连翘苷对食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞的抑制作用及机制

目的：探究连翘苷对食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞增殖、周期、凋亡、迁移、侵袭的影响,分析其对这两种细胞的抑制效果及其作用机制。方法：取食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞,使用不同浓度（10、100 μmol/L）的连翘苷处理干预细胞24 h,采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK8）法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭,蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B,PKB）,（也称为AKT）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p-PKB）（也称为p-AKT）、p21蛋白、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）和基质金属蛋白酶9（matrix metallopeptidase 9,MMP9）表达水平。结果：连翘苷对食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞的半数抑制浓度（50% inhibitory concentration,IC50）分别为308.4 μmol/L和322.0 μmol/L。10、100 μmol/L连翘苷可显著抑制食管上皮恶性转变细胞和Eca-109细胞增殖（P＜0.05）,对人食管正常上皮细胞无毒性作用。10、100 μmol/L连翘苷可诱导食管上皮恶性转变细胞和Eca-109细胞周期改变,促进细胞凋亡。10、100 μmol/L连翘苷可显著抑制食管上皮恶性转变细胞和Eca-109细胞迁移及侵袭（P＜0.05）。10、100 μmol/L连翘苷可显著降低食管上皮恶性转变细胞和Eca-109细胞中p-PI3K、p-AKT、Bcl-2和MMP9蛋白的表达水平（P＜0.05）,100 μmol/L连翘苷可显著提高食管上皮恶性转变细胞和Eca-109细胞中p21蛋白的表达水平（P＜0.05）。结论：连翘苷可显著抑制食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与PI3K/AKT通路失活有关。     

连翘叶固体饮料的研制及活性成分测定

目的 以连翘叶、木糖醇、柠檬酸、麦芽糊精为主要原料,开发一种连翘叶固体饮料。方法 通过单因素、正交实验,以优、中、差三个质量等级对产品的色泽、气味、滋味、状态四个方面进行感官评判,通过模糊数学法处理数据,得到连翘叶固体饮料最佳配方。根据固体饮料的颗粒状态和溶解速度,选取固体饮料产品颗粒粒径;直接干燥法测定固体饮料的水分含量;以高效液相色谱法测定固体饮料中连翘苷和连翘酯苷A的含量。结果 连翘叶固体饮料最佳配方为连翘叶提取物4g,木糖醇5g,柠檬酸0.2g,麦芽糊精4g;固体饮料产品颗粒粒径为40目;水分含量为6.1%,符合国标要求;固体饮料中连翘苷和连翘酯苷A的含量分别为0.34%和0.27%。结论 得到的连翘叶固体饮料颗粒饱满,溶解迅速,冲调后呈透明的黄色,气味淡雅,酸甜适口,本实验可为连翘叶固体饮料的开发提供支持。     

小儿解表颗粒中连翘苷含量测定

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定小儿解表颗粒中连翘苷含量的方法。方法采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(22:78),流速1.0 m L/min,检测波长230 nm。结果连翘苷线性范围为5.06~81.04 g(R=0.9999),平均加样回收率为97.60%,RSD=1.3%(n=6)。结论此方法操作简便,快速,准确,可用于小儿解表颗粒的质量控制。     

连翘叶中连翘苷和连翘酯苷A对食用油脂的抗氧化活性

针对连翘叶中提取、分离和纯化的连翘苷和连翘酯苷A进行研究,通过油脂抗氧化实验,分别以油脂的酸价值和过氧化值为参考指标,评价连翘苷和连翘酯苷A的抗氧化活性和VC、柠檬酸对连翘苷和连翘酯苷A的协同增效作用。结果表明：制备得到纯度为93%连翘苷和92%连翘酯苷A,连翘苷和连翘酯苷A对猪油氧化作用均有一定的抑制作用,且随着剂量的增加,抑制效果越明显;其中,连翘酯苷A对油脂氧化的抑制作用远优于连翘苷,效果与阳性对照2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚接近;VC和柠檬酸对连翘苷和连翘酯苷A的抗氧化作用均表现出协调增效作用。     

