冷冻保护剂添加-去除过程对猪MII期卵母细胞损伤研究

在卵母细胞的低温保存过程中,冷冻保护剂的添加与去除是一个必不可少的步骤,但高浓度的冷冻保护剂会对细胞造成渗透损伤和毒性损伤。为研究冷冻保护剂添加与去除过程对猪MII期卵母细胞的损伤,本文采用传统的方法(一步法、两步法)来添加和去除冷冻保护剂,探究冷冻液、解冻液、稀释液对细胞存活率的影响。实验结果表明:在冷冻保护剂添加-去除过程中,卵母细胞的渗透损伤主要发生在卵母细胞从冷冻液转移至解冻液,以及保护剂去除阶段;解冻液浓度与平衡时间对卵母细胞存活率有很大影响;卵母细胞保护剂的去除与添加过程是相关的,解冻液浓度和平衡时间的选择依赖于细胞在冷冻液中的浓度和平衡时间。此研究结果将为猪MII期卵母细胞的低温保存方案提供参考。     

卵母细胞在微流控装置加载保护剂过程中的渗透行为模拟及损伤评估

卵母细胞在冷冻保护剂加载过程中受到的渗透损伤和毒性损伤会影响细胞的存活率,针对这一情况,通过软件模拟来了解卵母细胞在不同冷冻保护剂加载情况下的渗透行为,以寻求合适的加载方案使得卵母细胞所受的损伤最小。利用MLAB编程分别模拟出卵母细胞在四步法、一般线性法、凸型线性法以及凹型线性法加载冷冻保护剂的方案下的渗透行为;综合积累性渗透损伤AOD、积累性毒性损伤J、归一化体积V/V0三项参数来评估卵母细胞受到的损伤。结果表明,当胞外冷冻保护剂为乙二醇时,采用凹型线性加载法加载冷冻保护剂对卵母细胞造成的损伤最小。