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目的构建珠江口水产养殖动物源的乳酸菌资源库,开发一套较为完善的高通量筛选优良乳酸菌的方法。方法采集珠江口水域多种水产动物的肠道,研磨,稀释涂布于含溴甲酚紫及碳酸钙的MRS平板上,挑取有溶钙圈的单菌落,进行过氧化氢酶实验以排除产气菌。提取细菌的基因组作模板, PCR扩增16S rDNA基因,根据测序结果进行同源性比对分析确定乳酸菌的种属,建立乳酸菌库。进一步借助96孔板培养技术,将乳酸菌与水产致病菌(指示菌)混合培养,根据对指示菌的抑菌效果,确定具有优良抑菌活性的乳酸菌。结果从水产动物肠道中筛选出乳酸菌14属71种1638株,获得了15株对常见水产养殖致病菌(嗜水气单胞菌、创伤弧菌、副溶血弧菌等)具有高效广谱抑制效果的菌株。结论本研究建立的乳酸菌菌种资源库,弥补了国内目前水产养殖来源乳酸菌菌株储备缺乏的现状,有望提供各类性能优良菌株用于渔业、畜牧业和食品生产。 相似文献
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以实验室从水产动物白斑鱼肠道中分离鉴定的一株唾液乳杆菌SJH-8为研究对象,根据Class IIb类抗菌肽ABP-118结构基因序列设计引物,以SJH-8基因组为模板可扩增出一段大小为702bp的基因片段,经测序和分析得出Salivaricin SJH-8结构基因与ABP-118的结构基因相似度达95%以上。根据基因序列推测出组成Salivaricin SJH-8的α肽和β肽的氨基酸序列,并进行化学合成。当二者分别存在时无抑菌活性,而将二者等比例混合时可表现出对革兰氏阳性菌的广谱抑菌活性。该细菌素具有较强的热稳定性和p H稳定性,可被胰蛋白酶水解;且经溶血实验证明该细菌素基本不会造成细胞溶血毒性,因此是一种环境友好型抗菌物质,具有作为食品或饲料防腐剂的潜力。 相似文献
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细胞电穿孔技术是指通过施加一定的电场强度可逆地击穿细胞膜,在细胞膜上形成小孔或
通路,从而使遗传物质引入细胞内。传统的细胞电穿孔装置往往需要几百伏到几千伏的电压,操作
十分危险。该研究采用电绝缘的聚氯乙烯(PVC)薄膜,制作了一种电极间距为 80 μm 的小间距电穿
孔装置,并且可以进行高通量操作。经测试,所提出的小间距电穿孔装置实现细胞电穿孔所需的电
压比 1 mm 标准电击杯降低了一个数量级,极大地提高了实验操作的安全性。高通量操作也极大地
提高了实验效率,但由于电穿孔转化效率比 1 mm 标准电击杯低了一个数量级,因此实验参数需要
进一步优化。 相似文献
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