田蓟苷下调TLR4/Myd88/NF-κB信号通路抑制NLRP3炎症小体和炎症反应

本研究通过脂多糖(lipopolysaccharide, LPS) 诱导RAW264.7细胞建立炎症反应模型, 探讨田蓟苷(tilianin) 对炎症反应的影响及其作用机制。通过CCK-8 (cell counting kit-8) 实验检测细胞活力, 酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA) 检测肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α) 和白细胞介素6 (interleukin 6, IL-6) 含量; Griess试剂法检测一氧化氮(nitric oxide, NO) 含量; 2', 7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2', 7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, DCFH-DA) 荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen radical, ROS) 水平; Western blot检测Toll样受体4 (Toll-like receptor 4, TLR4)、髓样分化因子88 (myeloid differentiation primary response gene 88, Myd88)、核转录因子-κB p65 (nuclear factor-κB p65, NF-κB p65)、磷酸化核转录因子-κB (phospho-nuclear factor-κB, p-NF-κB)、NF-κB抑制蛋白α (inhibitor of NF-κB α, ⅠκBα) 和磷酸化NF-κB抑制蛋白α (phospho-inhibitor of NF-κB α, p-ⅠκBα) 的蛋白表达水平; qRT-PCR法和Western blot检测Nod样受体蛋白3 (Nod-like receptor protein 3, NLRP3)、IL-1β前体(pro-IL-1β)、IL-18前体(pro-IL-18) 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1前体(pro-caspase-1) 的mRNA和蛋白水平。免疫荧光染色检测NF-κB p65核转位; 使用TLR4抑制剂resatorvid (TAK242) 进一步验证田蓟苷对TLR4/Myd88/NF-κB信号通路的影响。结果显示, 田蓟苷显著降低了RAW264.7细胞上清中TNF-α、IL-6和NO水平以及细胞内ROS含量。田蓟苷降低了TLR4、Myd88、p-NF-κB p65和p-ⅠκBα蛋白表达水平, 抑制了NF-κB p65的核转位, 同时显著降低了NLRP3、pro-IL-1β、pro-IL-18和pro-caspase-1的蛋白表达水平以及NLRP3和pro-IL-1β的mRNA水平。上述研究结果表明, 田蓟苷能明显减轻LPS诱导RAW264.7细胞产生的炎症反应, 其机制可能与下调TLR4/Myd88/NF-κB信号通路从而抑制NLRP3炎症小体有关。     

SPG膜乳化法制备田蓟苷微球

目的采用SPG膜乳化技术制备田蓟苷微球,并对其理化性质进行考察。方法以聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly (lactic-co-glycolic acid),PLGA]为载体,球径、平均粒径、微球不粘黏程度为考察指标,通过单因素以及星点设计,筛选出制备微球的最佳工艺,然后包载药物田蓟苷,制备田蓟苷微球,最后考察其理化性质。结果经最佳工艺制得的微球平均粒径为(20.72±2.95)μm,包封率大于70%,载药量大于1.5%,经扫描电镜观察,微球表面光滑圆整,差示热分析(differential scanning calorimeter,DSC)结果表明微球中包裹药物田蓟苷。结论该方法简便易行,制备的微球粒径均匀,符合微球制备要求。