为识别分子，对检测的捕获探针固定浓度、杂交时间、ATP反应时间、银染增强时间等进行优化，在优化的反应条件下，对其敏感性、特异性进行评价。结果：在优化的反应条件下，通过对不同浓度的ATP样本进行检测，发现ATP浓度在10-14M至10-9M 范围内时， ATP浓度的对数与灰度值的相对强度呈线性关系，相关系数为0．996。并且，在优化的反应条件下，该方法对ATP的检测具有较高的特异性。结论：所构建的基于核酸适配子的ATP检测方法具有灵敏度高、特异性高的优点，可为其他生物分子的检测提供新的思路。     

草菇木聚糖酶SDS-PAGE后的复性及活性染色

草菇木聚糖酶经SDS-PAGE后在胶中能够原位复性。通过银染和刚果红活性染色比较．可确定该酶在胶中的位置．草菇木聚糖酶是单亚基蛋白，相对分子质量为24500．     

食源性致病菌的核酸可视微阵列检测技术

建立了一种快速检测3种食源性致病菌的核酸可视微阵列。分别设计与沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、志贺氏菌ipaH基因两端互补的基片探针和检测探针,设计3种基因的特异靶序列,特异靶序列或基因组DNA一端与固定在玻片上的氨基化基片探针杂交,另一端与巯基化检测探针连接形成复合体。使胶体金与检测探针结合,通过银染放大信号,检测3种食源性致病菌DNA。结果表明：通过对检测探针分别与基因组DNA、PCR产物及特异靶序列的杂交银染结果比较,3种结果都显示阳性,表明该方法可直接利用基因组DNA实现对食源性微生物的快速、高效检测,对3种食源性致病菌DNA的检测下限为1 pmol/L,在1 mmol/L ~1 pmol/L浓度范围内得到肉眼可见的清晰结果。探针与基因组DNA的杂交实验结果表明,微阵列对3种食源性微生物的检测具有较好的特异性。说明该技术可快速、简便检测食源性微生物,市场前景广阔。     

12C6+重离子辐照对人肝细胞、肝癌细胞端粒酶活性表达的影响

为探索碳离子束辐照对细胞中端粒酶活性的变化,利用兰州近代物理研究所重离子研究装置(Heavy ionresearch facility in lanzhou,HIRFL)产生的碳离子(31MeV/μ12C6 ),以人肝细胞HL-7702,肝癌细胞SMMC-7721为实验对象,用不同剂量1Gy、2Gy、3Gy、4Gy的重离子分别对两种细胞进行照射,用多聚酶链式反应.银染端粒重复序列扩增法(PCR-telomeric repeat amplification protocol,TRAP-PCR)银染端粒重复序列扩增法检测不同剂量下细胞端粒酶活性的变化.结果显示,人肝细胞HL-7702自身没有端粒酶活性,经1Gy辐照后也没有端粒酶活性,在2和3Gy处出现端粒酶活性,4Gy处端粒酶活性又消失.肝癌细胞SMMC-7721在1～3Gy处随着剂量的增大端粒酶活性升高,在4Gy处又开始下降;在1～3Gy处随着时间的推移端粒酶活性随着时间而加强(p<0.05).分析得知,重离子辐射可以诱导人肝细胞产生端粒酶活性,也可以改变肝癌细胞的端粒酶活性.端粒酶参与细胞受辐照后DNA单链损伤的修复;辐照后DNA双链断裂导致端粒酶活性减弱.本实验使重离子在辐照治疗中的优势得以体现.     

平菇差异显示PCR产物特异条带的回收方法及再扩增效果

本实验采用一步法、直接法和沉淀法分别对平菇差异显示PCR银染产物中粗、细两种特异条带进行回收,并进行再扩增效果比较.结果表明,三种特异条带的回收方法中,直接法操作简单、快速可行,且再扩增效果优于一步法和沉淀法,可有效应用于平菇mRNA差异显示实验.     

纳米金标记-银染信号放大快速检测福氏志贺氏菌

采用纳米金标记结合银染信号放大技术建立了检测福氏志贺氏菌的新方法.优化了酶标板包被亲和素使用浓度以及分子杂交和化学发光检测实验条件.结果表明,化学发光法比吸光度法检测灵敏度高15倍,通过银染信号增强后,化学发光检测目标菌DNA的检测限达2fmol/L,相对化学发光强度与目标菌DNA浓度在5～1000 fmol/L范围内...     

采用AFLP分析齐口裂腹鱼DNA指纹的技术探讨

AFLP(选择性扩增片断长度多态性)指纹技术被认为是当今最有效的DNA指纹分析技术之一,但是由于该技术操作流程较长,对模板DNA质量要求较高以及PCR反应成分等变数条件的影响,要获得高清晰的DNA指纹图谱比较困难.文中以齐口裂腹鱼为研究对象,对AFLP的分析条件作了一定的探索.结果表明:基因组DNA必须是高纯度、高分子量;酶切充分;PCR反应最佳条件为:引物E-XYZ,M-XYZ在体系中的浓度分别为1 ng/mL,5ng/mL;dNTPs浓度为0.2mmol/L;MgCl2浓度为1.9mmol/L.银染时在NaOH条件下显色比在传统银染法中的Na2CO3条件下显色,图谱背景更干净,条带更清晰.