流感疫苗诱导Hela细胞凋亡与免疫调节效应

目的观察流感疫苗诱导Hela细胞凋亡与免疫调节效应。方法将流感疫苗作用于Hela细胞,采用MTT比色法和流式细胞仪检测疫苗对Hela细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响;同时用MTT法检测疫苗对小鼠脾细胞增殖的影响;采用结晶紫、中性红染色及MTT法,分别检测脾细胞诱导上清中IFN-γ、IL-2和TNF-α的分泌情况。结果一定浓度流感疫苗能够抑制Hela细胞增殖,促进细胞凋亡,凋亡率可达58·37%;还可促进小鼠脾细胞增殖及Th1型细胞分泌IFN-γ。结论流感疫苗能够抑制Hela细胞增殖,此作用可能是通过诱导Hela细胞凋亡、调节免疫细胞增殖及IFN-γ的分泌而实现的。     

PLC—打印机接口

西德西门子公司的SIMATIC S5—115U可编程序控制器(以下简称PLC),在国内已被好几家钢铁企业采用,用于高炉原料的称量、补偿及上料控制,煤气除尘,轧钢等控制系统。实践证明,PLC用于工业控制,稳定可靠,抗干扰能力强,现场调试方便。但亦有先天不足之处,其中最突出的就是在线打印功能薄弱。如在高炉上料控制系统中,要想把各种人炉料的数据按现场要求的格式打印出来,光靠PLC本身是不可能的。一般采用以下办法:利用PLC的通讯模板CP525(价值约2万元),将数据传送给别的微机系统(如IBM-PC,价值约2万元),由该微机系统控制打印机打印及画面显示。这种办法对于大系统是必要的,因大系统数据繁杂,格式多样,画面也很多。但对于小系统就很     

SIAF对病毒性心肌炎模型鼠的治疗作用

目的 研究梅花鹿免疫细胞活性因子(SIAF)对病毒性心肌炎的治疗作用。方法 采用柯萨奇B3型病毒(CB_3 V)性心肌炎小鼠模型,检测心肌酶、心电图,观察心肌病理改变及死亡率。采用MTT法测定淋转及NK细胞毒活性。结果 SIAF能明显改善心肌损伤模型鼠的心电图及心肌病理损害;降低心肌酶含量;调节淋转及NK细胞毒活性。结论 SIAF对病毒性心肌炎具有一定治疗作用。     

人源抗菌肽LL-37/hCAP-18真核表达载体的构建及其在人乳腺癌细胞MCF-7中的表达

目的构建人源抗菌肽LL-37/hCAP-18的真核表达载体,并在人乳腺癌细胞MCF-7中进行表达。方法以重组质粒pcDNA4.0-LL-37为模板,采用PCR法扩增LL-37/hCAP-18基因,连入pEGFP-c1质粒,构建真核表达载体pEGFP-c1-LL-37,瞬时转染人乳腺癌细胞MCF-7,采用激光共聚焦显微镜观察重组质粒的转染效率,RT-PCR法检测目的基因的表达。结果所构建的抗菌肽LL-37/hCAP-18真核表达载体经双酶切和测序证明构建正确,在瞬时转染MCF-7细胞48h后,目的基因转染效率较高,约为40%,RT-PCR结果显示,重组质粒转染的细胞可扩增出339bp的目的基因条带。结论已成功构建了人源抗菌肽LL-37/hCAP-18的真核表达载体,并在人乳腺癌细胞中获得表达,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定了基础。     

人源阳离子抗菌肽hCAP-18真核表达载体的构建与表达

目的构建人源性阳离子抗菌肽hCAP-18的真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18,转染真核细胞,并检测其表达。方法以正常人外周血中性粒细胞的总RNA为模板,用RT-PCR技术钓取hCAP-18编码序列的全长cDNA,并克隆至pcDNA4/Myc-His真核表达载体上,转染真核细胞株HeLa。RT-PCR及Western blot方法检测目的基因的表达。结果所构建的真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18,经酶切鉴定所释放片段大小与预期相符,基因序列与GenBank上登录的序列一致,目的基因在转染细胞中获得高水平表达。结论已成功构建真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18,并在转染细胞中高效表达。     

梅花鹿免疫细胞活性因子对乙醇型胃粘膜损伤模型鼠的保护作用

目的　观察梅花鹿免疫细胞活性因子 (SIAF)对小鼠乙醇型胃粘膜损伤的保护作用。方法　制备小鼠乙醇型胃粘膜损伤模型 ,测定溃疡指数 ,观察胃的出血情况 ,免疫组化染色检测胃粘膜EGFR的表达 ,用酶法测定血清中NO的含量。结果　SIAF组的溃疡指数、胃出血情况与模型组相比 ,差异均有显著意义。SIAF组小鼠损伤周围胃粘膜EGFR表达与模型组相比明显增强。该组小鼠血清NO含量与模型组相比也明显增高。结论　SIAF具有显著的保护此种胃粘膜损伤的作用     

