一株产羧酸酯酶菌的鉴定及酯酶特征的研究

目的:鉴定中国白酒发酵过程中的微生物种类，研究关键酶的特征与作用机制有利于提高白酒的优质品率。方法:本研究用形态学和生理学、16S rRNA、gyr B基因和antiSMASH分析的方法对酒曲中的一株微生物进行了验证；对该菌株的特性进行了研究，采用分子建模的方法获得了羧酸酯酶的3D模型，用分子对接的方法探讨了该菌株的羧酸酯酶的机理。结果:该菌株为产羧酸酯酶的革兰氏阴性菌Pb1（MW580690）；该菌株呈现典型的S型生长曲线，产物曲线为S型，羧酸酯酶活化最优pH范围为5.0~9.0。分子对接结果显示Phe21A为该酶具有催化活性的主要氨基酸，水解三丁酸甘油酯为丁酸和甘油。分子对接结果显示三丁酸甘油酯经过构象变化被转移到催化中心后，进一步被加工；酶的亲水性和疏水性的相互作用表面有利于配体向下转移，进而从疏水性通道释放产物到的酶表面。结论:产羧酸酯酶的菌株为贝莱斯芽胞杆菌，并为羧酸酯酶水解三丁酸甘油酯类物质的底物识别、转移和催化机理提供了新的见解。     

基于乙酰胆碱酯酶和氧化应激研究海胆酮对阿尔茨海默症的作用机制

海胆酮是一种酮式类胡萝卜素，主要从海胆及藻类等海洋生物中提取。本文研究海胆酮对乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）的抑制作用，应用酶动力学、荧光光谱、圆二色光谱和分子对接技术研究海胆酮对AChE的抑制机理，并用淀粉样β蛋白片段25～35（amyloid beta-peptide 25-35，Aβ25-35）诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）建立阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease，AD）模型，研究海胆酮对AD细胞模型氧化应激损伤的作用。结果表明，海胆酮有很强的AChE抑制活性，其半抑制质量浓度为（16.29±0.97）μg/mL，抑制常数Ki为3.82 μg/mL，表现为竞争性抑制；海胆酮可诱导AChE二级结构改变，更容易与AChE活性中心氨基酸Ser200、His440、Trp84和Tyr121结合，阻碍底物碘代硫代乙酰胆碱（acetylthiocholine iodide，ATCI）与酶结合，从而引起酶活力降低。海胆酮能有效抑制Aβ25-35诱导PC12细胞的AChE活力，降低丙二醛含量，增加超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力，减轻Aβ25-35诱导的PC12细胞氧化应激损伤。本研究基于AChE和氧化应激阐明了海胆酮对AD的潜在作用机制，为海胆酮在功能食品、生物医药等领域的应用提供了数据支持和理论根据。     

阿魏酸对粪肠球菌和屎肠球菌产酪胺机制的影响

研究阿魏酸对高产酪胺的粪肠球菌XL-M66和屎肠球菌XL-M76生长、基因表达以及产酪胺的影响。利用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应技术分析2株菌在阿魏酸作用下的酪氨酸脱羧途径相关基因表达情况,并使用高效液相色谱法检测2株肠球菌培养48 h期间酪胺积累量。结果表明:未添加酪氨酸底物时,阿魏酸对酪氨酸脱羧酶(tyrosine decarboxylase,tyrDC)和酪氨酸/酪胺透性酶(tyrosine/tyramine permease,tyrP)基因的转录影响不大(P0.05),但能促进酪氨酰-tRNA合成酶(tyrosyl-tRNA synthetase,tyrS)基因的转录(P0.05)。反之存在酪氨酸时,阿魏酸对tyrS基因表达的影响不大(P0.05),却能显著抑制tyrDC和tyrP基因的表达(P0.05)。同时,阿魏酸能显著抑制粪肠球菌XL-M66和屎肠球菌XL-M76的生长(P0.05),最终使得酪胺产量分别降低27.0%和19.9%。     

多靶点抗Alzheimer病活性他克林-阿魏酸 缀合物的合成与活性研究

针对Alzheimer病多病因发病的特点,设计并合成了两种同时具有抗乙酰胆碱酯酶、抗Aβ_((1-42))蛋白氧化以及络合金属离子3种活性的抗Alzheimer病活性缀合物,其结构通过~1HNMR和MS确证。该化合物包含他克林、阿魏酸和氨基酸的结构,氨基酸连接在阿魏酸的羧基上以利于分子通过血脑屏障。活性测试表明,两种化合物都具有较好的乙酰胆碱酯酶抑制活性和Aβ_((1-42))自聚集抑制活性。     

