应用液相色谱―串联质谱仪和四极杆―轨道阱高分辨质谱仪检测饲料中克伦普罗干扰的原因分析与确证技术研究

目的 探究液相色谱―串联质谱仪(liquid chromatography-tandem mass spectrometer, LC-MS/MS)检测饲料中克伦普罗时, 环天冬氨酰苯丙氨酸对试验干扰的原因, 在此基础上探究出应用LC-MS/MS分析的确证技术与方法。方法 应用四极杆―轨道阱高分辨质谱仪和LC-MS/MS对环天冬氨酰苯丙氨酸、克伦普罗对照品以及含有环天冬氨酰苯丙氨酸的饲料样品进行分析。结果 饲料中含有环天冬氨酰苯丙氨酸对克伦普罗的检测干扰的原因为二者母离子及2个子离子的质荷比很接近, 且二者离子丰度比也很接近。应用LC-MS/MS分析的确证技术与方法为梯度碎裂离子片段依次匹配比较法。结论 应用LC-MS/MS检测会遇到假阳性的问题, 这是串联质谱结构与方法原理决定的; 建议调整克伦普罗的2个子离子为263.07>168.04, 263.07>132.06; 用LC-MS的梯度碎裂离子片段依次匹配比较法准确、实用。     

猪尿冻干粉中盐酸克伦特罗标准物质的研制

研制一套4种浓度水平的猪尿冻干粉中盐酸克伦特罗标准物质,以健康安全的猪尿作为空白基体,利用添加的方法,经过均匀性和稳定性检验,由8家实验室采用液相色谱-串联质谱法对该套标准物质进行协同定值,并进行不确定度评估。结果表明该套标准物质均匀性良好,在4℃条件下保存稳定性在1年以上,标准物质中CLB的含量及不确定度分别为:0.65±0.15,1.28±0.44,3.78±0.46,11.5±1.8ng/mL(k=2)。该标准物质可应用于猪尿中盐酸克伦特罗检测过程的方法验证和检测结果质量控制等。     

Detection of clenbuterol in beef meat,liver and kidney by mid‐infrared spectroscopy (FT‐Mid IR) and multivariate analysis

Mid‐infrared spectroscopy (FT‐Mid IR) coupled with multivariate analysis was used to predict clenbuterol in beef meat, liver and kidney. A SIMCA model was also developed to discriminate between pure (beef meat, liver and kidney) and spiked with clenbuterol samples (beef meat‐clenbuterol, liver‐clenbuterol and kidney‐clenbuterol). The best models to predict clenbuterol concentrations were obtained using the partial least squares algorithm (PLS) with a R² > 0.9 and SEC and standard error of prediction <0.296 and 0.324, respectively. The SIMCA model used to discriminate pure and spiked with clenbuterol samples showed 100% correct classification rate. Methods detection limit was 2 μg kg^?1. FT‐Mid IR coupled with chemometrics could be a simple and rapid screening tool for monitoring clenbuterol in beef meat, liver and kidney implicated in food poisoning. This method could be use for screening purposes.     

肉制品中瘦肉精药物残留检测方法的简化研究

研究、探讨一种简化样品前处理过程的肉制品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇药物残留的检测方法。与国家标准GB/T 22286-2008《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》相比,该方法选取添加高浓度(70%~72%)高氯酸对酶解样品进行直接提取和沉淀蛋白,而后通过固相萃取净化,上机检验;省去了较为繁杂的调溶液pH,液液萃取等实验步骤,提高了整个过程的检验效率。通过对该方法检验结果的准确性、精密度、检出限的验证和评价,结果均符合国家标准对检验方法的要求。该方法可以尝试作为实验室肉制品中3种β2-受体激动药物残留的筛查,甚至检验的参考方法。     

猪肝中盐酸克伦特罗的快速检测研究

针对猪肉制品中"瘦肉精"超标问题,对随机抽取市售猪肝应用竞争性酶联免疫法进行了测定,采用醇提法及冷热处理工艺并对猪肝中瘦肉精的残留量的影响进行研究。结果表明,采用70%浓度的甲醇,热处理30min的熟肉制品瘦肉精残留少,去除瘦肉精更彻底。     

动物性食品中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留危害及其检测方法研究进展

介绍了盐酸克伦特罗 (瘦肉精 )的理化特性 ,分析了它在动物性食品中残留对人体和国民经济所造成的危害 ,同时又综述了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗 (瘦肉精 )的各种分析检测方法并作了展望     

抗克伦特罗单链抗体可溶性表达及特性鉴定

目的:表达抗克伦特罗(CBL)可溶性单链抗体(scFv)并进行抗原结合活性鉴定。方法:利用呈现scFv的重组噬菌体感染大肠杆菌HB2151,IPTG诱导可溶性scFv表达。渗透休克法提取菌体细胞周质腔中scFv。经SDS-PAGE、Western-Blotting以及间接ELISA法分析检测可溶性scFv的表达,并采用间接竞争ELISA法鉴定scFv的抗原结合活性。结果:细菌培养上清及周质腔中均有抗CBL可溶性scFv表达,其分子量约为29kD;上清液及周质腔中scFv效价分别为1:80,1:1600,能够被CBL竞争性抑制,IC50分别为0.78、0.95ng/ml。结论:可溶性抗CBLscFv在大肠杆菌HB2151中获得成功表达,表达的scFv与CBL具有很好的结合活性,可用于进一步建立CBL相应的免疫学检测方法。     

用2-甲基吲哚作偶合剂测定克仑特罗片

试验了用2-甲基吲哚测定克仑特罗片的新方法。克仑特罗在酸性溶液中被亚硝酸钠重氮化后,能与2-甲基吲哚偶合成黄色化合物,该化合物的最大吸收波长λmax389nm,摩尔吸光系数ε为2.36×104L.mol-1.cm-1,该法线性范围0~24mg/L,最低检测限为0.14mg/L,有色化合物至少稳定2h,此法适用于药品生产中的质量监控。     

首例蛇中盐酸克伦特罗残留引起的食物中毒应急检测

目的 对广东省深圳市同一餐馆连续发生的两起食物中毒事件进行流行病学调查并现场取样进行实验室应急检测, 查找中毒原因。方法 样品碱化后用乙酸乙酯提取, 再用稀盐酸反萃取, 萃取的样液pH 调至5.2 后用SCX 固相萃取小柱净化, 分离所得的盐酸克伦特罗经双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生后用GC/MS 联用仪测定, 电子轰击电离源(EI), 选择离子监测(SIM)模式检测辅以全扫描(SCAN)质谱图的NIST 谱库检索匹配确认, 美托 洛尔内标法定量。结果 在食物中毒现场采集的八步蛇肉、血、胆及病人尿液中均检出了盐酸克伦特罗, 浓度分别为1331、463、11200、4.3 μg/kg。后续采集的蛇样品中未再检出盐酸克伦特罗。结论 两起食物中毒是由于食用了含有盐酸克伦特罗的蛇所致, 这种因食用蛇中残留盐酸克伦特罗而引起食物中毒的事件, 在国内外尚属首例。