α1b型基因工程干扰素大规模纯化工艺的建立

应用α1b型基因工程干扰素大规模纯化工艺制备了3批干扰素，每批使用16kg菌体，其干扰素平均得率和纯化倍数分别为11．55％和1659倍。按照WHO规程的要求，其纯度经SDS—PAGE银染色法检定，呈一条带，其分子量约为20KD，纯度在98．97％以上。用HPLC检定纯度均为单一峰形，纯度在96％以上。其它检定项目如残余DNA和鼠IgG含量、热原、水分和安全试验等均符合规程要求。     

人α_1型基因工程干扰素的中间试制

带有杂交质粒pBV867的大肠杆菌BMH 71-18株,用高密度发酵培养法进行发酵,3批中试的平均菌产量为100.25克/升,粗制干扰素的表达量平均为8.39mg/升。3批粗制干扰素的数量分别为35000,30000和36000 ml。经初步提纯,分别浓缩10.4、10和11.29倍,比活性上升10、33和30倍,初步提纯的得率为34.33％。经高度提纯、浓缩23.8、16.7和26.1倍,比活明显增加至24.38、20.80和21.43×10~6 IU/mg蛋白,平均得率为35.92％,总得率为11.82％,平均提纯倍数为1757倍。 3批中试产品按WHO规程的标准进行检定,经SDS-PAGE银染色法测定,呈一条带,其分子量约为21000,无论在还原或非还原的条件下干扰素纯度均在95％以上。用HPLC检定均为单一峰形,纯度在95％以上。其它检定项目如等电聚焦、效价、热原、残余DNA、鼠IgG含量测定和全波长扫描等均合乎规程要求。     

重组人干扰素-γ的复性方法在不同规模中的应用

目的 观察重组人干扰素－γ复性方法在不同规模中应用效果。方法 用高压匀浆法破碎工程菌, 提取包涵体,经变性剂溶解后快速稀释进行复性。结果 在实验研究、中试、扩大试制、试生产和大规模生产中,生 物活性恢复良好,纯度也有提高。结论 此种复性方法简单、快速,活性提高３．０５～５．６５倍。