泾阳茯茶中冠突散囊菌的鉴定及降脂作用研究

目的 探究陕西泾阳茯砖茶中冠突散囊菌的鉴定标志, 鉴定泾阳茯茶中的冠突散囊菌, 并研究其降脂作用。方法 从泾阳茯茶中分离筛选真菌, 观察其在3种不同培养基的生长特征, 结合形态学观察和真菌内源转录间隔区(internally transcribed spacer, ITS)基因序列同源性比对; 人工接种菌种至不同产区茶类中, 对接种至茶叶中菌种的形态学、扫描电镜(scan electron microscope, SEM)鉴定和接种后茶叶进行感官审评; 最后建立小鼠肥胖模型, 探讨回接冠突散囊菌后黑茶水浸提物对肥胖模型鼠的作用。结果 筛选分离得到的菌株(JY1)为冠突散囊菌(Eurotium cristatum, E.C.); 该菌在几种试验茶类均可以良好“发花”; 除红茶外, 其余茶样闭囊壳较饱满且子囊孢子的“赤道”周围存在较多小孔, 而红茶表现出以分生孢子为主; 接种后的散茶, 在香气, 汤色和滋味上均有不同程度变化; 与肥胖模型组相比较, 发花茶能显著抑制鼠体质量增长和Lee`s指数, 使血清总胆固醇(total cholesterol, TC)下降, 皮下脂肪细胞直径明显变小。结论 陕西泾阳茯茶中冠突散囊菌“赤道”周围存在较多小孔的电镜结果有可能作为陕西茯茶的特异性鉴定标志, 该菌可在黑茶, 红茶, 白茶, 绿茶上优势生长, 不同程度改变接种后的茶叶香气、汤色、滋味。回接冠突散囊菌后黑茶可降低血清总胆固醇水平, 同时有抑制脂肪细胞体积增大的作用, 且作用有一定时效性。     

基于电子鼻、电子舌技术评价金花菌固态发酵对青刺尖茶感官品质的影响

本文通过接种不同量的1.0×107 CFU/mL金花菌孢子悬浊液对青刺尖茶进行固态发酵，采用电子鼻、电子舌和色度检测技术，结合人工感官评审，综合评价金花菌发酵对青刺尖茶品质的影响，利用HPLC指纹图谱法分析青刺尖茶发酵前后的成分差异。电子鼻、电子舌分析结果显示，金花菌发酵青刺尖茶前、后的干茶和茶汤的主成分得分区域具有明显的差异，接种量为1.0 mL、1.2 mL和1.4 mL的发酵茶与未发酵茶，香气和滋味差异最明显。接种量1.0 mL的青刺尖发酵茶，其色度检测结果为明亮度值70.32、红绿色度值8.99、黄蓝色度值76.00、色相值8.45、色差值78.00，人工感官评审得分91.75，均与市售优质伏砖茶最接近。HPLC分析结果显示，青刺尖茶经金花菌发酵后，其化学成分明显增多，表明金花菌发酵能够有效改变青刺尖茶中的化学成分。     

冠突散囊菌与木霉混合发酵液醇提物对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节的影响

为进一步开发冠突散囊菌的药理活性,该研究将冠突散囊菌与木霉共同发酵,通过不同体积分数的乙醇对混合发酵液化学活性部位进行追踪,并结合液质联用（LC-MS）技术对活性部位化合物组成进行分析,通过四氮甲基唑蓝（MTT）比色法、中性红吞噬实验及酶联免疫吸附测定方法分别研究冠突散囊菌与木霉混合发酵液活性部位对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖、吞噬以及分泌细胞因子的能力的影响。结果表明,冠突散囊菌与木霉混合发酵液体积分数70%乙醇提取部位有较好的免疫活性,该部位含有大黄素、芥子碱等生物活性成分。与阳性对照组脂多糖相比,500 μg/mL冠突散囊菌与木霉混合发酵液的体积分数70%乙醇提物能够使小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖率提高12%,增强小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红的能力,并能促进NO及细胞因子IL-6、TNF-α的分泌。     