连翘叶连翘苷提取物对高脂饮食诱导大鼠肥胖的预防作用

目的：研究连翘叶中连翘苷提取物对高脂饮食诱导大鼠肥胖的预防作用。方法：将48 只SD大鼠分为6 组,即空白对照组,模型对照组,连翘苷提取物（本实验室自制,连翘苷质量分数为13.3%）低、中、高剂量组和标准品组。连翘苷提取物低、中、高剂量组分别给予连翘苷提取物0.2、0.4、1.2 g/（kg mb·d）,即连翘苷剂量分别为26.6、53.2、159.6 mg/（kg mb·d）,标准品组给予连翘苷标准品（连翘苷质量分数按98%计）54.3 mg/（kg mb·d）,与中剂量组连翘苷剂量相同。空白对照组给予基础饲料,其余各组给予高脂饲料,连续灌胃6 周,观察连翘苷提取物干预后,肥胖大鼠摄食量、体质量、肥胖指数（Lee’s指数）、脂肪系数和血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、总胆汁酸（total bile acid,TBA）、瘦素（leptin,LP）、游离脂肪酸（free fat acid,FFA）水平以及脂肪组织病理切片。结果：模型对照组的TC、LDL-C、TBA、LP、FFA水平均显著高于空白对照组（P＜0.05）;脂肪组织病理结果显示,模型对照组与空白对照组相比,脂肪细胞数量减少,脂肪充盈,细胞膨大,且脂肪细胞当量直径、周长和面积显著大于空白对照组（P＜0.05）;并且内脏脂肪质量及其系数、Lee’s指数、体质量均显著大于空白对照组（P＜0.05）,表明高脂饮食诱导大鼠肥胖成功。与模型对照组相比,连翘苷提取物能够降低肥胖大鼠的TC、LDL-C、LP、FFA水平;脂肪组织病理结果较模型对照组有所改善,可见脂肪细胞数量增加,脂肪细胞变小,但低剂量组效果不明显,高剂量组效果最显著。与模型对照组相比,低剂量组脂肪细胞的面积显著减小（P＜0.05）,中剂量组脂肪细胞的周长和面积显著减小（P＜0.05）,高剂量组脂肪细胞的当量直径、周长和面积显著减小（P＜0.05）。连翘苷提取物还能降低肥胖大鼠的内脏脂肪质量及其系数、Lee’s指数、体质量,且高剂量组效果更显著,中剂量组与标准品组对肥胖大鼠干预效果相当。结论：连翘苷提取物能够预防高脂饮食诱导的大鼠肥胖,连翘叶中的连翘苷是其功能成分。     

高效液相色谱法测定不同产地连翘花中 四种有效成分含量

目的 建立高效液相色谱法测定不同产地连翘花中芦丁、连翘酯苷A、连翘苷、松酯酚的含量。方法 采用Symmetry C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长230 nm,柱温25 ℃。结果 不同产地的连翘花之间各成分的含量差异显著,其中连翘酯苷A在各样品中含量最高,芦丁含量次之,连翘苷含量最少;其中菏泽产的样品连翘酯苷A含量高达119.38 mg/g,连翘苷的含量达4.71 mg/g;临沂产的样品芦丁含量最高达75.64 mg/g;日照、青岛和烟台的样品中松脂酚含量较高且相差不大,分别是25.41、24.45、23.60 mg/g。结论 12个产地连翘花中连翘酯苷A的含量远远高于药典规定的最低含量要求。但连翘花中连翘苷的含量较低。     

连翘苷快速提取纯化工艺研究

连翘是最广泛使用的传统中药之一,具有抗菌、抗病毒、抗炎和抗氧化活性等重要的药理作用,而连翘苷是连翘的主要生物活性成分。为了从连翘叶中快速简便地提取、分离和纯化得到纯度较高的连翘苷,试验采用无水乙醇和体积浓度85%乙醇回流提取,大孔树脂柱层析和石油醚萃取的方法分离,重结晶法进行纯化,经不同组合试验以确定最佳制备工艺。通过HPLC测定比较所得连翘苷的含量、纯度,最终确定了以无水乙醇回流提取,石油醚萃取分离,重结晶纯化的工艺流程,通过该方法可以得到纯度达90%的连翘苷。     

响应面法优化微波辅助提取连翘叶中连翘苷工艺

通过单因素试验研究乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间、提取功率和提取次数6因素对连翘叶中连翘苷得率的影响.在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken Design(BBD)中心试验设计研究响应值以及最佳变量的组合,得出连翘叶中连翘苷提取的二次回归方程.通过响应面法综合评价提取连翘叶中连翘苷的最佳条件为80％vol乙醇,料液比1∶8,90℃、400W下微波5min,在此条件下的连翘苷得率为0.2904％.