促凋亡蛋白BID多克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗BID的多克隆抗体,用于检测凋亡信号转导过程中BID蛋白的表达。方法采用PCR技术合成编码BID特异性肽段的基因,构建GST融合基因表达载体,在E.coli BL21中诱导表达GST-BID多肽的融合蛋白,经Glutathione Sepharose 4B纯化后免疫家兔,免疫血清经纯化后,得到抗BID的多克隆抗体,经Western blot鉴定其特异性。结果通过PCR扩增获得了BID肽段的编码基因;pGEX-6P-1-BID多肽重组质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确;在E.coli BL21中表达了GST-BID多肽融合蛋白;纯化后蛋白纯度达95%;制备的抗BID多克隆抗体能够特异地识别BID蛋白。结论所制备的抗BID多克隆抗体可特异性检测BID蛋白。     

人BimS蛋白的原核表达及纯化

目的克隆人BimS基因,原核表达并纯化目的蛋白。方法用PCR方法从HeLa细胞cDNA文库中扩增人BimS基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经GST亲和层析纯化。结果PCR扩增得到327bp的DNA片段,重组表达质粒pGEX-6P-1-BimS经双酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。表达的目的蛋白相对分子质量约37000,表达量约占菌体总蛋白的30%,纯化后纯度可达93%。结论已成功克隆并原核表达了人BimS基因,得到纯度较高的BimS蛋白,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。     

芋头多糖的提取及生物活性的研究

对芋头水溶性多糖的提取工艺进行了探索,通过以料液比、提取温度、提取时间为3个因素,进行了L9(33)正交实验。采用体外实验研究经过处理的芋头多糖对超氧阴离子、羟自由基清除作用以及对H2O2诱导的红细胞氧化溶血的抑制作用。结果表明,料液比显著影响水溶性多糖的提取率,最佳提取工艺为料液比1∶6、提取温度70℃,提取时间6h。芋头多糖对超氧阴离子的清除作用较弱,对羟自由基具有很强的清除作用,芋头多糖能够抑制H2O2诱导的红细胞氧化溶血。     

莲藕多糖的提取及生物活性的研究

对莲藕水溶性多糖的提取工艺及体外生物活性进行了探索。采用正交实验设计,得到了莲藕多糖的最佳提取条件为料液比为16∶、浸提温度为90℃、浸提时间为6h,采用体外实验研究莲藕多糖对超氧阴离子、羟自由基清除作用以及对H2O2诱导的红细胞氧化溶血的抑制作用。结果表明:莲藕多糖对超氧阴离子的清除作用较弱,对羟自由基具有很强的清除作用,并能有效抑制H2O2诱导的红细胞氧化溶血。     

人Bik基因的克隆、表达与纯化

目的克隆人Bik基因,并进行表达及纯化。方法用PCR方法从HeLa细胞cDNA文库中扩增Bik基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物进行GST亲和层析纯化。结果PCR扩增得到483bp的DNA片段,重组质粒pGEX-6p-1-Bik经酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。表达的重组蛋白占菌体总蛋白的38%,纯化后蛋白纯度达96%。结论已成功克隆并利用原核表达系统表达了人Bik基因,为进一步研究Bik蛋白结构和功能奠定了基础。