盐析法联合离子液体双水相纯化木瓜蛋白酶

本实验以海南产番木瓜为研究对象,采取盐析法联合离子液体双水相对其富含的木瓜蛋白酶进行提取纯化。以不同饱和度的(NH_4)_2SO_4对粗酶液进行盐析,通过实验结果分析,确定了以饱和度分别为20%和45%的两步盐析法的最佳条件。然后再进行双水相萃取,通过单因素试验结果设计3因素3水平的响应面试验,优化双水相萃取条件为离子液体[C_4mim]N(CN)_2质量分数29.76%、(NH_4)_2SO_4质量分数16.08%、pH 8.18,在此最优条件下木瓜蛋白酶萃取率为89.01%,酶活力回收率为86.72%,所得到木瓜蛋白酶比活力为1 056 U/mg,纯化倍数达到9.6倍。然后对实验产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,经纯化的酶中杂条带明显减少,验证了分离纯化的效果。     

壳聚糖/卵磷脂复合微球固定木瓜蛋白酶的研究

以壳聚糖和卵磷脂为材料,采用乳化-交联法制备壳聚糖/卵磷脂复合微球,并用光学显微镜和红外光谱对微球进行表征;再以此微球作为载体固定木瓜蛋白酶,以固定率为指标,应用正交试验法优选固定化酶的制备工艺,并对固定化酶的半衰期、米氏常数(Km)、操作稳定性进行研究.结果表明,制备的壳聚糖/卵磷脂复合微球呈完整的圆球形或椭球形;固定化酶的优化制备工艺为:m(壳聚糖)=250 mg,m(壳聚糖):m(卵磷脂)=1:2,V(戊二醛水溶液)=300 μL,m(木瓜蛋白酶)=20 mg,此时制备的固定化酶的固定率达61.94％,半衰期为86.27 h,米氏常数为6.37 mg/mL,固定化酶有很好的操作稳定性.     

木瓜蛋白酶在[Cnmim]BF4-NaH2PO4双水相体系中的分配行为

为了研究木瓜蛋白酶在[Cnmim]BF4-NaH2PO4双水相体系中的分配行为,在298.15 K条件下利用浊点法测定了[Cnmim]BF4-NaH2PO4双水相体系的双节线和液液相平衡数据,建立了木瓜蛋白酶在该体系中的三维分配模型。利用Merchuk方程、Othmer-Tobias方程和Bancroft方程分别关联了双节线数据、液液相平衡数据,拟合度分别在0.975、0.994以上,结果满意。木瓜蛋白酶分配系数的对数与该体系上相的离子液体浓度和下相的盐浓度相关度都较高,故通过Matlab建立了三者之间的分配模型,实验值和预测值之间的相对偏差均在5%以内,表明该模型能有效地预测木瓜蛋白酶在[Cnmim]BF4-NaH2PO4双水相体系中的分配行为。     

Effect of papain‐hydrolysed casein peptides on the fermentation kinetics,microbiological survival and physicochemical properties of yoghurt

The objective of this study was to determine the effect of different molecular mass papain‐hydrolysed casein peptides (PCP) on the growth of lactic acid bacteria (LAB) (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus and Streptococcus thermophilus in 1:1 ratio) and on the fermentation kinetics, microbiological survival and physicochemical properties in yoghurt. The fraction of PCP4 (<3 kDa) exhibited the highest growth‐promoting activity on the strains. The value of T_pH4.5 (time necessary to reach pH 4.5) of yoghurt fortified with PCP4 reduced from 5.21 to 4.29 h, and the total counts of LAB present in the final products increased from 8.29 to 8.42 log CFU mL^?1 with the addition of PCP4 at nitrogen replaced ratio of 3% (w/w). Moreover, the yoghurt exhibited lower postacidification power, higher viscosity and sensory evaluation scores than did the control product during storage period.     

两相溶剂体系酶促合成Aspartame前体的研究

本文报道在两相溶剂体系中利用木瓜蛋白酶催化合成Ａｓｐａｒｔａｍｅ前体Ｚ－ＡＰＭ的研究。实验结果表明，木瓜蛋白酶在水－正丁醇两相体系具有较好的催化活性，在底物比为１：１，温度３７℃条件下连续反应７２ｈ，Ｚ－ＡＰＭ的产率可达６２．８％。     

酶制剂在消除酿造酱油二次沉淀的应用试验

为了消除酿造酱油的二次沉淀,进行了木瓜蛋白酶在消除酿造酱油二次沉淀的实验,并对处理后的酱油的吸光度和氨基酸态氮等进行测定,结果表明,木瓜蛋白酶最佳加入量为每200mL酱油中加入浓度为0.1%的酶制剂0.3～0.4mL,最佳静止时间为2d。     

响应曲面法对壳聚糖亚铁离子配合物酶解的优化

以木瓜蛋白酶降解壳聚糖亚铁离子配合物(CTS-Fe2 )是制备低聚壳聚糖,提高产品品质的—新途径.本文以响应曲面法研究了pH,温虎底物浓度和酶底比这四个工艺参数对木瓜蛋白酶降解壳聚糖亚铁离子配合物反应体系中粘度下降率(VDP)的影响,建立了该反应的二次多项式模型,并通过模型计算得到了最优酶解工艺参数:pH4.46,温度为44.95℃,底物浓度为1.97%,酶底比为1.75%.