阿魏酸酯酶对晒青毛茶发酵过程的影响

以晒青毛茶为原料,研究阿魏酸酯酶对晒青毛茶发酵过程中活性物质的影响。利用高效液相色谱法以及分光光度计法测定茶叶中各种活性物质含量的变化。实验结果表明,发酵8 d后茶叶的水浸出物、还原糖、阿魏酸及低聚木糖均比晒青毛茶高,茶汤的p H值及游离氨基酸含量下降。在晒青毛茶中同时添加3 m L(75 U/m L)阿魏酸酯酶和3 m L(75 U/m L)木聚糖酶,在发酵第8天阿魏酸及低聚木糖分别可达838. 9μg/g及3. 78μg/g,比不添加任何酶的茶样分别高20. 9%及38. 6%。在晒青毛茶发酵过程中,同时添加阿魏酸酯酶与木聚糖酶有利于提高茶叶的品质,从而提升茶叶的附加值。该研究结果对发酵型茶的保健功效提供一定的理论依据。     

加压毛细管电色谱测定甘蔗中三种多酚类化合物

为建立加压毛细管电色谱(pCEC)分离检测甘蔗中多酚类化合物绿原酸、阿魏酸、表儿茶素的方法,采用C₁₈毛细管色谱柱,以NaH₂PO₄和甲醇为流动相,优化了流动相比例、缓冲盐pH、缓冲盐浓度、分离电压、流速等色谱条件。结果表明,在流动相为15.0 mmol/L NaH₂PO₄+12.5 mmol/L庚烷磺酸钠(pH5.0)/甲醇(50:50,V/V)、分离电压为1 kV、流动相总流速为0.06 mL/min、检测波长为220 nm的色谱条件下,绿原酸、阿魏酸、表儿茶素分离较好,在20~320 μg/mL线性关系良好,相关系数分别为0.9978、0.9922、0.9971,检出限分别为0.14、0.75、1.65 μg/mL,相对标准偏差分别为2.82%、2.69%、1.18%,平均回收率分别为96.79%、100.71%、99.01%。该方法快速、准确、重复性好,适用于甘蔗中多酚类化合物的分离检测。     

二甲双胍对乙酰胆碱酯酶活性影响的研究

利用试剂盒法探究不同浓度二甲双胍对乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响。以人的血清作为酶源,氯化乙酰硫代胆碱为底物,建立体外筛选模型,计算酶的相对活性(B/B0%)和绘制Lineweaver-Burk (L-B)双倒数图。在浓度为0.003～0.122μmol/mL的盐酸二甲双胍作用下,测得酶的相对活性(B/B0%)在100%以上,随着二甲双胍浓度的增大,酶活力均逐渐增加。在盐酸二甲双胍良好的浓度线性范围内(0.003～0.122μmol/mL)对乙酰胆碱酯酶活性呈现激活作用,其激活机理表现为混合性效应。本项目的研究可以为今后采用二甲双胍治疗与乙酰胆碱酯酶活性相关疾病方面的研究提供理论依据。     

阿魏酸及其烷基酯在水包油乳液中抗氧化效率的假相模型解释

阿魏酸(FA)分别与乙醇、正丁醇、正辛醇和正十二醇进行直接酯化得到了4种FA烷基酯。用DPPH(1,1-二苯基-2-苦肼基自由基)法和史卡尔(Schaal)烘箱试验法分别测定了FA及其烷基酯在均相甲醇溶液和油水体积比为28的水包菜籽油乳液中的抗氧化效率。结果发现:FA在甲醇溶液中的抗氧化效率最高,其DPPH自由基清除能力为0.967mmol Trolox/mol。FA辛酯在乳液中的抗氧化效率最高,在乳化剂体积分数为1.0%下,添加了FA辛酯的乳液的共轭二烯值达到1所用的时间和p-茴香胺值达到6所用的时间分别为51,40d。用假相动力学模型测定了FA及其烷基酯在乳液界面的质量分数,结果表明,FA辛酯在乳液中的抗氧化效率最高是由于其在乳液界面的质量分数最高的缘故。     

玛咖提取物对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍模型学习能力的影响

目的:观察玛咖提取物对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍模型的影响。方法:100只昆明种小鼠随机平均分为空白对照组,模型组,吡拉西坦片组,玛咖高剂量组(1.17 g·kg-1)、低剂量组(0.585 g·kg-1),每天灌胃1次,连续灌胃20 d,空白对照组和模型组给予同体积的蒸馏水。各组以跳台法和电迷宫测试小鼠学习记忆的能力,用比色法测定小鼠脑组织胆碱乙酰转移酶(choline acetyl transferase,Ch AT)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholin esterase,Ach E)活性,用碱性羟胺法测定乙酰胆碱(acetyl choline,Ach)含量。结果:玛咖提取物可减少小鼠跳台错误次数,提高电迷宫小鼠空间辨别正确次数,并能增加小鼠脑组织Ach含量和Ch AT活性,同时降低脑组织Ach E活性,有助于氢溴酸东莨菪碱所致小鼠空间学习记忆能力的改善。结论:玛咖提取物可以显著提高小鼠学习能力。