冠突散囊菌发酵对茶汤香气成分的影响

为探讨冠突散囊菌(Eurotium cristatum)发酵对茶叶提取液香气成分的影响,利用冠突散囊菌对中低档绿茶和红茶提取液进行发酵,采用顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱法分别检测审评用样品以及提取、灭菌和发酵后样品的香气成分,分析香气成分的变化规律。结果表明,绿茶与红茶提取液经冠突散囊菌发酵新产生苯甲酸甲酯、异佛尔酮、对甲氧基苯乙烯、对乙基苯甲醛、香叶酸甲酯、3,4-二甲基苯甲酸甲酯6种化合物。同时,绿茶茶汤经冠突散囊菌发酵后,芳樟醇、芳樟醇氧化物I、芳樟醇氧化物II、苯乙酸甲酯、α-松油醇、反-2-癸烯醛和α-紫罗酮分别增长了1.30、2.15、2.04、0.29、3.18、0.10倍和2.08倍,且香气种类与含量均上升。但红茶茶汤经冠突散囊菌发酵后大部分香气物质含量下降,其中苯乙醇、反-2-壬烯醛、2-苯基巴豆醛、顺柠檬醛、4-甲基-2-苯基-2-戊烯醛、月桂醛、肉豆蔻醛等未检出,表明冠突散囊菌发酵红茶会带来香气总量的损耗,与红茶相比,低档绿茶更适合使用冠突散囊菌开发发酵型饮料。     

冠突散囊菌接种发酵茯砖茶的初步研究

探讨了冠突散囊菌液体发酵培养条件,并将纯培养冠突散囊菌菌悬液接种于黑茶进行茯砖茶发酵,与市售茯砖茶茶叶浸出液接种于黑茶发酵茯砖茶进行对比试验。实验表明,冠突散囊菌的最佳培养基配方为：NaCl 32g、NH4NO33g、蔗糖20g、MgSO40.5g、K2HPO41g、水1000mL;最佳培养条件为：pH5.8、温度30℃、转速180r/min。试验分别采用冠突散囊菌纯菌液及市售茯砖茶茶叶浸出液分别接种发酵茯砖茶,接种量为5mL、10mL、15mL。发酵中、末期用血球计数板对2组茯砖茶中冠突散囊菌孢子进行计数。经检测,在发酵结束时,接种茶叶浸出液的孢子数只有2.94×104—7.28×104个/g干茶,而接冠突散囊菌菌液的孢子数可达0.313×107—1.71×107个/g干茶。结果表明,使用纯菌液接种发酵茯砖茶可明显提高＂金花＂产量,可为改良传统工艺提供科学依据。     

陕西茯砖茶中“金花”菌的生物学特性分析

从陕西茯砖茶中,对"金花"菌分离纯化并进行生物学特性分析,进而对其种名进行鉴定。从陕西茯砖茶中分离纯化得到一株"金花"菌,将其分别接种到马铃薯琼脂培养基、改良察氏培养基(含5%NaCl)、察氏琼脂培养基、改良察氏培养基(含14%NaCl)、20%蔗糖察氏琼脂培养基上进行菌落、菌体及其繁殖特征的观察,并通过DNA测序在分子水平上对菌株进行鉴定。通过以上对"金花"菌的菌落、菌丝体、繁殖特性,以及其ITS测序分析确定该菌为冠突散囊菌。陕西茯砖茶中"金花"菌的种名鉴定结果与其他产地"金花"菌的种名鉴定结果一致。     

冠突散囊菌发酵罗汉果渣过程中功能性成分及抗氧化活性的变化

采用冠突散囊菌固态发酵罗汉果渣,对罗汉果渣总皂苷、多酚、总黄酮及粗多糖的含量变化以及与其β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、α-淀粉酶及蛋白酶活性的相关性进行分析,同时研究其发酵过程中抗氧化活性的变化。结果表明,发酵过程中罗汉果渣总皂苷、多酚、总黄酮及多糖的含量都呈先增加后减少的趋势,分别在第6、8、6和6天达到最大值11.36、3.08、10.42和8.34 mg/g,,是未发酵组的1.42倍、2.37倍、2.53倍及1.90倍。β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、α-淀粉酶及蛋白酶活性分别在第8、6、8和8天达到最大值57.91、153.06、69.42和85.30 U/g,总皂苷、总黄酮和粗多糖含量的变化与纤维素酶活性和蛋白酶活性具有显著正相关性,多酚含量变化和β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、α-淀粉酶及蛋白酶活性具有显著正相关性。发酵过程中,罗汉果渣的抗氧化活性呈先增加后降低的趋势,其DPPH、ABTS自由基清除能力及总还原力分别在第8、8和6天达到最大,且与未发酵组相比具有显著性差异（P<0.05）。因此,冠突散囊菌发酵罗汉果渣能有效提升其功能性成分含量,增强其抗氧化活性,对罗汉果渣资源利用的绿色循环和可持续化具有重要意义。     