携带人白细胞介素-1受体拮抗剂基因腺病毒质粒的构建

目的构建携带人白细胞介素-1受体拮抗剂(hIL-1Ra)基因重组腺病毒质粒。方法用EcoRⅤ和HindⅢ双酶切质粒pcDNA3-hIL-1Ra,获得hIL-1RacDNA片段,并定向连接在pShuttle-CMV穿梭载体上,构建穿梭质粒pShuttle-CMV/hIL-IRa。经PmeⅠ酶切线性化,穿梭质粒pShuttle-CMV/hIL-1Ra与超螺旋腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,二质粒在细菌内同源重组,得到重组pAd/hIL-1Ra腺病毒质粒。脂质体介导pAd/hIL-1Ra质粒转染HEK293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒,经反复感染HEK293细胞扩增病毒后,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,并测定病毒颗粒数、纯度及滴度。结果经PCR鉴定、限制性酶切分析及序列测定,证明已正确构建重组pShuttle-CMV/hIL-1Ra穿梭质粒和重组pAd/hIL-1Ra腺病毒质粒。扩增纯化后,重组腺病毒颗粒数为1.19×1011OPU/ml,A260/A280为1.279,滴度为3.6×109CCID50/ml。结论已成功构建重组腺病毒质粒pAd/hIL-1Ra,为hIL-1Ra基因在腺病毒载体介导下的免疫抑制治疗研究奠定实验基础。     

靶向高迁移率族蛋白A1基因RNA干扰真核表达载体的构建

目的构建针对人高迁移率族蛋白A1(HMGA1)基因的RNA干扰真核表达载体,为研究HMGA1基因在肿瘤细胞中的作用奠定实验基础。方法设计合成特异性针对人HMGA1基因的寡核苷酸序列,梯度退火后,与pU6mRFP载体连接,构建重组载体,转染人肝癌细胞SMMC-7721。通过激光共聚焦显微镜观察红色荧光,估测转染效率,RT-PCR法检测转染细胞HMGA1mRNA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果DNA测序证实,成功构建了特异性HMGA1siRNA真核表达载体,转染后72h,转染效率为40%左右。所构建的载体能够特异性沉默转染细胞HMGA1基因的表达。转染细胞HMGA1基因沉默后,细胞凋亡率(27·86%±2·44%)明显高于空载体对照组和SMMC-7721对照组(分别为2·82%±2·39%和2·04%±0·70%),G0-G1期细胞百分数(77·73%±1·78%)明显高于空载体对照组和SMMC-7721对照组(分别为42·19%±3·28%和39·23%±3·63%),G2-S期细胞百分数(22·27%±1·78%)明显低于空载体对照组和SMMC-7721对照组(分别为57·81%±3·28%和60·77%±3·63%)。结论成功构建了HMGA1的RNA干扰真核表达载体。     

梅花鹿免疫细胞活性因子的免疫调节效应

目的 研究梅花鹿免疫细胞活性因子拮抗免疫抑制作用。方法 制备环磷酰胺的体外细胞抑制模型及小鼠抑制模型。采用MTT比色法观察梅花鹿免疫细胞活性因子对环磷酰胺造成体外免疫抑制及小鼠抑制模型的调节效应。结果 梅花鹿免疫细胞活性因子能显著地调节环磷酰胺造成的体外抑制,对小鼠抑制模型也具有显著的调节作用。结论 梅花鹿免疫细胞活性因子是一种有效的免疫调节剂。     

肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体的构建及其在A549细胞中的表达

目的构建肿瘤抑制基因WWOX的真核表达载体,并观察其在人肺腺癌细胞A549中的表达。方法采用RT-PCR法,从正常人胚肾细胞HEK-293中钓取WWOX基因,将其克隆至pMD18-T载体上,测序后定向连接到真核表达载体pEGFP-C1中,构建真核表达载体pEGFP-C1-WWOX,并用脂质体转染至A549细胞中,采用共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)与WWOX的融合蛋白在A549细胞中的表达。结果测序结果显示,RT-PCR法获得的WWOX全编码序列与GenBank中报道的序列一致。真核表达载体pEGFP-C1-WWOX转染A549细胞48h后,共聚焦显微镜观察到细胞中有绿色荧光呈现,RT-PCR观察到WWOX基因得到有效转录。结论已成功构建了肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体pEGFP-C1-WWOX,并在A549细胞中表达了WWOX和GFP融合蛋白。