杀镰刀菌素对枯草杆菌致死作用的研究

通过检测OD600、抑菌圈和发酵液澄清度的变化，考察了杀镰刀菌素对枯草杆菌的抑制杀菌作用。实验利用HPF荧光证实杀镰刀菌素致使枯草杆菌细胞内产生氢氧自由基（·OH），添加抗坏血酸（VC）减少·OH的形成，提高枯草杆菌的存活率。应用基因芯片对5min转录变化分析发现sigW调控的基因及胞膜相关基因高表达，用透射电镜观察发现出现空囊体及大量细胞碎片。     

电流型介体酶电极

本文介绍了目前研究较多的几种电子介体，如二茂铁及其衍生物、钌及其化合物、铁氰酸盐、酞菁钴染料、金属卟啉、醌类、吩恶嗪染料、吩噻嗪染料、吖嗪染料、有机超导材料的电子供体四硫富瓦烯与电子受体四氰基奎诺二甲烷及其导电有机盐等在电流型酶电极研制中的应用与发展过程。     

RsrA-CFP融合蛋白的克隆表达及圆二色性分析

以天蓝色链霉菌M145基因组作模板,扩增σR(sigR)的anti-sigR因子基因rsrA,得到了333 bp基因;以质粒pECFP-N1作模板,扩增青色荧光蛋白基因cfp,得到了744 bp基因.将两个基因融合串联,构建rsrA/cf p/pET-28a(+)融合表达质粒.利用荧光检测技术,确定大肠杆菌BL21 (DE3)在OD600为0.5时,用1 mmol·L-1 IPTG进行诱导能大量表达融合蛋白RsrA-CFP.用镍柱亲和层析分离纯化RsrA-CFP蛋白,并用SDS-PAGE鉴定其分子量为40 kD左右.利用圆二色性初步测定RsrA-CFP蛋白的CD值,经CDNN软件分析得到:螺旋结构占32.2％、平行结构占8.0％、反向平行结构占9.3％、β折叠占16.7％、无规则卷曲占34.4％,为RsrA蛋白的功能研究奠定了基础.     

一种酰基高丝氨酸内酯酶筛选方法的建立

以pLuxRI2质粒为模板,扩增群体感应信号分子合成酶基因luxI,构建luxI/pET-28a(+)/BL21(DE3),合成3OC6-HSL信号分子,解决了信号分子价格昂贵且不易保存的难题。在此基础上,建立了一种酰基高丝氨酸内酯酶筛选方法,并对筛选体系进行优化,最终确定信号分子合成酶的诱导时间为6 h、含有信号分子的培养液的体积为50μL、CV026报告菌的过夜培养物的体积为20μL。该方法可用于酰基高丝氨酸内酯酶的筛选,并且对不同酶活性的酰基高丝氨酸内酯酶具有很好的区分度。     

两株红色糖多孢菌在不同氮源培养条件下的代谢比较

转录组芯片和凝胶阻滞(EMSA)等实验发现,在红霉素高产菌株中,与氮源代谢相关的基因(如glnR、glnB)、铵盐与寡肽转运蛋白基因等在高产菌株中被强烈抑制,可推测在高产菌株和野生菌株中,氮源代谢存在很大差异,并与红霉素合成存在紧密的联系.通过测定4种单一氮源培养条件下的野生模式菌(M菌)和高产菌(A菌)体内的有机酸和氨基酸含量来比较其代谢情况.结果表明,在同一菌株内及不同菌株间,与氮源代谢直接相关的α-酮戊二酸、谷氨酸、谷氨酰胺的含量及与碳源代谢相关的有机酸如苹果酸、柠檬酸的含量在不同的培养基内呈现相反的趋势.     

3种抽提隐孢子虫卵囊DNA方法的比较

采用FTA filter paper、Fast DNA(R) SPIN for Soil Kit、UNIQ-10柱式基因组抽提试剂盒3种方法制备样品DNA模板,根据隐孢子虫SSU rRNA设计内外两对引物进行巢式PCR扩增.3种方法检测的灵敏度分别为1, 10,100 个/mL. 结果表明:FTA filter paper方法简便、特异性强、灵敏度高.     

蛋白质芯片分析在呋喃唑酮检测中的应用研究

目的：研究了蛋白质芯片技术应用于呋喃唑酮代谢物（AOZ）检测的可行性。方法：以免疫竞争原理建立蛋白芯片体系,通过各项影响因素的优化,得出了稳定的竞争曲线。结果：该蛋白芯片能实现对AOZ高通量的快速、准确的检测,检测限达到0.1ng/mL。结论：蛋白质芯片技术应用于食品抗生素检测有独特的优势,可以在该领域获得广泛的应用。     

微珠芯片免疫法测定食品中氯霉素残留

采用微珠芯片免疫分析法快速定量检测食品中的氯霉素残留.玻璃微珠经过表面化学修饰后形成氨基化表面,在碳二亚胺(EDC)催化作用下固定琥珀酸氯霉素,随后加入氯霉素单克隆抗体和氯霉素标准品或待测样品的混合物,待抗体抗原完全反应后加入荧光标记二抗示踪.绘制氯霉素浓度与荧光信号强度的标准曲线,然后根据标准曲线对待测样品中氯霉素进行定量分析.方法检测限为0.01 μg稬-1;在0.05 μg稬-1及0.2 μg稬-1两个添加水平,加标回收率分别为92%～l1O%和92.5～108.5%;重复性实验CV分别为6.33%和5.99%;重现性实验CV分别为10.11%和9.12%.该方法具有良好的灵敏度、准确度和精密度,符合快速、高通量检测氯霉素残留的要求,并为实现介现流控免疫分析提供了基础.     

无胶筛分毛细管电泳对SNP分型的初步研究

建立了非涂层无胶筛分毛细管电泳对多个SNP位点快速分型的方法.采用长度为20 bp和40 bp的DNA片段为实验时象,对筛分介质的种类及其质量浓度、电泳缓冲溶液的浓度及其pH值、分离电压进行了优化,确定最合适的分离条件如下:6%PDMA为筛分介质,缓冲溶液TAPS浓度为100 mmol·L-1、pH值为8,分离电压为15 kV.并在此条件下成功地对3个SNP位点进行分型.结果表明,以PDMA为筛分介质的非涂层无胶筛分毛细管电泳方法用于SNP分型是可行的,而且具有特异性强、灵敏度高、重复性好、操作简单快速、结果直观等优点.     

新型流控式平台对猪肉中盐酸克伦特罗残留的检测

研究了一种基于环氧化玻璃微珠表面竞争性免疫反应的微珠芯片体系,并成功地实现在线实时检测瘦肉精——盐酸克伦特罗。一种经过环氧化试剂1,4-丁二醇二缩水甘油醚修饰的环氧化玻璃微珠能够有效固定盐酸克伦特罗的蛋白BSA的偶联物,这些经过固定全抗原的微珠被导入微通道,循环的反应液中的标准品或实际样本抗原和微珠上抗原竞争结合反应液中一抗,待抗原抗体反应完全后加入荧光标记二抗示踪,便可以绘制标准曲线,用于实际样本定量检测。本系统取得了很好的检测效果,最低检测限达到0.3μg/L,检测范围为0.39～7.97μg/L,并且一次检测时间不超过45min。结果证明,本微珠芯片分析体系不仅具有高的特异性和灵敏度,而且制作廉价,操作简单。