Fungal community associated with fermentation and storage of Fuzhuan brick-tea

Chinese Fuzhuan brick-tea is a unique microbial fermented tea characterized by a period of fungal growth during its manufacturing process. The aim of the present study was to characterize, both physicochemically and microbiologically, traditional industrial production processes of Fuzhuan brick-tea. Fermenting tea samples were collected from the largest manufacturer. Physicochemical analyses showed that the low water content in the tea substrates provided optimal growth conditions for xerophilic fungi. The fungal communities existing in tea materials, fermenting tea, and stored teas were monitored by polymerase chain reaction (PCR)-denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) targeting the D1 region of the 26S rRNA genes, followed by sequencing of the amplicons. Results revealed that the microorganisms were from, or closely related to, the genera Eurotium, Debaryomyces, Aspergillus, Verticillium, Pichia, Pestalotiopsis, Rhizomucor and Beauveria. This is the first report of Debaryomyces participating in the processing of Fuzhuan brick-tea. We concluded that the dominant genera Eurotium, Debaryomyces and Aspergillus are beneficial fungi associated with the fermentation of Fuzhuan brick-tea. The genus Beauveria was present in the stored Fuzhuan brick-tea, which may help protect tea products from insect spoilage. The remaining four genera were of minor importance in the manufacturing of Fuzhuan brick-tea. The predominant Eurotium species, a strain named Eurotium sp. FZ, was phenotypically and genotypically identified as Eurotium cristatum. High performance thin layer chromatography analysis of anthraquinones showed that emodin existed in all the dark tea samples, but physcion was only detectable in the tea fermented by E. cristatum. The PCR-DGGE approach was an effective and convenient means for profiling the fungal communities in Fuzhuan brick-tea. These results may help promote the use of microbial consortia as starter cultures to stabilize and improve the quality of Fuzhuan brick-tea products.     

冠突散囊菌的分离及其液态发酵特性

从茯砖茶中分离冠突散囊菌并研究其液态发酵特性。通过分析不同培养基组分对冠突散囊菌生长情况的影响,得出液态培养基最佳组成:蔗糖6%、黑茶浸提液0.8%。通过正交试验优化发酵条件,最优发酵条件为:初始-pH值为5.5,培养温度为30℃,孢子接种量为1.5%(孢子浓度5.0～6.0×10~8个/mL),摇瓶转数为120 r/min。在最佳培养基和最优发酵条件下摇瓶培养96 h,菌丝体干重可达0.3998 g/L。     

茯砖茶中冠突散囊菌的分离鉴定及其在液态发酵中的应用

研究冠突散囊菌生长特性及其在液态发酵中的应用。以湖南益阳手筑茯砖茶为研究对象,对其中的微生物进行分离纯化,特异性区段ITS序列进行扩增、测序,从而构建系统发育树,分析菌株的系统发育学地位。通过与GenBank数据库中的同源序列比对,其中有9株与数据库中的冠突散囊菌(Eurotium cristatum)的序列相似度在99%及以上。选取相似度为100%的菌株HNYYWX.13进行菌落形态、显微形态及电镜形态观察,并探究其生长曲线。接种冠突散囊菌的孢子悬浮液于平利山茶浸提液中进行液态发酵,对发酵过程中茶多酚总量及氨基酸总量做动态监测,以此评价添加碳源、灭菌处理对冠突散囊菌在液态发酵应用中的优劣。结果表明:添加碳源、不进行灭菌处理有利于冠突散囊菌在液态发酵中的应用。